一株枯草芽孢杆菌的鉴定及液体发酵工艺优化

从鸡肠道筛选出一株菌,命名为DY032,经16S r DNA分子鉴定和系统发育分析,该菌种为枯草芽孢杆菌。在摇瓶发酵条件下,采用单因素试验,对菌株DY032的培养基配方进行优化,确定了影响发酵液菌体数和芽孢数的5个因素,分别为淀粉、鱼粉、豆饼粉、MnSO_4·H_2O和CaCO_3,其适宜浓度分别为20、10、10、0.05、0.05 g/L,进一步通过L_(16)(4~5)正交试验确定以上5因素的最佳配比。为放大培养,在最优培养基基础上,利用10 L发酵罐,采用L_9(3~4)正交试验设计,以芽孢数为指标,对菌株DY032的培养温度、pH值、搅拌转速、通气量4个条件进行优化。结果表明:菌株DY032培养基最优配方为:淀粉16 g/L,鱼粉10 g/L,豆饼粉10 g/L,Mn SO4·H2O 0.05 g/L,Ca CO30.03 g/L。最优发酵罐培养条件为:培养温度37℃,pH值6.5,转速200 r/min,通气量5 L/min,最终芽孢数可达51.95×108cfu/m L。     

解淀粉芽孢杆菌液体发酵动态变化规律的研究

研究采用自行分离纯化的M-01解淀粉芽孢杆菌菌株,利用自行研制的液体发酵器进行培养,在温度(35±0.2)℃自动控制条件下,研究其发酵液p H、活菌数、芽孢率、还原糖、氨基氮及微生物总蛋白的动态变化规律,并同时对发酵液温敏脱水后的干燥物进行相关指标的质控检测。结果表明,菌株液体培养24 h,活菌数(146.68±4.05)亿CFU/m L,芽孢率(91.76±1.50)%;干燥物芽孢数(141.05±1.70)亿CFU/g、含水率(5.70±0.04)%及杂菌率(0.585±0.004)%。     

解淀粉芽孢杆菌HN固体菌剂发酵制备技术研究

为研究解淀粉芽孢杆菌HN(Bacillus amyloliquefaciens HN)固体发酵菌体的方法 ,本试验就固体发酵的不同底物(麸皮、玉米粉,豆粕,大豆粉),添加物质(碳源、氮源和无机盐类),料水比,发酵温度,发酵时间,干燥方法,激活特性等因子进行单因素试验和正交设计,探索菌体形成的最佳培养条件和使用方法。结果表明:在以麸皮为底物,温度28℃,料水比为1∶0.8,添加外源物质为可溶性淀粉0.2%,蛋白胨0.2%, KH2PO40.1%, MgSO4·7H2O 0.03%所形成的固体培养条件下进行48 h的发酵,解淀粉芽孢杆菌的菌数可达3.99×1010cfu/g以上,明显高于液体菌剂4.17×109cfu/mL。固体菌剂干燥过程中的菌数和含水量极显著相关(P 0.01),干燥后的菌剂再进行二次发酵,菌数可达3.72×1010cfu/g。     

牛源复合芽孢杆菌混合发酵条件的优化

为了提高复合芽孢杆菌混合发酵的芽孢菌数,试验采用外加碳源、氮源及无机盐单因素试验及4因素3水平正交试验对培养基进行优化,并对发酵参数进行了研究,测定了活菌数及芽孢菌数。结果表明:培养基最佳配比为玉米粉20 g/L、豆粕粉40 g/L、KH2PO41.5 g/L、K2HPO41.5 g/L、Mn SO42 g/L;混合发酵的最适条件为37℃、p H值7.0、500 m L三角瓶中装入200 m L培养液,160 r/min摇床培养26 h,此条件下芽孢菌数可达4.91×1010cfu/m L。     

凝结芽孢杆菌工业培养基的优化

采用单因素试验和正交试验设计的方法 ,优化凝结芽孢杆菌发酵培养基。结果表明,最佳培养基组成为玉米粉5 g/L、小麦麸皮10 g/L、氯化铵7.5 g/L、豆粕粉7.5 g/L、Na Cl 5 g/L、Mn SO4·H2O 0.3 g/L、K2HPO4·3H2O 1 g/L,最适装液量为35 m L。此条件下经摇瓶培养,菌种数可以达到2.20×109cfu/m L,芽孢数为2.02×109 cfu/m L。     

除臭微生物10GD发酵工艺初探

通过单因素试验和正交优化试验方案,研究了微生物10GD发酵工艺,以满足该菌工业发酵生产的需要.试验结果表明:其最适的培养基是麸皮50 g/L,蛋白胨2.5 g/L,尿素2.5 g/L,Nau 5 g/L,K2HPO4 1 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L;最适培养环境是接种量1%、发酵温度37℃、发酵时间36 h、培养方式为摇床培养(转速为130 r/min)、pH为8.0.     

产有机酸芽孢杆菌的筛选、鉴定及产芽孢条件优化

试验旨在筛选一株高产有机酸的芽孢杆菌,并对其芽孢形成条件进行优化。从实验室保藏的200株芽孢菌株中筛选能够使溴甲酚紫平板变黄的菌株。利用液相色谱对筛选所得的菌株发酵液中有机酸的种类、含量进行测定。根据目的菌株的形态特征和生理生化试验以及16S r DNA序列分析结果对菌株进行种属鉴定。利用单因素试验和正交试验结合的方法,考察不同的碳源、氮源、无机盐、p H值、培养时间、接种量对菌株芽孢形成的影响。结果表明,菌株R42-16发酵液中乙酸、乳酸的含量较高,分别为221、174μg/ml。经鉴定菌株R42-16为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amy-loliquefaciens)。本试验条件下,菌株R42-16的最佳培养基组成为:玉米粉1%、酵母浸粉2%、Mn SO4·H2O 0.01%、Ca Cl2·H2O 0.01%,培养基最佳初始条件为:发酵时间48 h、接种量4 ml、p H值6、装液量50 ml/250 ml。在此优化条件下,发酵液中菌株R42-16的活菌数达到3.19×109cfu/ml,芽孢形成率达到93.76%。     

饲用枯草芽孢杆菌SR096产孢培养基及培养条件的优化

试验旨在为了降低枯草芽孢杆菌SR096的工业生产成本和提高发酵液的芽孢含量,采用单因素试验和响应面法试验设计对菌株SR096的培养条件和发酵培养基组分优化,优化后的培养基组分为:葡萄糖7.5 g/L、玉米粉15.7 g/L、黄豆粉45.0 g/L、柠檬酸钠4.5 g/L、碳酸钙2.0 g/L、硫酸镁1.0 g/L,经验证在5 L发酵罐中以接种量3%、37℃、250 r/min条件下培养30 h,枯草芽孢杆菌SR096发酵液的活菌含量为1.67×10^10 CFU/mL,芽孢含量为1.56×10^10 CFU/mL,芽孢率为93.3%,为枯草芽孢杆菌SR096后期的产业化放大和推广应用奠定基础。     

一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

通过正交优化试验对一株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行优化,结果发现,当培养基中豆粕液为20 g/L,葡萄糖浓度为5 g/L,玉米粉浓度为2 g/L时,在接种量为5 %的情况下,采用此种配比的发酵培养基37 ℃培养24 h,活菌数最高,可达4.0×109 CFU/mL.     

MB22木聚糖酶发酵条件的研究

通过因素轮换试验和正交试验,对MB22菌产木聚糖酶的培养基配方和发酵条件进行了研究。结果显示最佳培养基组成是:以玉米芯粉和麸皮为碳源,麸皮120g/l,玉米芯280g/l,(NH4)2SO44g/l,CaCO31.5g/l,Tween80,2.0g/l,MgSO4·7H2O1.5g/l;最佳发酵条件为:起始pH5.0,摇床培养温度30℃,转速160r/min,振荡培养84h。在最佳发酵条件下,MB22菌的最高产酶活力可达898.23U/ml。虽然与一些高产菌株相比该菌株的产酶能力还有待于进一步提高,但该试验结果为进一步进行微生物生产木聚糖酶的研究提供了理论依据。     

呕吐毒素降解德沃斯氏菌株高活性菌剂制备的研究

试验旨在制备呕吐毒素（DON）降解德沃氏菌株的高活性菌剂。试验以高效降解DON的德沃斯氏菌株（Devosia sp.）D-8为对象，采用鼓风干燥法制备一种高活菌数、低成本的固态菌剂，使用单因素和正交试验优化制备工艺。结果显示，德沃斯氏菌D-8发酵培养21 h后发酵液浓缩10.0倍，与粒径40～80目玉米粉载体充分混匀，40℃鼓风干燥制得水分含量为10%、活菌数达（12.38±0.11）lgCFU/g的固态菌剂。利用场发射扫描电镜观测表面微观结构明确了该菌与载体依附状态。储藏试验结果表明，4℃真空储藏30 d内可保持较高的活菌数。研究表明，试验制备的DON降解菌剂具有活菌数高、生产过程简便和成本低等优点，可为处理DON污染饲料提供参考。     

Lactobacillus fermentum F6的增殖培养基优化及高密度发酵的研究

对分离自少数民族传统乳制品中的Lactobacillus fermentum F6菌种的增殖培养基进行优化,并对其高密度发酵条件进行探索。通过测定不同组成培养基中菌体在600nm波长下的光密度和发酵液在不同发酵条件下的活菌数,得到最适增殖培养基配方及其高密度发酵条件。增殖培养基配方为:蔗糖62.0g/L、酵母粉35.5g/L、大豆蛋白胨12.0g/L、柠檬酸1.35g/L、柠檬酸钠22g/L、MgSO4·7H2O2g/L、MnSO4·5H2O100mg/L、Tween-801g/L。在5L发酵罐中,Lactobacillus fermentum F6经优化发酵条件,其活菌数可达到2.30×1010CFU/mL,加入保护剂经冷冻干燥后活菌数可达到1.45×1011CFU/g,存活率为79.11%。中试培养液中活菌数可达1.02×1010CFU/mL,存活率为58%。以上优化的增殖培养基和高密度发酵条件为Lactobacillus fermentum F6的工业化生产奠定了基础。     

贝莱斯芽孢杆菌T-70-1发酵产胞外抗菌肽小试生产工艺优化

为了获得贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)T-70-1菌株发酵产抗菌肽小试生产的最佳条件,试验考查了转速、通气量、装液量和罐压对发酵液抑菌活性的影响,设计正交试验优化5 L发酵罐的发酵条件;在此基础上,以发酵通气率不变为原则,探索发酵时间对30 L发酵罐发酵效果的影响。结果表明:当通气量为2.0 L/min,压强为0.05 MPa,转速为180 r/min,装液量为40%时,5 L发酵罐相对应发酵上清液的抑菌效价为2 851.8 Au。当放大至30 L发酵罐时,对应的发酵条件为装液量20 L,通气量1.2 m~3/h,压强0.05 MPa,转速180 r/min,对应的抑菌效价可达到6 159.2 Au,抗菌肽含量提高了1.16倍。说明通过优化条件实现了抗菌肽从5 L发酵罐到30 L发酵罐的放大,使T-70-1菌株胞外抗菌肽含量得到了明显提高。     

多菌种混合发酵棉籽饼粕制备益生菌生物活性饲料

以棉籽饼粕、麸皮、苹果渣为原料,经霉菌XH001、霉菌XH002、地衣芽孢杆菌E01、枯草芽孢杆菌E02、乳酸菌SR01、酿酒酵母和饲料酵母混合发酵生产益生菌饲料。最佳工艺条件为:发酵温度32℃,原料含水量50%,芽孢杆菌接入时间为发酵后12 h,乳酸菌接种量10%,发酵时间48 h。发酵后饲料粗蛋白含量由原来的27.58%提高到37.92%,氨基酸态氮含量达到1.88%,乳酸菌活菌数达2.3亿cfu/g(干基),芽孢杆菌达18.4亿cfu/g(干基)。     

一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元的制备

为优化枯草芽孢杆菌与刺五加多糖合生发酵的条件,本试验采用4×2因子试验设计,筛选适宜的温度(30、34、37、40℃)和转速(120 r/min和170 r/min);采用单因素试验设计筛选接种量(1%、2%、4%、6%、8%)、装液量(50、100 m L)和初始p H值(5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5);根据菌液的活菌数和芽胞产率确定刺五加多糖的添加量(0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.6、4.8、6.4、8、10 mg/m L)及合生元的培养时间(24、36、48 h)。结果表明,种子液的培养时间为24 h,温度为37℃、转速为170 r/min,接种量为4%,250 m L锥形瓶中装液量为50 m L,培养基初始p H值为7.0,刺五加多糖的添加量为1.6 mg/m L,合生元培养时间为36 h,把培养好的菌液按1 L菌液∶0.5 kg麸皮的比例用干燥细麸皮吸附,在45℃烘箱中烘干即得枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元。经检测,其活菌数为5×109cfu/g左右。     

菌株及发酵条件对山药发酵液抗氧化活性的影响

试验旨在通过特定菌株发酵进一步提高山药的抗氧化活性。试验以超氧阴离子自由基(·O₂^-)清除率、羟自由基(·OH)清除率和二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除率为抗氧化活性指标，通过单因素和正交试验，从6株饲用益生菌中筛选出山药发酵菌株，并对山药液态发酵工艺及菌株发酵液功能性成分进行研究与分析。结果显示，试验确定山药发酵菌株为枯草芽孢杆菌，最优发酵工艺为山药麸皮总添加量为4 g、山药与麸皮比例为4∶6、氯化钠为6 g/L；发酵72 h，发酵液对·O₂^-自由基清除效果最佳，为69.91%，比优化前提高了1.2倍。山药与麸皮比例为5∶5，总山药麸皮添加量为4.5 g，硫酸锰添加量0.09%，接种量2.5%，发酵72 h，发酵液对·OH自由基清除效果最佳，为84.82%，比优化前提高了1.43倍。硫酸锰添加量0.12%，硫酸镁添加量0.75 g/L，接种量10%，发酵84 h，发酵液对DPPH自由基清除效果最佳，为72.21%，比优化前提高了2.1倍。发酵液经GC-MS检测新增了3-羟基丁酮、2-甲基丙酸...     

柞蚕茧微生物发酵脱胶工艺优化

利用从环境中分离筛选出的产高活性胞外蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 10C菌株,通过微生物发酵法实现对柞蚕茧壳的脱胶。采用单一变量法和正交试验优化发酵脱胶工艺,试验结果表明,应用芽孢杆菌10C菌株对柞蚕茧壳进行发酵脱胶,在初始p H值为7、料液质量浓度为22 g/L、以玉米粉作为发酵液的碳源且质量浓度为15 g/L的条件下,35℃、150 r/min发酵18 h,柞蚕茧壳用微生物发酵脱胶后的脱胶率达到了13. 38%。柞蚕茧壳用微生物发酵法脱胶的效果与传统的碱法脱胶和酶法脱胶相当,且对环境无污染。     

复合菌固态发酵棉籽粕工艺的初步研究

文章以枯草芽孢杆菌属、酵母菌属和乳酸菌属的6株菌为出发菌株,通过单因素试验和正交试验,确定了6株菌复合培养的最佳培养基配方为:糖蜜40 g/l、蛋白胨10 g/l、葡萄糖1 g/l、磷酸氢二钾0.5 g/l;并对复合菌固态发酵棉籽粕工艺条件进行了研究,确定了复合菌固态发酵棉籽粕的最适工艺条件为:料水比1:0.8,接种量为3%,发酵温度为30℃p,H值自然,发酵时间为48 h。在以上条件下,棉籽粕经过复合菌固态发酵后,物料的pH值降低到4.5以下,有益菌总数达到6.2×108 cfu/g,粗蛋白含量提高了1.76%,游离棉酚含量从618.52 mg/kg降低到274.16 mg/kg,降低了55.7%。     

产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌降解豆粕的发酵条件优化及抗营养因子测定

试验优化得到了降解豆粕芽孢杆菌Z-1生长的最优发酵条件,并对发酵后豆粕中的抗营养因子进行了测定。采用单因素试验的方法在摇床培养的基础上对β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌的生长主要影响因素进行了考察,其中包括发酵培养基的C源、N源、无机盐、p H值、接种量、发酵时间等。通过设计正交试验对各因素的浓度和组合以及最佳培养条件进行了优化,得到该菌株产酶的最适条件为:糊精5.0%、蛋白胨1.0%、Cu SO4·5H2O 0.1%、Fe SO4·7H2O 0.01%、接种量3%、p H值为7、培养时间72 h。用优化后的培养基进行发酵,在产酶活性上比优化前提高了35.5%,抗营养因子数量下降了61.6%。     

适宜棉籽粕固态发酵的菌株的筛选

棉籽粕中因含有棉酚等有毒物质,制约了其在畜牧业中的应用。微生物发酵法是目前普遍认为的成本低、效果好、较安全的脱毒方法。本实验利用实验室常用菌株芽孢菌、酵母菌和乳酸菌发酵棉籽粕,研究其对棉籽粕中游离棉酚降解率的影响,并对发酵前后棉籽粕的营养指标如活菌数、酸溶蛋白、中性蛋白酶活性、pH和游离棉酚含量等进行比较。结果发现:降解棉籽粕中游离棉酚效果的菌株排序为芽孢杆菌优于酵母菌优于乳酸菌,其中芽孢杆菌BLCC1-0039组发酵棉籽粕24 h时,游离棉酚降解率达到93.89%(P0.05),酵母菌BLCC4-0327组发酵棉籽粕发酵24 h时,游离棉酚降解率达到72.72%(P0.05),本研究的5株乳酸菌几乎都没有降解游离棉酚的能力。芽孢杆菌各菌株发酵棉籽粕均可以提高酸溶蛋白含量和中性蛋白酶活性,发酵24 h时,芽孢杆菌BLCC1-0039组的酸溶蛋白含量较空白对照组高出54.80%(P0.05),中性蛋白酶活性达到4111.40U/g(P0.05);发酵24 h时,酵母菌BLCC4-0327组的酸溶蛋白含量较空白对照组高出23.20%(P0.05);乳酸菌发酵可有效改善发酵风味,发酵24 h时,乳酸菌BLCC2-0092组发酵料的p H降至5.47(P0.05)。这说明,优良的微生物菌种是影响棉籽粕脱毒效果和饲料营养品质的首要条件,这为下一步棉籽粕的有效利用提供了理论指导。