枯草芽孢杆菌突变株的构建及其对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响

试验旨在研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)不萌发芽孢和不生孢营养体对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响。利用同源重组敲除B.subtilis PY79芽孢萌发基因clW-gerD和生孢早期基因spo0A,构建芽孢不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-,提取基因组DNA进行PCR检测;结合革兰氏染色和萌发率检测,分别对构建的B.subtilis芽孢不萌发突变株和不生孢突变株进行萌发和生孢能力鉴定;将B.subtilis clW-gerD-和B.subtilis spo0A-分别与猪肺泡巨噬细胞共培养,用ELISA试剂盒检测细胞因子分泌表达水平。结果表明:(1)成功获得不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-;(2)萌发和生孢能力检测结果显示,B.subtilis clWgerD-完全丧失芽孢萌发能力;显微镜观察和生孢率检测表明不生孢突变株B.subtilis spo0A-丧失了生孢能力;(3)B.subtilis clW-gerD-极显著的促进了细胞因子IL-6的表达(P0.01);B.subtilis clW-gerD-、B.subtilis PY79和B.subtilis spo0A-对细胞因子IL-1β、IL-10和IL-8的表达量无显著影响(P0.05)。B.subtilis clW-gerD-可刺激巨噬细胞分泌促炎因子IL-6,增强MΦ3D4/2细胞的炎症反应,提高机体的抗感染能力。     

公猪的饲养管理

1饲养原则 提供所需的营养以使精液的品质最佳,数量最多;为了交配方便,延长使用年限,公猪体重不应太大,这就要求限制饲养。最好选用特制公猪料,日喂2次,每头喂2．5～3．0kg／d,适当补充维生素,配种期每天补喂一枚鸡蛋,每餐不要喂得过饱,以免猪饱食贪睡,不愿运动造成过肥,喂鸡蛋于喂料前进行。     

沙地刚性轮构型仿生设计及牵引性能数值分析

为了提高车轮牵引性能,改善车辆在松散沙土介质环境的通过能力,该文以善于沙地奔跑的鸵鸟足部关键部位—足趾甲为仿生原型,通过仿生优化轮刺结构,设计出具有高牵引性能的仿生轮刺式沙地刚性轮,并以一种模拟月壤作为试验松散沙土介质材料,采用离散元软件PFC2D?的内置语言FISH和相关命令,建立了适用于非规则结构刚性轮的轮壤相互作用动态模拟系统,并获得试验验证。通过仿生轮刺式刚性轮与模拟月壤相互作用离散元模拟,并与矩形轮刺式刚性轮模拟结果对照,从轮下模拟月壤颗粒细观运动、接触力场、速度场以及车轮挂钩牵引力角度,验证了仿生轮刺式刚性轮具有优越的牵引性能,在车轮滑转率50%的稳定运行状态下,仿生轮刺式刚性轮的牵引性能可提高5.2%左右。该研究为提高刚性轮在松散沙土介质环境中的牵引性能提供了全新设计和研究手段。     

母猪的管理要点

1 后备母猪的饲养管理要点1.1 75kg后备母猪当后备母猪体重达到75kg时,饲喂母猪料,最好是专门的后备母猪料,适当调整饲料配方,以保证后备母猪适宜的肥瘦度.1.2 105kg后备母猪这时需要接种疫苗并用公猪诱情刺激,每种疫苗接种时间最好间隔7d.     

枯草芽孢杆菌bioW基因在大肠杆菌中的表达及其对宿主生长的抑制作用

【目的】克隆枯草芽孢杆菌(B.subtilis)生物素基因(bioW),在bioW基因缺陷型大肠杆菌中进行表达,探讨其对bioW基因缺陷型大肠杆菌的遗传互补作用和对宿主的生长抑制作用,为生物素基因工程菌的构建奠定基础。【方法】用大肠杆菌表达载体pEXT20和枯草芽孢杆菌bioW基因构建表达载体pEXT20-bioW,并将其转化到大肠杆菌DH5α和生物素基因缺陷型大肠杆菌株R876中,构建重组菌DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)。分别将R876、DH5α(pEXT20-bioW)、R876(pEXT20-bioW)在不同培养基和不同IPTG浓度下进行培养,检测bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌株的遗传互补和生长抑制作用。【结果】在生物素限制性培养基中,只有同时加入庚二酸和IPTG时,R876(pEXT20-bioW)才能生长。在不含IPTG的LB培养基中,R876(pEXT20-bioW)生长正常;在添加不同浓度IPTG的LB培养基中,DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)生长均受到不同程度的抑制。【结论】bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌有遗传互补作用。在大肠杆菌中,bioW基因的表达对宿主有生长抑制作用。     

鼻中隔偏曲合并下鼻甲肥大同时行下鼻甲手术的临床观察

目的：探讨鼻中隔偏曲合并下鼻甲肥大同时行下鼻甲手术的适应症。方法：49例以鼻塞为主诉的鼻中隔偏曲合并对侧下鼻甲肥大的病人，根据下鼻甲大小将下鼻甲分为1、2、3度肥大，下鼻甲1度肥大8例，不行下鼻甲手术未进入统计。2度肥大24例，3度肥大17例，随机分为下鼻甲同时手术组和非手术组，用问卷调查表和鼻呼气量（鼻用力呼气量，即1秒量，NFEV1）测定的方法进行评价分析。结果：24例合并2度下鼻甲肥大的病人，同时行下鼻甲手术14例，术后8周鼻塞症状改善（P〈0.001）、鼻呼气量增加（P〈0.05）有显著性意义；10例未同时行下鼻甲手术，术后鼻塞症状改善（P〈0.05）有显著性意义、鼻呼气量增加（P〉0.05）无显著性意义。17例合并3度下鼻甲肥大，9例同时行下鼻甲手术，术后8周鼻塞症状改善（P〈0.001）、鼻呼气量增加（P〈0.001）有显著性意义，8例未同时行下鼻甲手术，术后鼻塞症状改善及鼻呼气量变化（P〉0.05）均无显著性意义。结论：鼻中隔偏曲合并3度下鼻甲肥大时应同时行下鼻甲手术，合并2度下鼻甲肥大时要结合鼻塞程度而定。     

母猪发情与配种

1发情 1．1发情时间 母猪发情周期平均21d（18—24d）,经产母猪一般断奶后一周内（3—7d）,可再次发情排卵,配种受孕,每次发情持续时间为3～5d,后备母猪比经产母猪持续时间长。     

产耐热性纤维素酶菌株的分离·鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐热性纤维素降解细菌菌株,进行鉴定并研究其酶学特性。[方法]采用刚果红法从腐烂秸秆与腐殖质土壤样品中分离纤维素降解菌,通过形态学观察与16S rRNA序列分析鉴定其种属,并对该纤维素酶进行酶学性质研究。[结果]筛选到1株纤维素酶活性高的菌株NP29,经鉴定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)微生物。对该菌所产纤维素酶酶学特性的研究表明,该酶反应的最适pH为4.5,最佳反应温度为65℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。在37℃、pH7.0的条件下,该菌株在发酵36 h后纤维素酶活性可达1.8 U/ml,且产酶量与细菌生长密切相关。[结论]     

耐高温纤维素酶产生菌的筛选鉴定及酶谱分析

采用稀释平板-刚果红染色法从腐木中分离到1株产耐高温纤维素酶的菌株CY15-10.通过形态观察、特征培养及16 S rDNA序列分析,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa).该菌株经摇瓶发酵后测定粗酶液CMC酶活为1.27 U/mL,最适反应温度为55℃,热稳定性较好.经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及酶谱分析表明该菌株向胞外分泌1种纤维素酶组分,酶分子质量约为35 ku.     

纤维素酶高产菌的筛选鉴定及纤维素酶基因的克隆与表达

为寻找新纤维素酶和纤维素酶基因资源,以羧甲基纤维素钠(CMC)改良的BHM培养基筛选菌株,经初筛和复筛筛选出目的菌株后,采用革兰氏染色法和16SrDNA基因片段比对法对筛选出的菌株进行鉴定;设计引物对P扩增其纤维素酶基因,连于pET-28a(+)载体构建原核表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,表达结果采用SDS-PAGE和测定表达产物活性的方法来检验。结果显示,本研究成功筛选出一株新的具有较高纤维素酶活的短小芽孢杆菌BY-1,该菌所产纤维素酶具有较好的热稳定性和酸碱稳定性,最适宜温度和pH分别为55℃和7.45,在此条件下最高酶活性为0.921 6μmol/(mL.min);此外,还成功克隆出1个1 851bp的纤维素酶新基因bglC-BY,具有GH9/CBM3纤维素酶结构,经IPTG诱导,SDS-PAGE图谱上于70ku有1个明显的蛋白条带,表达产物酶活性为0.541 3μmol/(mL.min)。本研究筛选出的短小芽孢杆菌内切纤维素酶活较高,具有一定的应用前景。