LIF对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的影响

卵母细胞的体外成熟、体外受精(IVM/IVF)技术广泛应用于发育生物学的研究, 如受精后早期胚胎的营养积累、早期基因表达调控、减数分裂能力的获得等, 也可以用于畜牧生产中优良种群的扩群.影响卵母细胞体外成熟与卵裂的因素众多,卵母细胞的体外成熟率通常为40%～80%,优化培养条件是提高体外培养卵母细胞成熟与卵裂的关键,大量的研究是通过在培养液中添加细胞因子来促进卵母细胞成熟与卵裂[1].本文通过不同浓度LIF对小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的观察,对其体外成熟率、体外受精率进行比较, 从而为提高哺乳动物卵母细胞的体外成熟、体外受精效果提供参考依据.     

利用IVM/IVF技术生产试管犊牛的研究

本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛.结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％.体外受精卵分别在颗粒细胞单层(GCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01).若体外受精卵先在GCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％.由此表明,早期胚胎在其发育过程中至少存在着3个发育相期,即1～8细胞、8～16细胞和16细胞～囊胚3个阶段,各阶段需要不同的培养环境.IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％.第一头试管犊牛已于1993年4月18日凌晨产出.     

犬卵母细胞体外成熟及其体外受精研究进展

犬科动物胚胎对于改进犬科珍贵物种及保护濒危犬种十分重要,因此对犬科动物体外受精(IVF)以及辅助生殖(ART)的研究逐渐变得必要.通过体外受精和核移植已经成功获得能够发育的犬科动物胚胎,克隆的犬胚胎移植到受体母犬能成功产仔,但是这一技术的效率仍然很低.主要原因是犬科动物胚胎在体外发育能力很低.犬卵母细胞早期发育和其他动物不同,犬卵巢排出的卵母细胞处于生发泡(GV)期,在输卵管中恢复减数分裂.犬卵母细胞核难以观测并且不容易确定排卵时间,所以很难确定精子入卵的确切时间,并且多精受精的情况时常发生.回顾犬卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精取得的进展,对于提高其胚胎生产效率很有必要.     

利用IVM/IVF技术生产试管犊牛的研究

本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛。结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％。体外受精卵分别在颗粒细胞单层(CCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01)。若体外受精卵先在CCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％。这表明:早期胚胎在其发育过程中至少存在着三个发育时期,即1—8细胞、8—16细胞和8细胞—囊胚三个阶段,各阶段需要不同的培养环境。IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％。     

绵羊体外受精及胚胎发育分子调控研究进展

家畜体外受精研究最早的动物是绵羊。与其他动物体外受精过程一样,绵羊体外受精技术也包括卵母细胞体外成熟(IVM)、精子体外获能、体外受精(IVF)、受精卵体外培养(IVC)以及胚胎移植(ET)等过程。因此,绵羊胚胎的体外生产技术的效率受到了这些技术环节当中诸多因素的影响,并且动物胚胎的发育受到多种调控因子的调节。本文就当前绵羊体外受精技术环节中的相关影响因素以及胚胎发育分子调控的相关研究进展作一综述。     

不同共培养体细胞和胎牛血清浓度对牛体外受精后早期胚胎的影响

利用屠宰黄牛的卵母细胞经体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)后的早期胚胎,与单层颗粒细胞(GC)、输卵管上皮细胞(BOEC)等体细胞共培养及在胎牛血清的胚胎培养液中的后续发育进行了研究,并探讨了其影响因素,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:使用GC和BOEC体外共培养牛体外受精后胚胎,均取得了较好的囊胚发育率;且牛体外受精后早期胚胎体外培养体系中,添加10%血清能有效地促进牛体外受精后胚胎的囊胚率。     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞，同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述，主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。     

C型钠肽和半胱胺前成熟处理对牛卵母细胞发育能力的影响

本研究旨在探讨C型钠肽(CNP)结合半胱胺前成熟处理牛卵母细胞对其减数分裂和发育能力的影响。以常规的体外成熟24 h培养为对照,CNP前成熟(添加或不添加半胱胺)处理牛卵母细胞6 h,然后进行常规体外成熟培养,检测卵母细胞的成熟率以及体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。结果表明:与对照组相比,不论有无添加半胱胺,CNP前处理牛卵母细胞均未显著提高牛卵母细胞的成熟率和体外受精后的卵裂率(P0.05),但显著提高了受精后囊胚细胞总数(P0.05);CNP结合半胱胺前处理牛卵母细胞显著提高了受精后的囊胚率(P0.05)。由此可见,CNP结合半胱胺前成熟处理牛卵母细胞提高了其发育潜能,可用于优化卵母细胞体外成熟培养体系。     

猪第一极体核物质参与卵母细胞受精及其胚胎发育的研究

旨在探索猪卵母细胞第一极体核物质能否参与体外受精及其进一步的胚胎正常发育.第一极体(FPB)获自猪卵巢卵泡中卵丘卵母细胞复合体(COCs)体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞.存活极体从成熟卵母细胞内分离后采用显微操作术注入去核卵母细胞胞质中.第一极体重组卵母细胞分别采用常规体外受精和单精子胞浆注射法进行受精,来自极体核重组的受精卵进行体外培养,观察和分析其进一步体外卵裂发育的能力.结果显示:极体显微操作重组的成功率约为80%,20%左右的重组卵母细胞于重组后的受精和发育培养过程中退化、崩解;常规体外受精和单精子注射后2-细胞卵裂率分别达到12.9%和29.8%.结论:猪第一极体核物质具有参与卵母细胞受精和进一步胚胎发育的能力.据此推测利用第一极体将有可能繁殖正常仔猪后代.     

试管牛冷冻胚胎移植黄牛的试验效果

在我国，牛胚胎移植技术虽已基本成熟，但通过超数排卵技术，体内生产的胚胎，成本却居高不下，从而限制了胚胎移植技术向产业化迈进的步伐。寻求一条即可扩大胚胎来源，又降低成本，以使广大用户能够接受胚胎移植的技术途径，一直是胚胎移植领域人们极为关注和试图解决的问题。自我国获得首例试管牛犊成功以后，哺乳动物体外受精技术取得了飞速发展。“牛体外受精技术”也称“试管牛”技术，即从屠宰场采集废弃卵巢，在实验室吸取卵母细胞，再进行体外成熟和受精，继之培养发育至可用胚胎，这种廉价的工厂化试管牛胚胎生产技术为胚胎移植开…     

幼龄小鼠卵泡的超数及卵母细胞同步成熟的研究

人工合成的雌性激素己烯雌酚可以促进出生18～20日龄左右的小鼠大量卵泡同步发育（有腔卵泡）,每只小鼠可获得300枚左右的未成熟卵母细胞,并在体外成熟培养16 h后,90%以上的卵母细胞排放第一极体,体外受精后2细胞的分裂率达到50%～65%,受精卵经体内培养后,发育到囊胚的比例达到50%以上.以上结果表明,幼龄小鼠卵巢卵母细胞能在外源的雌性激素作用下大量同步发育,并能在体外成熟、受精与发育至囊胚期胚胎.该研究结果不仅为深入探讨哺乳动物卵母细胞发育及成熟机制奠定基础,更重要的是为大家畜提供了一个重要的卵母细胞的来源途径.     

体外卵母细胞的抗氧化作用研究进展

卵母细胞体外成熟培养是体外生产胚胎的关键步骤之一,在人工辅助生殖技术及胚胎工程中起着不可替代的作用。随着国内外对哺乳动物体外受精及胚胎体外发育研究的日益深入,这一动物生物技术也开始备受关注。研究发现,卵裂率及囊胚发育率与卵母细胞成熟水平呈正向相关,而活性氧(reactive oxygen species,ROS)是影响卵母细胞成熟水平的主要原因之一。在离体培养卵母细胞过程中,过高水平的活性氧能够引起氧化应激,破坏细胞结构,导致细胞功能失调,不利于卵母细胞维持正常生殖功能。文章对卵母细胞体外培养过程中抗氧化机制的研究进展进行了综述。     

猪体外受精胚胎培养条件优化的研究

试验将卵母细胞经过体外成熟、体外受精后在不同条件的PZM-3液中培养,检测卵裂率、囊胚的发育率和质量,目的是进一步优化培养条件用于体外生产猪胚胎.     

细胞因子与激素对山羊胚胎体外生产的影响

随着商业性胚胎移植技术的推广应用和动物胚胎工程技术的深入研究,对胚胎和卵母细胞的需求量日益增加,单靠超排技术获得的胚胎或卵母细胞已远远不能满足科研和生产的需要,因而推动了卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）及体外胚胎生产（IVP）等胚胎工程技术的发展。牛体外受精技术日趋成熟,体外胚胎生产已经开始走向生产应用,但山羊体外胚胎的生产效率远落后于牛,且质量不稳定。优化培养条件是提高山羊胚胎生产效率和胚胎质量的关键。文献报道,将胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、白血病抑制因子（LIF）、干细胞因子（SCF）用于绵羊、小鼠等动物的细胞培养研究取得了较理想的效果,但未见将3种成分用于山羊的报道。     

试管水牛技术研究

水牛卵巢卵母细胞经体外成熟培养、体外受精和受精卵在体外培育的胚胎移植给受体母水牛,结果表明：①卵母细胞体外培养成熟率71．6％、受精分裂率52．8％、囊胚率(占授精卵母细胞)27．2％。②双鲜胚移植受胎率36．2％(30．0％～44．8％),双胎率24％;双冻胚移植受胎率20．0％;生产试管水牛24头,全部成活,其中冻胚试管水牛3头;双胞胎3对。③胚胎冷冻方面：采用玻璃化胚胎冷冻技术,冷冻胚胎解冻后存活率64．4%。     

不同成熟时间的猪卵母细胞对体外受精的影响及孤雌发育

采用NCSU-37为体外成熟、受精、培养体系,比较不同成熟时间46h、58h和70h的猪卵母细胞对体外受精的影响和孤雌发育。结果显示,猪卵母细胞在体外成熟培养46h、58h和70h后,46h培养组的卵母细胞体外受精后的卵裂率明显低于58h和70h培养组(P<0.05),但囊胚发育率明显高于其他两组(P<0.05)。46h组的孤雌发育率明显高于其他两组(P<0.05),囊胚发育率三组之间无显著差异。表明猪卵母细胞体外成熟培养时间延长,体外受精后的囊胚发育率降低,孤雌发育率相应增加。     

OPU卵母细胞体外成熟体系的优化研究进展

近年来，体外胚胎生产(in vitro embryo production, IVP)技术取得了很大进步，尤其是卵母细胞活体采卵(ovum pick-up, OPU)技术得到广泛应用。OPU是20世纪90年代发展起来的一项新型的能获得优秀种母牛卵母细胞的技术，该技术在动物胚胎生产和发育机理研究及人类辅助生育技术临床实践中有着广阔的应用前景。可以提高种母畜和珍贵野生动物的资源保护效率，提高优良母畜的遗传潜力，为奶牛生物技术发展提供必要的支撑技术。卵母细胞的质量是IVP系统取得成功的关键，卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是成功受精和胚胎发育必不可少的步骤。卵母细胞IVM完成了卵母细胞的细胞质和核成熟，准备了发育至胚胎基因组激活所必需的所有必要成分。但体外成熟的卵母细胞发育能力低于体内成熟卵母细胞，卵母细胞减数分裂和细胞核质成熟不同步，氧化应激损伤等对卵母细胞成功受精和胚胎发育非常重要，因此，需要进一步提高卵母细胞体外成熟能力，以改善牛体外胚胎生产系统。本文从卵母细胞体外成熟面临的核质成熟不同步，氧化应激等问题进行概述，同时，叙述C型钠肽、褪黑素、FLI...     

体外成熟或体外受精牛胚胎的体外培养

作者通过实验证明,体外成熟(IVM)的培养基不仅影响卵母细胞的受精能力,而且影响胚胎的后来发育。因此,受精卵母细胞发育到2-细胞期的能力不是衡量其正常状况的适宜指标。小鼠卵母细胞体外成熟培养条件的优化并不能推广到牛卵母细胞的 IVM。牛 IVM/IVF(体外受精)胚胎在不存在血清或其他蛋白、不使用体细胞复合培养时,均能完成体外发育,未出现显著的8～16-细胞期阻滞。引人注目的是,我们的培养条件与其他     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟、体外受精及GSH水平的影响

体外受精技术也称胚胎生产技术（invitro production,IVP）,包括卵母细胞的体外成熟、精子的获能、卵子的体外受精和受精卵的体外培养等几个连续的过程。半胱氨酸是GSH的前体物质,在牛体外胚胎生产过程中疏基复合物能增加细胞内GSH的合成,在受精和胚胎的开始阶段保持高浓度GSH可以增加发育率。试验的目的是评价半胱氨酸对猪卵母细胞的成熟率、受精率及成熟培养时期卵母细胞内GSH水平的影响,现报道如下。     

犬科动物繁殖生物技术研究进展

犬科动物繁殖生物技术的研究远远落后于其他哺乳动物,因为犬科动物为季节性单次发情,其生殖生理有独特性,这使得犬科动物繁殖生物技术面临着一些困难,尤其是卵子和胚胎在体外培养及发育的效率很低。本文综述了犬科动物卵母细胞的成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)和体外胚胎生产(IVP)、精液冷冻和人工授精、胚胎移植及克隆等的研究进展。