诱变选育木聚糖酶高产菌株及其发酵条件的研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)XE6为出发菌株,经微波(MW)和硫酸二乙酯(DES)诱变处理,选育出一株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株mAn1。利用单因素轮换法和正交试验法对菌株mAn1固态发酵产酶工艺进行了研究。结果表明:最适产酶条件为麸皮与玉米芯的添加比例6:4,硝酸铵2g,培养基起始pH值为4.5,固液比为1:1.8,500ml三角瓶中装培养基50g,30℃培养72h,在此条件下所产木聚糖酶的酶活为81151U/g,比出发菌株的酶活提高了34.88%。     

饲用木聚糖酶菌株的筛选

通过刚果红透明圈法从土壤中初筛到5株产木聚糖酶菌株,通过固体发酵复筛,最终得到高产木聚糖酶菌株Y8,产木聚糖酶活力达到了1068U/g干物质。     

高寒草地土壤5株真菌合成不同功能酶系间互作效应的研究

为研究筛选自高寒草地5株真菌合成不同功能酶系间的互作效应,采用单个菌株发酵粗酶液直接混合和菌株组合发酵的2种方式,分别测定了反应体系中不同功能酶活力的变化情况。结果表明:菌株310b与4个菌株23a,26B,24d及H发酵粗酶液直接混合的情况下,反应体系中漆酶、羧甲基纤维素酶、木聚糖酶的酶活力下降, 且差异显著(P<0.05);而菌株310b与4个菌株组合发酵的情况下,反应体系中漆酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),在与菌株23a和H的组合中,反应体系羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),与菌株26B和24d 的组合中,反应体系中羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力没有变化。     

高压电场选育高产酸性木聚糖酶菌株的研究

为获得适用于动物饲料的木聚糖酶高产菌株,并验证高压电场诱变方法的有效性,于农田土壤中筛选出高产菌株,在高压电场中进行诱变,筛选最佳的突变菌株。出发菌株初步鉴定为沙福芽孢杆菌,命名为Bacillus safensis B16。该菌株所产木聚糖酶在pH 5、60℃下酶活性为217.34 U/mL,且60℃时的半衰期为229 min,热稳定性良好。在6～24 kV、极间距为3 cm的高压电晕电场中处理0～10 min,最终在10 kV下处理6 min选育出一株木聚糖酶高产菌株B16106-2,酶活性达到256.73 U/mL,较出发菌株提升了18.12%,且传代7次后菌株的产酶能力基本不变,具有良好的遗传稳定性。突变菌株所产木聚糖酶的最适酶反应条件不变。研究证明,高压电晕电场是一种有效的诱变方式,且筛选出的菌株B16106-2性能良好。     

Neurospora crassa产木聚糖酶发酵条件及酶学特性

从青藏高原土壤中筛选出一株产木聚糖酶较高的菌株Neurospora crassa SD10。通过单因素试验和正交试验对菌株进行发酵条件优化和酶学性质探究。结果表明,菌株SD10最佳发酵条件为:麸皮30 g/L、蛋白胨20 g/L、Mn2+0.5 g/L、培养温度33℃、转速230 r/min、接种量2%、初始pH值8.0、发酵时间84 h。菌株产木聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应p H值为6.0,在40～50℃和pH值4.0～8.0时有较好的稳定性,能保持80%以上酶活力,Fe2+、Zn2+、K+对酶活力有促进作用,Na+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、Cu2+对酶活力有抑制作用。Neurospora crassa SD10优化后产木聚糖酶活力达9.4 U/mL,所产木聚糖酶具有良好的pH值稳定性。     

黑曲霉生产木聚糖酶固态发酵及粗酶制剂性质的研究

筛选了一株产木聚糖酶活力较高的黑曲霉菌株 ,研究了其固体培养的工艺条件。该菌的最适培养条件为 :起始 pH 4 .8,2 8℃ ,孢子悬液接种量 1 0 % ,玉米秸粉∶麸皮 (6∶4 ) ,培养时间 72h。木聚糖酶活力最高达 2 6 5 0IU/g ,营养盐、pH值及发酵时间对木聚糖酶活力影响较大。该酶的最佳作用条件 :温度 5 0℃、pH 4 .6 ,在不同温度下保温 1h ,测得半失活温度 (t1 / 2 )为 5 2℃。盐析后的酶粉活力为 91 0 5IU/g ,收率 5 0 %。酶对 3种底物降解力依次为麸皮、玉米芯和玉米秸     

黑曲霉固体发酵木聚糖酶条件的优化

采用单因素试验对黑曲霉（Aspergillus niger）Y-2菌株产木聚糖酶的固体发酵条件进行了研究。结果表明,以麸皮和玉米芯（7：3）作为复合碳源,1%的（NH4）2SO4作为氮源,添加0.5%的无机盐KH2PO4,料水比为1：1.4,接种量为5%,32℃培养72h时,菌株产木聚糖酶活力达到了5213 U/g干物质,比未优化前提高了127%。     

饲用木聚糖酶菌株的筛选及鉴定

利用刚果红透明圈法,从采集的土样中筛选分离一株产木聚糖酶的菌株,根据其形态学和生理生化特征,结合16 SrDNA分子水平分析,鉴定该菌为短小芽孢杆菌。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌株酶活力可达132.53 IU/mL。     

饲用木聚糖酶固态发酵工艺条件研究

木聚糖酶作为饲料添加剂,可以强化禽畜消化道分解饲料的功能,促进营养物质的吸收。通过单因素试验和正交试验对黑曲霉A-3固态发酵生产饲用木聚糖酶的工艺条件进行了研究。优化的发酵条件如下:采用麸曲种子接种,接种量为10%;装料量为5g/300ml三角瓶、初始pH值为5.5、培养温度为35℃、料水比为1:1.5、培养时间为84h。在优化条件下,菌株产木聚糖酶活力达8291.75IU/g,比优化前提高了63.73%。     

产木聚糖酶类芽孢杆菌SD-29发酵条件优化

研究旨在对类芽孢杆菌SD-29产木聚糖酶的发酵条件进行优化,获取最佳发酵条件。以类芽孢杆菌SD-29为出发菌株,对其所产木聚糖酶的酶学性质进行分析,通过单因素试验对培养基中的碳源、氮源、金属离子以及初始p H值、接种量、发酵温度和发酵时间进行优化。结果发现,最佳发酵条件为麦芽糖15 g/L、牛肉膏2.5 g/L、NaNO_3 2 g/L、KCl 0.5 g/L、Ca Cl_2 0.3 g/L,初始pH值为7,以2%的接种量接种,30℃、200 r/min培养18 h后,测得发酵上清液酶活为0.663 U/m L,与初始酶活0.144 U/m L相比,扩大了3.6倍。通过单因素试验优化类芽孢杆菌SD-29产酶发酵条件,木聚糖酶活力得到提高,该研究为后续木聚糖酶的性质研究和异源表达奠定基础。     

产酸性木聚糖酶链霉菌的鉴定、酶学特性及发酵工艺研究

木聚糖是谷物类饲料中的主要抗营养因子。为筛选高效降解半纤维素的菌株,提高粗饲料利用率,本试验采用水解圈法从土壤中筛选出1株产木聚糖酶的细菌,经鉴定为灰略红链霉菌,命名为Streptomyces griseorubens WL003。该菌所产木聚糖酶的最适酶促反应温度和p H分别为65℃、4.5,于30~55℃处理10 min后,残余酶活不低于80%;于p H 3.5~11.0处理1.5 h,残余酶活仍保持在88%以上;Tween-80可提高木聚糖酶活力,而Cu2+、SDS及β-巯基乙醇则会较强地抑制酶活。该菌株以9%接种量接种至最适发酵培养基,碳源为10%麦秸,氮源为1.41%牛肉膏,0.1%吐温-80,初始p H为6.0,经32℃、180 r/min下培养7 d时,所产木聚糖酶活性最高,可达50.82 U/m L,为优化前2.5倍。菌株WL003对麦秸的粗纤维降解效果最好,对苜蓿草粉的粗纤维降解效果最差。证明从土样分离到的酸性木聚糖酶菌株WL003,在降解饲料粗纤维方面具有较好的应用潜力。     

好食脉孢霉液态发酵产木聚糖酶的研究

试验以豆渣和麸皮为主要原料,研究了好食脉孢霉菌株产木聚糖酶的液态发酵条件。以木聚糖酶的催化活力为指标,确定液态发酵培养基由麸皮、豆渣和蛋白胨组成,初始pH值5.0、培养温度28℃、摇床转速150 r/min,培养72 h后木聚糖酶活力可达到476 U/ml。     

产低温纤维素酶和木聚糖酶真菌的筛选鉴定及酶学性质

试验从青藏高原高寒草甸土壤中筛选低温降解纤维素的菌株,探究酶学性质.采用刚果红染色法(水解圈法)和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法对菌株所产纤维素酶和木聚糖酶进行酶学性质分析,采用形态学和分子生物学进行菌种鉴定.结果 显示,从高寒草甸土壤样品中筛选出一株能同步产生低温纤维素酶和低温木聚糖酶的菌株FY8,经鉴定该菌株为枝...     

木聚糖酶生产研究

木聚糖酶是降解非淀粉多糖的主要酶种之一。本文介绍了以一株霉菌为初始菌，生产木聚糖酶的方法。该菌株生产性能稳定，所产生的木聚糖酶在40℃具有较高活性，具有使用价值。     

MB22木聚糖酶发酵条件的研究

通过因素轮换试验和正交试验,对MB22菌产木聚糖酶的培养基配方和发酵条件进行了研究。结果显示最佳培养基组成是:以玉米芯粉和麸皮为碳源,麸皮120g/l,玉米芯280g/l,(NH4)2SO44g/l,CaCO31.5g/l,Tween80,2.0g/l,MgSO4·7H2O1.5g/l;最佳发酵条件为:起始pH5.0,摇床培养温度30℃,转速160r/min,振荡培养84h。在最佳发酵条件下,MB22菌的最高产酶活力可达898.23U/ml。虽然与一些高产菌株相比该菌株的产酶能力还有待于进一步提高,但该试验结果为进一步进行微生物生产木聚糖酶的研究提供了理论依据。     

饲用复合酶固体发酵工业化生产

宇佐美曲霉YW-38是一株高产饲用复合酶的生产菌株。在20m3自动固体发酵罐内32～35℃间断通风发酵64h,YW-38产酸性蛋白酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶和淀粉酶等复合酶系,其中:酸性蛋白酶和木聚糖酶活力分别为15200和1200U/g。本试验研究了YW-38菌株的工业化生产的最佳培养基配方和发酵工艺条件。发酵培养基组成为:麸皮800kg,豆饼粉200kg,(NH4)2SO420kg,KH2PO45kg,水分55%～58%,pH值6.2～6.5,发酵过程中补加2次无菌水,每次200kg。     

黑根霉发酵产木聚糖酶的条件优化

利用本实验室提供的黑根霉CY8降解玉米秸秆产木聚糖酶，观察了接种量、碳源、氮源、金属离子、表面活性剂对产木聚糖酶活和纤维素酶活的影响，确定最佳培养条件为：接种量3ml，碳源m（麦麸）：m（玉米芯）和m（麦麸）：m（玉米秸秆）均为3：7，氮源为尿素，Co2＋、Mg2＋、Na＋、K＋对木聚糖酶有促进作用，Mg2＋的激活作用最大，可使酶活性提高37.4％，其它离子如Ca2＋。‘对酶活的影响较小。Tween80表面活性剂对菌株产木聚糖酶有促进作用。在不同温度下观察了酶的热稳定性，结果表明：该酶热稳定性较差，在50C以下热稳定性较好（木聚糖酶活计），而随着温度的升高，酶活力很快丧失．当温度达到80℃时，酶活在40min内就全部丧失。     

1株产碱性木聚糖酶的芽胞杆菌的分离鉴定及其相关研究

分离到1株产碱性木聚糖酶的革兰氏阳性菌株,通过菌落形态及16srDNA序列同源性分析,确定该菌株为短小芽孢杆菌。生长条件和产酶条件研究结果显示,最适温度和pH分别为50℃和pH8·0。培养基优化试验显示在有机和无机混合氮源条件下(NH4NO30·57%;牛肉膏1%;蛋白胨0·5%;酵母提取物0·5%;木聚糖0·5%)木聚糖酶产量达到最高(180U/mL)。酶学试验表明最适反应条件为50℃,pH8~9;在pH9的条件下,孵育120min时仍具有75%的活力,表明该酶具有较强的碱耐受性。     

小麦基础饲料添加木聚糖酶对鲤鱼体成分及消化酶活力的影响

研究旨在观察外源添加木聚糖酶对鲤鱼体成分及消化酶活力的影响,探讨木聚糖酶促进鲤鱼生长的机理。以平均体重为(48.2±0.46)g鲤鱼(Cyprinus carpio)为试验对象,小麦基础饲料为对照,基础饲料中分别添加不同水平(0.05%、0.10%、0.15%)的木聚糖酶为试验饲料。每个处理设4个重复,每个重复放养50尾鲤鱼。饲喂62 d后测定鲤鱼增重率、体成分以及消化酶活力。结果表明,木聚糖酶添加组增重率较对照组分别提高22.5%、8.3%和18.9%(P<0.01);粗脂肪含量较对照组分别提高7.62%、10.17%和7.96%(P<0.01);0.05%和0.10%组钙含量较对照组分别提高8.62%和10.34%(P<0.05);3个试验组磷含量均极显著高于对照组(P<0.01)。试验组肝胰脏蛋白酶活力较对照组分别提高2.53%(P>0.05)、23.4%(P<0.01)和19.03%(P<0.01),试验组肝胰脏淀粉酶活力较对照组分别提高13.23%(P<0.01)、18.51%(P<0.01)和8.38%(P<0.01);试验组肝胰脏木聚糖酶和脂肪酶活力以及肠道木聚糖酶、淀粉酶和脂肪酶的活力较对照组均有所提高。小麦基础饲料中添加木聚糖酶,可以改变鲤鱼体成分,提高肝胰脏和肠道消化酶活力,增强鲤鱼对营养物质的消化吸收,促进生长。     

α-淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育

从土样、水样和面样中分离产α-淀粉酶的芽胞杆菌,对3个样品进行淀粉平板分离和革兰氏染色、芽胞染色,选出产α-淀粉酶芽胞杆菌10株(土样4株、面样3株、水样3株).同时测得其水解圈直径与菌落直径的比值,均在1.9～2.6之间,通过产淀粉酶液体培养基发酵产酶,采用比色法测定发酵液中α-淀粉酶活力均在4.8～5.7 g/mL之间.以筛选出产酶活力较高的菌株为出发菌株,进行紫外线诱变选育,经过大量筛选得到优良菌株,在适宜条件下经过发酵其α-淀粉酶活力可达9.6～13.0g/mL,较出发菌株酶活力提高了69.9%～129.5%.