内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌毒力基因的分布情况及其耐药现状,通过该地区360份乳房炎奶样链球菌的分离鉴定,利用微量肉汤稀释法测定了81株链球菌对15种药物的MIC,采用PCR法检测耐药基因及毒力基因的携带情况。结果显示,分离到的81株链球菌对β-内酰胺类的耐药率最高;对红霉素和四环素的耐药率在40%~85%;对氟喹诺酮类的耐药率相对较低。多重耐药菌株达88.9%(n=72)。耐药基因pbp2b的检出率为86.4%,tetL和tetM的检出率在75%以上,红霉素耐药表型主要由ermB介导。分离菌株毒力基因中cfb的检出率最高(50.6%),其次为cyl和hylB。内蒙古地区奶牛乳房炎链球菌对β-内酰胺类、大环内酯类和四环素耐药情况严重,且发现多重耐药菌株的流行;链球菌中尤以无乳链球菌的毒力基因携带率较高。     

宁夏吴忠地区奶牛临床型乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解宁夏吴忠地区奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,采集56份罹患乳房炎的奶牛乳样进行病原菌分离,并对分离菌进行了生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,该地区的主要病原菌为大肠埃希氏菌和无乳链球菌,检出率分别为23.2%和14.3%。药敏试验结果表明,大肠埃希氏菌主要对头孢他啶、环丙沙星敏感,无乳链球菌主要对阿米卡星敏感。耐药基因检测结果表明大肠埃希氏菌和无乳链球菌主要对氨基糖胺类、氟喹诺酮类、四环素类药物敏感,大肠埃希氏菌对磺胺类药物耐药,对β-内酰胺类药物部分药物敏感,部分药物耐药;无乳链球菌主要对磺胺类药物和β-内酰胺类药物耐药。     

8株奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定与耐药性分析

对湖南地区某奶牛场隐性乳房炎发病牛病原菌感染和耐药情况进行分析.对该牛场连续5次送检的乳样进行分离纯化培养、16sRNA PCR测序、药敏试验以及耐药基因检测.结果显示:共分离出链球菌8株.基因测序鉴定显示乳房链球菌4株、停乳链球菌2株、A群链球菌2株;药敏试验显示8株链球菌对氨苄西林、头孢拉定、万古霉素高度敏感,对阿奇霉素、四环素中度敏感,对诺氟沙星、庆大霉素、链霉素不敏感;耐药基因检测显示大环内酯类耐药基因ermB、喹诺酮类耐药基因gyrA、ParC检出率最高,与细菌耐药谱相关性不强.     

无乳链球菌耐药性及耐药基因检测

为了解昆明地区奶牛隐性乳房炎无乳链球菌分离株对常用抗生素的耐药性及耐药基因携带情况,采集昆明某地区隐性乳房炎患牛乳样71份检测。结果显示,分离到的15株无乳链球菌,对青霉素类、红霉素、林可胺类等抗生素存在不同程度的耐药现象,多重耐药现象也比较严重,分离菌共出现10种耐药谱,其中7耐和8耐的占有60%。对青霉素严重耐药,其耐药率达到了100%。其中,PCR扩增β-内酰胺类和大环内酯类耐药基因,结果显示,15株无乳链球菌均含有pbp1a、pbp2b、erm B基因,表明,本地区不能继续使用青霉素等药物来治疗奶牛乳房炎,应选择敏感性的药物,如头孢类抗生素等。同时应合理交叉用药,以防细菌产生耐药性。本试验为昆明地区无乳链球菌引起的隐性奶牛乳房炎的防治提供了一定的依据。     

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。     

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac（6'）-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac（6'）-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。     

陕西省奶牛乳房炎乳中凝固酶阴性葡萄球菌的分离及耐药性分析

为了解陕西省部分地区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci,CNS)耐药性及耐药基因携带情况,采集陕西地区16个奶牛场88份临床型乳房炎奶样,分离得到29株CNS。采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测并计算分离株表型耐药率与所携带相关耐药基因的阳性率,并比较两者的相符率。结果显示,分离的29株CNS对林可霉素表现出完全耐药,对青霉素、克拉霉素、磺胺异噁唑等7种药物的耐药率在65.5%以上,对诺氟沙星、环丙沙星、多西环素等12种药物的耐药率为6.9%～55.2%。分离菌株还表现了较强的多重耐药性,其中93.1%的CNS分离菌株能耐5种以上的抗生素;分离的29株CNS耐药基因dfrG、Blaz、InuA、mecA阳性率为27.6%～55.2%,耐药基因msrB、ermC的阳性率小于20.7%,耐药表型与耐药基因型相符率为10.7%～85.7%。说明从陕西地区分离的CNS表现出不同程度的耐药性,且多为多重耐药,耐药基因与耐药表型的相符率比较低。研究结果为引起奶牛乳房炎的CNS防控提供了依据。     

奶牛乳腺炎无乳链球菌的分离鉴定与耐药性分析

奶牛乳腺炎是奶牛养殖业的常见疾病,而无乳链球菌是乳腺炎的重要病原体之一。本试验从江苏和河北地区的规模化奶牛场中共收集67份乳腺炎奶样,经分离培养和鉴定,共分离出33株无乳链球菌。药敏试验表明:河北地区和江苏地区奶牛场的分离株对阿莫西林、头孢氨苄等β-内酰胺类药物以及恩诺沙星等喹诺酮类药物高度敏感,而对链霉素、庆大霉素、卡那霉素以及丁胺卡那等氨基糖苷类药物均表现出较高的耐药性。此外,河北地区分离株对四环素、多西环素这两种药物比较敏感,但在江苏地区无乳链球菌对这两种药物表现出了较强的耐药性,耐药率均高达74.1%。说明不同地区的无乳链球菌耐药情况有一定的差异。本研究结果可为临床上用抗生素预防和治疗乳腺炎提供参考。     

上海地区奶牛的乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性

为调查上海地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性,采集上海地区乳房炎患病乳样60 份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏实验。结果表明：经分离鉴定,共检出8 株金黄色葡萄球菌,分离率为13.33%;药敏实验结果表明,分离得到的金黄色葡萄球菌对青霉素G和氨苄西林的耐药率最高,均为100.00%,对磺胺甲恶唑的耐药率次之,为50.00%,对头孢克洛、头孢唑肟、洛美沙星、诺氟沙星、四环素、庆大霉素、红霉素、克林霉素和氯霉素的耐药率均为37.50%,对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率均为25.00%,对头孢噻肟、头孢他啶     

圈养虎源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的调查

采用K—B法检测30株虎源大肠杆菌对氯霉素类药物的耐药性。根据耐药表型和耐药基因的流行情况,指导临床合理用药。结果表明:30株虎源大肠杆菌对氯霉素的耐药率为85%,对氟苯尼考的耐药率为78%。cmlA基因的阳性率为70%,floR基因的阳性率为23.3%。     

河南省部分规模化奶牛场奶牛乳房炎源大肠杆菌耐药性分析与耐药基因检测

为了解规模化奶牛场乳房炎源大肠杆菌耐药现状和耐药基因分布情况,试验对采自河南省部分规模化奶牛场感染乳房炎奶牛的852份乳汁样本进行大肠杆菌的分离鉴定与16S rRNA基因PCR鉴定,对分离的大肠杆菌菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明：共分离鉴定224株大肠杆菌,分离率为26.29%。分离菌株对11种抗生素均有不同程度耐药性,其中对恩诺沙星、氟苯尼考、环丙沙星、四环素、阿莫西林、阿米卡星耐药比较严重,耐药率为63.39%～82.14%;对头孢他啶、头孢曲松耐药率相对较低,分别为22.32%、27.67%;对亚胺培南最敏感,耐药率为0。耐3种及以上抗生素菌株有193株,占86.16%。对不同奶牛场的85株大肠杆菌分离株进行耐药基因检测,共检测到11种耐药基因,未检出耐药基因tetM、bla_VIM和bla_NDM。酰胺醇类耐药基因floR携带率最高(为61.18%),喹诺酮类耐药基因oqxB(42.35%)、qnrS(44.71%)携带率和四环素类耐药基因tetA(30.59%)、tetB(38.82%)携带率相对较高,多重耐药基因检出率为51...     

广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。     

云南地区牛源无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性的检测

试验旨在研究无乳链球菌的生物学特性,为防治无乳链球菌引起的奶牛乳房炎提供理论依据。根据细菌分子生物学分离鉴定无乳链球菌,参考GenBank登录的牛源无乳链球菌16SrRNA、菌属特异性cfb(CAMP因子)、毒力基因和耐药基因序列,运用Oligo 6.0和Primer Premier 5.0软件设计14对引物,建立PCR快速检测方法,并进行20种常见抗生药物的耐药试验。结果显示,试验成功鉴定出17株牛源无乳链球菌,毒力基因与NCBI上已报道的无乳链球菌相应序列具有高度同源性,均≥99%;共检测到6种耐药基因;分离菌株对青霉素、红霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、新生霉素、磺胺异噁唑的耐药率均较高,耐药率依次为100.0%、94.1%、94.1%、94.1%、94.1%、82.3%、82.3%和47.1%,对青霉素严重耐药;而对氨基糖苷类、四环素类、头孢菌素类、喹诺酮类耐药率均较低,耐药率分别为15.7%、14.7%、7.7%和3.9%。本研究结果表明,建立的PCR快速检测方法灵敏可靠,云南地区无乳链球菌已对部分β-内酰胺类、大环内酯类、磺胺类等抗生素出现多重耐药性。     

广东地区水禽源大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因检测

采用琼脂二倍稀释法测定256株水禽大肠杆菌分离株对四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法调查分离株携带耐药基因tet A、tet B、tet C和tet M的情况。药敏试验结果表明256株水禽大肠杆菌分离株对四环素和多西环素耐药率分别为92.2%和77.3%。在237株大肠杆菌四环素耐药株中,tet A、tet B、tet C和tet M的携带率分别为49.8%、57.8%、49.4%和40.1%,仅8.0%的耐药株没有检测到4种耐药基因。结果表明:tet A、tet B、tet C和tet M广泛存在于水禽源大肠杆菌中。tet A和tet B对水禽源大肠杆菌四环素耐药株的产生起重要作用,主动外排作用是大肠杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。     

牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎(SCM)主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况,本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样,通过兰州乳房炎试验(LMT)筛选SCM乳样,从中分离病原菌并纯化培养,利用16S rDNA鉴定主要病原菌,通过纸片扩散法判定其药物敏感性,并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示,共筛选出牦牛SCM乳样324份,检出率14.43%;主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属,其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高,分别为59.57%和47.52%;大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高,分别为43.40%和20.75%;粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高,分别为25.00%和16.67%;59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株,其中7株携带mecA基因,5株含mecC基因;四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高(85.45%、56.36%),核糖体保护基因tetM携带率最低(34.55%);毒力基因中,clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高(87.64%、84.27%、83.15%、82.02%)。研究表明,牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌,均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高,其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

奶牛临床型乳房炎的细菌分离鉴定与耐药性分析

2011年山西省多个奶牛场发生了较严重的乳房炎,对76份采集的奶样进行细菌分离鉴定并采用药敏纸片法检测主要分离菌的抗生素耐药情况。所分离细菌以革兰氏阳性菌为主,革兰氏阳性球菌和其他革兰氏阳性菌分别占60.67%和23.59%。分离出多种病原菌和机会致病菌,主要的病原菌有链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等,检出率为2.24%~11.24%,其中无乳链球菌的检出率最高;机会致病菌有粪链球菌、微球菌、克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌等,检出率为1.12%~11.24%,其中粪链球菌和微球菌的检出率较大,分别为11.24%和6.74%。药敏试验检测结果显示,在所选的15种药物中,主要分离菌均对丁胺卡那霉素、氟哌酸和恩诺沙星3种药物敏感;大肠杆菌、克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素类和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂类药物产生了极强的耐药性,耐药率均为100%;乳房链球菌对该类药物也产生不同程度的耐药,耐药率为20%~100%;对链霉素产生100%耐药的细菌有大肠杆菌、克雷伯菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌等细菌;部分分离菌对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、红霉素、先锋霉素Ⅴ、复方新诺明等药物产生不同程度耐药。被检奶牛场混合感染较为严重,应进一步加强环境卫生管理,临床治疗应合理有效用药。     

云南地区牛源无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性的检测

试验旨在研究无乳链球菌的生物学特性,为防治无乳链球菌引起的奶牛乳房炎提供理论依据。根据细菌分子生物学分离鉴定无乳链球菌,参考GenBank登录的牛源无乳链球菌16S rRNA、菌属特异性cfb （CAMP因子）、毒力基因和耐药基因序列,运用Oligo 6.0和Primer Premier 5.0软件设计14对引物,建立PCR快速检测方法,并进行20种常见抗生药物的耐药试验。结果显示,试验成功鉴定出17株牛源无乳链球菌,毒力基因与NCBI上已报道的无乳链球菌相应序列具有高度同源性,均≥99%;共检测到6种耐药基因;分离菌株对青霉素、红霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、新生霉素、磺胺异噁唑的耐药率均较高,耐药率依次为100.0%、94.1%、94.1%、94.1%、94.1%、82.3%、82.3%和47.1%,对青霉素严重耐药;而对氨基糖苷类、四环素类、头孢菌素类、喹诺酮类耐药率均较低,耐药率分别为15.7%、14.7%、7.7%和3.9%。本研究结果表明,建立的PCR快速检测方法灵敏可靠,云南地区无乳链球菌已对部分β-内酰胺类、大环内酯类、磺胺类等抗生素出现多重耐药性。     

东北部分地区猪链球菌对四环素类药物耐药机制的研究

为了研究东北部分地区猪链球菌对四环素类药物的耐药机制,在兰氏分群的基础上,对东北部分地区分离的12株猪链球菌进行四环素类药物的耐药性测定和相关基因的扩增。结果表明:12株猪链球菌均属于D群,其中91.7%对多西环素耐药,100%对土霉素耐药,83.3%对盐酸金霉素耐药;12株菌均扩增出tetM基因,但未扩增出tetO基因。同源性分析结果显示扩增的tetM基因与GenBank中的肺炎链球菌、粪肠球菌等的tetM基因的同源性为94%~100%。     

兔源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药基因分析

为了解四川地区规模化兔场金黄色葡萄球菌(S.aureus)的耐药情况,本研究从四川地区部分规模化兔场共分离鉴定出41株S.aureus,采用纸片扩散法对分离株进行了耐药表型鉴定,同时采用PCR方法对相关耐药基因进行了检测。药敏试验结果显示:分离株对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类和大环内脂类药物的耐药率分别为87.80%、97.56%、78.05%和56.10%,对多肽类、喹诺酮类及磺胺类耐药率较低。耐药基因检测结果显示:所有分离株均检测到耐药基因,并且29株分离株具有多重耐药性,其中耐药基因mec A、tet、erm、aac(6')/aph(2')、ant(4',4')及aph(3')-III的检出率分别为75.61%、70.73%、46.34%、92.68%、80.49%及53.66%。结合耐药表型与耐药基因结果分析显示兔源S.aureus的耐药表型与耐药基因检出率基本呈正相关。本研究通过检测41株兔源S.aureus对临床常用抗生素的耐药性及相关耐药基因,初步掌握了四川地区规模化兔场S.aureus的耐药情况,为该地区规模化兔场预防及治疗葡萄球菌病临床合理用药提供了依据。     

大肠杆菌耐药性及氟苯尼考耐药基因floR的研究

本实验对某地养殖场猪源和鸡源大肠杆菌的耐药性及氟苯尼考耐药基因flo R进行分析,旨在了解我国大肠杆菌的耐药现状,以降低对养殖业的危害,减少菌株耐药性的传播,为兽医临床用药及兽药管理提供科学依据,为新型抗菌药物的研制奠定理论基础。采用国标法分离鉴定大肠杆菌,肉汤微量稀释法进行药敏实验,PCR法检测氟苯尼考flo R基因,膜过滤法进行转化接合实验。结果表明:共分离大肠杆菌293株,分离率为73.3%,其中猪源157株,鸡源136株;大肠杆菌对磺胺类、四环素类和氨基糖苷类药物的耐药性相对严重,对氯霉素类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类药物相对敏感;与欧盟EUCAST标准相比,该地区大肠杆菌的MIC分布出现明显右移现象;80%以上的大肠杆菌均为多重耐药菌株,以8重和9重耐药菌株为主;氟苯尼考耐药基因flo R携带率为61.2%,flo R基因可以在菌株间相互转移。样品采集地区养殖场大肠杆菌污染严重,耐药种类逐渐增多,多重耐药现象严重,质粒介导的耐药基因可以在菌株间相互转移。