褪黑素受体在牦牛子宫中的表达分析

为探究褪黑素受体（MTNR）在牦牛子宫中的定位及表达与妊娠的关系,本研究利用免疫组织化学技术（S-P法）分别检测未妊娠、妊娠25~45 d、妊娠50~85 d、妊娠90~110 d牦牛子宫中MTNR的表达情况。结果表明：MTNR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、肌层平滑肌细胞均有表达;不同妊娠阶段牦牛子宫中的基质细胞和肌层平滑肌细胞中均有MTNR的表达,但其差异性不显著（P〉0.05）;血管内皮细胞和血管平滑肌细胞中的MTNR表达强度随着妊娠阶段时间的增加且差异性显著（P〈0.05）;腺上皮细胞中的MTNR在妊娠后期表达强度增加且差异极显著（P〈0.01）;腔上皮细胞的MTNR在妊娠后期表达强度降低（P〈0.01）。     

发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成素受体的表达变化

为研究发情周期不同阶段牦牛子宫中黄体生成索受体(LHR)的定位及表达变化,笔者利用免疫组织化学SP法分别检测发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中LHR的表达,并进行光密度值分析.结果表明,LHR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和肌层平滑肌细胞中均有表达;腺上皮细胞、基质细胞和肌层平滑肌细胞中LHR在发情前期和发情期表达最弱,发情后期表达增加,间情期表达最强(P＜0.05);子宫内膜血管平滑肌细胞中LHR的表达在发情期最强,间情期最弱(P＜0.05);血管内皮中LHR在发情期和发情前期表达很强,发情后期和间情期显著下降(P＜0.05).结果表明LHR参与了发情周期不同阶段牦牛子宫功能变化的调控.     

脂联素在动物心血管疾病中的作用机制研究进展

脂联素是一种关键的细胞因子,主要由脂肪细胞、心肌细胞以及内皮细胞和骨骼细胞释放到循环血液中的调节激素,是一种内源性生物活性多肽或蛋白质,参与多种生物学过程,如脂质代谢、能量调节、炎症和胰岛素敏感性,具有增强血管内皮功能、抗炎、抗氧化、抗凋亡以及抗心肌缺血/再灌注损伤等多种生物学特性。脂联素可以通过改善脂质代谢、保护血管内皮细胞、抑制泡沫细胞形成和血管平滑肌细胞增殖来预防心血管疾病。脂联素作为机体含量最丰富的脂肪细胞因子,在代谢性心血管疾病中发挥着多方面的作用。综述脂联素在心血管疾病中的作用及机制研究进展,以期为阐明动物心血管疾病的发病机制和指导临床防治工作,具有一定理论价值和实践意义。     

镉对鸡主动脉ATPase活性和超微结构的影响

对低、高镉组的性未成熟鸡的主动脉组织ATPase活性进行检测,并采用电镜对其进行超微观察以揭示镉对血管的毒性作用。结果:染镉组ATPase活性降低,高镉组内皮细胞、平滑肌细胞染色质浓缩边集,核碎裂、甚至透亮而空泡化等变化。表明:镉对血管有损伤作用,病变程度具有剂量效应,且与ATPase活性减低有关。     

猪水肿病的成因及发病机制

猪水肿病(ED)由肠毒血症大肠杆菌(ETEEC)引起.在母源抗体IgA下降、饲料中蛋白质含量过高、缺硒和过食等诱因的刺激下,猪肠道内大肠杆菌迅速繁殖,依靠定植因子粘附到肠粘膜细胞上,并产生SLT-Ⅱe毒素.SLT-Ⅱe是一种热不稳定蛋白质,它能与血管内皮细胞和平滑肌细胞上的受体结合,阻碍细胞内蛋白质合成,造成血管损害而致水肿.     

促卵泡素受体和促黄体素受体在猪子宫中的定位研究

为探明2种促性腺激素受体（FSHR、LHR）在猪子宫中的位置分布,本试验运用免疫组化ABC法对卵泡期、黄体期猪的子宫FSHR、LHR分别进行定位染色。结果显示,FSHR阳性细胞主要见于子宫内膜上皮细胞、血管平滑肌细胞。LHR阳性细胞主要见于子宫内膜上皮细胞、子宫肌层平滑肌细胞及血管平滑肌细胞;动情周期不同,FSHR、LHR的表达量也不同。卵泡期子宫内膜上皮细胞FSHR的表达量高于黄体期,血管平滑肌FSHR的表达量低于黄体期;卵泡期子宫血管平滑肌细胞LHR的的表达量高于黄体期,而子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞LHR的表达量均低于黄体期。     

猪水肿病的成因及发病机制

猪水肿病（ED）由肠毒血症大肠杆菌（ETEEC）引起。在母源抗体IgA下降、饲料中蛋白质含量过高、缺硒和过食等诱因的刺激下，猪肠道内大肠杆菌迅速繁殖，依靠定植因子粘附到肠粘膜细胞上，并产生SLT－IIe毒素。SLT－IIe是一种热不稳定蛋白质，它能与血管内皮细胞和平滑肌细胞上的受体结构，阻碍细胞内蛋白质合成，造成血管损害而致水肿。     

与动脉粥样硬化相关细胞的研究进展

随着心脑血管疾病发病率逐年增高,动脉粥样硬化(ath-erosc lerosis,AS)已成为我国医学研究的重点。大量的研究表明,AS的形成过程主要包括:内皮细胞损伤和单核细胞粘附;泡沫细胞形成;平滑肌细胞由中层向内膜移行、增殖;动脉粥样斑块形成。通过了解各种细胞在AS形成中所起的作用,就能更深入地理解AS的发生机理。现就目前与AS的形成发展相关的各种细胞的研究综述如下。1内皮细胞(endothelial cell,EC)1·1形态学特性衬贴于心血管内腔表面的单层扁平细胞为血管内皮细胞,简称内皮细胞。在生理状况下,EC呈扁平状,处于无生物合成的“静止”状…     

血管内皮细胞的分离和培养

血管内皮细胞位于循环血液与血管壁内上组织之间,是一种多功能的细胞。本文综述了血管内皮细胞分离和培养的方法,并对内皮细胞的鉴定及分离和培养中常见因素进行了介绍,阐明了血管内皮细胞分离和培养方法的完善具有广阔的应用前景。     

镉对鸡血管病理形态与超微结构变化的研究

为了探讨镉对鸡血管的毒性作用,试验采用H.E.染色,运用光镜、电镜观察镉中毒的性未成熟鸡的主动脉和前腔静脉组织的显微和超微结构变化。结果表明:镉对鸡血管有明显的毒性作用,主要表现为光镜下血管细胞水肿变性;高镉组、低镉组鸡血管均发生不同程度的病理组织学变化,其中高镉组表现为内皮细胞、平滑肌细胞染色质浓缩边聚,膜芽状突起,DNA降解,胞浆浓缩和形成含有变性浓缩核的凋亡小体等病变,且病变程度随染镉剂量的加大而加重。     

H1N1亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆与表达

应用RT-PCR方法扩增了1株H1N1亚型猪流感病毒的血凝素基因,并克隆到pMD 18-T Simple载体中,经PCR、酶切和测序验证克隆正确后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )中,构建了重组质粒pcDNA-HA。在脂质体作用下重组质粒pcDNA-HA转染Vero细胞。间接免疫荧光试验结果表明,血凝素基因在Vero细胞中成功进行了瞬时表达,这为猪流感病毒DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。     

Further Development of an Equine Cell Line that can be Propagated over 100 Times

Cell lines originating from horses are necessary for isolation and propagation of equine herpesviruses (EHV). Although we established an equine-derived cell line, FHK-Tcl3, propagation ceased after fewer than 40 passages. In this study, FHK-Tcl3 cell propagation continued beyond 40 passages, achieving over 100 passages. FHK-Tcl3 cells were then cloned by limiting dilution at the 100th passage. Cloned cells were termed FHK-Tcl3.1. FHK-Tcl3.1 cells grew well and were propagated every 3 to 4 days by splitting 1:5. In addition, EHV-1, -2 and -4 showed a clear cytopathic effect (CPE) in FHK-Tcl3.1 cells, and this CPE was very similar to those seen in parental FHK-Tcl3 and primary fetal horse kidney cells. FHK-Tcl3.1 cells continue to propagate and the current passage record is over 100 times after cloning. Therefore, this cell appears to have been immortalized. FHK-Tcl3.1 cells have potential for growth and diagnosis of various equine viruses, including equine herpesviruses.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3/GP5/M真核表达载体的构建及其体液免疫应答

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒。以PRRSV LN株为模板,采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段,将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5-M,然后将GP3与GP5-M双酶切后插入pcDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,将其转染COS7细胞。PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,间接免疫荧光检测表明GP3、GP5-M蛋白在COS7细胞内获得表达。Western blotting检测证实GP3、GP5、M蛋白获得正确表达,并且所表达的GP3、GP5、M蛋白是融合蛋白。将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免后2周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32。进一步将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫断奶仔猪,首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体。本试验成功构建了表达PRRSV GP3、GP5和M融合蛋白的真核重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗体检测表明pcDNA3.1-GP3-GP5-M具有良好的免疫原性,从而为PRRSV基因工程疫苗的研制奠定基础。     

人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立

 以人肝cDNA为模板克隆了人血小板生成素（Human Thrombopoietin,hTPO）基因,利用基因重组技术构建了带有新霉素抗性基因（neo）筛选标记的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表达载体,将重组质粒瞬时转染293T细胞,用鼠抗人TPO 单抗Western blot 检测 TPO蛋白的瞬时表达;再将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),应用400 μg/mL的G418筛选克隆,经PCR及Western blot验证,获得了3株hTPO蛋白表达水平不同的CHO细胞系,为获得大量蛋白并进行活性功能试验及临床应用奠定基础。     

脂多糖对胚胎附植期Toll样受体4及相关免疫因子的影响

试验旨在探讨脂多糖（LPS）对绵羊胚胎附植期Toll样受体4（TLR4）及相关免疫因子表达的影响。以构建好的pcDNA3.1-TLR4过表达载体转染绵羊子宫内膜基质细胞,运用Western blotting技术鉴定细胞转染效果,然后用1 μg/L LPS刺激转染后的子宫内膜基质细胞,建立内膜基质细胞炎症模型。将经LPS处理的细胞分别培养12、24、48、72 h,采用实时荧光定量PCR技术和Western blotting法检测内膜基质细胞中TLR4 mRNA及蛋白表达量,以及免疫因子IL-1β和IL-6的mRNA表达水平,并以未经LPS处理的细胞作为对照。结果显示,与对照组相比,LPS促进了免疫因子IL-1β、IL-6的释放量,但随LPS作用时间的延长,细胞中IL-6的表达量逐渐下降,而IL-1β的表达量逐渐升高,使得Th1/Th2偏向不利于妊娠的Th1方向表达;TLR4 mRNA相对表达量在12、24、72 h均显著高于对照组（P<0.05）,48 h时极显著高于对照组（P<0.01）,且LPS处理后的细胞TLR4蛋白表达量也始终高于对照组。综上所述,pcDNA3.1-TLR4过表达载体成功转入绵羊子宫内膜基质细胞;LPS有效激活了子宫内膜细胞中TLR4信号通路,并促进了下游因子的表达;子宫蜕膜组织中TLR4受体蛋白对胚胎附植早期妊娠微环境的平衡维持也起到了重要作用。     

端粒逆转录酶基因修饰对绵羊骨髓间充质干细胞端粒酶活性影响的研究

骨髓间充质干细胞(BMSC)具有多向分化的特性,但其生命周期有限,为进一步探讨端粒逆转录酶(TERT)对端粒酶活性的影响,本试验利用将外源性TERT导入间充质干细胞技术,构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT,将其转染BMSC,通过筛选及鉴定,结果显示成功构建了重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT.将TERT-BMSCs在体外进行传代培养及生长曲线的测定,利用PCR技术对其原有干细胞因子的表达情况进行了鉴定.结果显示,TERT-BMSC具有快速扩增的能力,细胞形态良好,且仍具有干细胞特性.本试验结果揭示了外源性TERT基因的表达能激活绵羊BMSC的端粒酶活性.     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

生殖细胞来源于原始生殖细胞,其在体内的分化机制已基本清楚。随着生殖细胞研究的不断深入,通过体外诱导途径获得生殖细胞已成为现实。将胚胎干细胞体外分化为上胚层样细胞,进而分化为原始生殖样或原始生殖细胞。将它们迁移入胎儿生殖腺,具有减数分裂及产生精子能力,与卵子结合移入缺生精管的生殖腺的新生鼠可以产生健康后代。为此,体外诱导生殖细胞的成功,进一步阐明了胚胎干细胞向生殖细胞分化的机制,为更有效利用干细胞造福人类奠定了基础。     

山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SM ILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响.本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝克隆技术将所获得各目的 基因片段与线性化pcDNA3...