一种多功能摇瓶装置的研制及在多黏杆菌发酵中的应用

研制一种多功能摇瓶装置,利用该摇瓶装置与传统摇瓶分别对多黏杆菌进行发酵试验,结果显示多功能摇瓶装置取样方便,又能通过补料装置进行补料,菌体质量浓度、产物质量浓度及单位质量葡萄糖转化成多黏菌素量都有较大幅度的提升。     

不同氨基酸对泰万菌素发酵影响的研究

通过单因素试验考察了泰万菌素发酵培养基中不同氨基酸种类对其发酵过程的影响,并利用正交试验对发酵培养基中3种主要氨基酸的用量配比进行了优化,结果表明发酵培养基加入0.2%亮氨酸、0.1%色氨酸、0.1%甘氨酸对泰万菌素发酵转化率影响显著,发酵摇瓶效价从14000μ/mL提高到18000μ/mL,效价提高了28.5%,完成了对泰万菌素提高发酵转化率和发酵单位的目的,并为大规模商业化生产泰万菌素奠定了良好的基础。     

表面活性剂的不同添加量对黄霉素发酵效价的影响

试验研究了表面活性剂的不同添加量在黄霉素发酵过程中对促进黄霉素效价的影响。结果显示,在发酵摇瓶中添加不同比例的表面活性剂,有助于黄霉素发酵效价的提高,其中以添加0.7%的表面活性剂效果最佳。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

泰妙菌素摇瓶发酵工艺优化研究

泰妙菌素菌种采用正交实验设计对摇瓶发酵配方进行了优化,使得摇瓶效价（指发酵液中截短侧耳素含量）从4992μg／mL提高到了9850μg／mL,效价提高了97．32％,并对摇瓶发酵工艺进行了多方面摸索和调整,完成了引进泰妙菌素菌种的消化吸收。     

纳豆芽孢杆菌液体发酵培养条件的优化

研究以实验室选育的纳豆芽孢杆菌为出发菌株,采用单因素及正交试验法对纳豆芽孢杆菌的液体摇瓶发酵培养条件进行优化,确定最适发酵培养条件为种龄21 h,接种量3.5%,装液量60 mL/250 mL,转速210 r/min,温度35℃,初始pH 7.0,摇瓶发酵周期为18 h。在此条件下发酵活菌数可达790亿CFU/mL。     

不同玉米浆及黄豆饼粉对土霉素发酵的影响

为选用最佳的培养基氮源生产土霉素,试验比较及评价了目前市场上5种不同厂家的玉米浆以及3种不同加工温度生产的黄豆饼粉对土霉素生产的影响。结果显示以X厂生产的玉米浆和中温黄豆饼粉为最佳培养基氮源,其摇瓶平均化学效价比对照高出13.56 ％。结论提示,玉米浆及黄豆饼粉质量的波动是引起土霉素发酵单位波动的重要原因之一,故要想提高发酵单位和保持稳定的发酵水平就必须要对不同产地、不同加工方法生产的原材料多进行摇瓶试验比较,以确定最适的玉米浆和黄豆饼粉用于生产。     

禽多杀性巴氏杆菌(G190E40株)菌液发酵参数对细菌菌数影响的探讨

本文通过马丁肉汤培养基和改良马丁液体培养基发酵禽多杀性巴氏杆菌(G190E40株)的比较以及改变发酵过程中通气量的大小、方式等发酵参数,寻找获得菌液菌数最高的发酵模式;通过对马丁肉汤培养基和改良马丁液体培养基发酵时间和菌数的关系,确定最适宜的收获时间,从而提高细菌冻干存活率.试验证明:使用改良马丁液体培养基、先静止后逐渐增大通气量的发酵效果最好,发酵时间大约在8h左右时菌液菌数最高.     

不同种类植物油及黄豆饼粉对那西肽发酵的影响

有机氮源和碳源质量的波动是引起那西肽发酵单位波动的重要原因之一,为选用最有效的有机氮源和碳源生产那西肽并保持稳定的发酵水平,试验以发酵摇瓶平均化学效价为指标,比较及评价了6种不同种类植物油及4种不同加工温度生产的黄豆饼粉对那西肽发酵产生的影响。结果表明,低温黄豆饼粉-菜籽油为最佳组合,其摇瓶平均化学效价比对照高出44.11%。即不同种类植物油由于所含脂肪酸种类和比例不同,不同加工温度的黄豆饼粉由于营养物质含量不同,均会很大程度影响那西肽发酵。     

硫酸亚铁对泰乐菌素发酵的影响

通过摇瓶实验进行了硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）对泰乐菌素发酵影响的研究,在泰乐菌素发酵培养基中分别添加了1／100000—1／1000剂量的FeSO4·7H2O,其发酵液效价明显降低,且降低程度与FeSO4·7H2O的添加剂量密切相关。     

枯草芽胞杆菌表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原摇瓶发酵条件优化

为了建立枯草芽胞杆菌摇瓶发酵表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原的制备方法,对已构建的含有pNC-HisE-Mtb8.4质粒的分泌表达载体,在枯草杆菌表达系统中进行分泌性表达,采用单因素影响试验方法,在摇瓶水平上进行了表达产量优化。结果表明,各因素的最佳条件是2SY培养基、接种浓度为6%、18h最佳种子阶段,在33℃的培养温度下振荡培养48h,目的蛋白的表达量能够达到750mg/L。该表达条件的确立,为后期生产工艺放大奠定了基础。     

生防细菌SF-16产芽胞条件的研究

生防细菌SF-16为土壤中筛选得到的1株细菌,研究表明,其对多种植物致病真菌有抑制作用。为了提高生防细菌SF-16的芽胞形成率及芽胞数量,以及为工厂化生产生物菌剂提供理论依据,采用摇瓶发酵对芽胞形成的主要影响因素进行了考察。通过单因素实验和正交实验对SF-16菌株产芽胞条件进行了分析,确定了摇瓶发酵最佳条件为:乳糖0.5%、黄豆饼粉2.0%、MnSO4·5H2O0.30%。在该优化条件下,发酵液中颉颃菌的出芽率达到98.3%,最终生物量达到2×109个/mL。     

仔猪副伤寒菌液的发酵参数对细菌菌数影响的探讨

本文通过改变牛肉汤培养基中的蛋白胨的种类和调整添加量的比例,改变发酵过程中通气量的大小、方式等发酵参数,来寻找获得活菌菌数较高的菌液的方法,结果显示:加入牛肉蛋白胨,立即通气并且通气量由小到大培养,加入蛋白胨的量为2.0%时发酵效果最好.     

具有海带褐藻胶降解能力的刺参有益菌筛选及降解条件优化

为研究刺参养殖中海带饲料原料存在的高黏度、低消化率等问题,本试验以褐藻酸钠为唯一碳源的选择性培养基从海泥中筛选出一株能降解海带中褐藻胶且对刺参无致病性的细菌。经16S rDNA鉴定,该菌为芽孢杆菌。通过单因素试验及正交试验对影响菌株生长和褐藻胶降解的7个因素:发酵时间、发酵温度、诱导物褐藻酸钠浓度、补充氮源种类、氯化钠浓度、发酵初始pH和装液量进行了优化。确定的褐藻胶降解菌株的最佳发酵条件为:发酵时间96 h,褐藻酸钠0.2%,发酵起始pH 7.5,发酵温度30℃,硫酸铵0.3%,氯化钠2.5%,装液量40 mL(200 mL摇瓶体系,料液比为1∶30),在最优化的条件下,菌株W16的褐藻胶降解能力比优化前提高了3.29倍。     

棉籽饼脱毒菌剂的工业化生产工艺研究

为了研究棉籽饼脱毒菌株M-4菌剂的工业化生产工艺,试验采用单因素试验法和正交试验法对棉籽饼脱毒菌株M-4摇瓶发酵产芽孢条件进行优化,初步确定发酵培养基组分及培养条件,采用10 m3发酵罐发酵考察种子液培养方式与通气量等芽孢杆菌菌剂发酵生产工艺参数,并考察发酵液浓缩及菌体干燥工艺参数。结果表明:菌株M-4菌剂生产用培养基碳源为5.0 g/L蔗糖,氮源为10.0 g/L蛋白胨,无机盐为Mn SO4·H2O 1.0 g/L和Mg SO4·7H2O 0.5 g/L;培养条件为发酵时间72 h,发酵温度30℃,p H值7.2;种子液培养方式选择斜面菌悬液进罐方式,发酵过程通气量为1∶0.8 V/(V·min);碟片式离心机进料流速以0.5 m3/h为宜。闪蒸干燥工艺参数为进风温度130℃,料液比1∶1,进料速率80 kg/h,麸皮粉细度60目。以此工艺所得干燥菌粉含水量为3.02%,芽孢存活率为88.6%,含菌量达3.05×1010cfu/g。说明此为适宜的棉籽饼脱毒菌剂工业化生产工艺。     

链霉素抗性突变选育那西肽高产菌株

通过对那西肽产生菌N106的孢子进行紫外诱变处理(15 W,253.7 nm,距离30 cm),再利用链霉素抗性突变作为筛选模型(链霉素最低抑制浓度为3 u/mL)获得了链霉素抗性基因突变的高产菌株NUS146和NUS182,摇瓶发酵水平分别达到3233和3452 u/mL,比出发菌株N106的摇瓶水平2502 u/mL分别提高了29.22％和37.97％.传代试验表明,该两突变株遗传特性相对稳定.     

溶氧因素对冬虫夏草摇瓶培养的影响

对冬虫夏草菌丝体摇瓶培养中影响溶氧的主要因素进行分析。通过测定不同摇床转速、装液量、封口方式下摇瓶培养后的菌丝得率,并对其进行单因素分析,选择单因素较优水平,然后进行3因素正交试验。结果表明,最适宜溶氧条件为摇床转速140r/min、装液量50%、封口采用无菌培养容器封口膜;各因素影响培养的显著性依次为摇床转速、装液量、封口方式;不同摇床转速下对有效成分含量测定显示,摇床转速对虫草多糖及虫草酸含量影响不显著。     

基因工程抗菌肽表达条件的优化及生物活性试验

探讨表达条件对重组抗菌肽表达量和抗菌活性的影响.选用SMD1168毕赤酵母菌株表达cecropinB及其串联体基因和cecA-mag(cecropin A前8个碱基和magainin的第9个碱基)的3个突变体基因抗菌肽.对6种重组酵母菌的摇瓶发酵条件,如pH、发酵温度、甲醇的添加量等进行了优化,结果优化后的表达条件可提高重组抗菌肽的表达量和抗菌活性.并从抑菌试验、酸碱稳定性试验、热稳定性试验、体外稳定性试验探讨了其生物学活性.     

一株枯草芽孢杆菌的鉴定及液体发酵工艺优化

从鸡肠道筛选出一株菌,命名为DY032,经16S r DNA分子鉴定和系统发育分析,该菌种为枯草芽孢杆菌。在摇瓶发酵条件下,采用单因素试验,对菌株DY032的培养基配方进行优化,确定了影响发酵液菌体数和芽孢数的5个因素,分别为淀粉、鱼粉、豆饼粉、MnSO_4·H_2O和CaCO_3,其适宜浓度分别为20、10、10、0.05、0.05 g/L,进一步通过L_(16)(4~5)正交试验确定以上5因素的最佳配比。为放大培养,在最优培养基基础上,利用10 L发酵罐,采用L_9(3~4)正交试验设计,以芽孢数为指标,对菌株DY032的培养温度、pH值、搅拌转速、通气量4个条件进行优化。结果表明:菌株DY032培养基最优配方为:淀粉16 g/L,鱼粉10 g/L,豆饼粉10 g/L,Mn SO4·H2O 0.05 g/L,Ca CO30.03 g/L。最优发酵罐培养条件为:培养温度37℃,pH值6.5,转速200 r/min,通气量5 L/min,最终芽孢数可达51.95×108cfu/m L。