辅助受精的显微技术

将卵母细胞透明带溶孔、透明带切口、将精子植入卵周隙内以及将精子注射到卵母细胞质内的辅助受精技术(assisted fertilizati-on),可为精子排除透明带障碍或越过透明带和精一卵细胞膜融合等过程,提高精液利用率和治疗某些类型的不孕症。前三种技术可排除透明带对精子形成的障碍,这时的精子应是能运动的而且能与细胞质膜融合。第四种技术可排除透明带和精卵膜融合这两重障碍,精子不一定是能运动的、活的、甚至完整的。这些技术可以提高家畜和野     

用低渗膨胀试验评价黑猩猩冷冻精子的膜完整性

精液品质评定的常见方法有精子活力、畸形率和顶体完整率等指标,但这些指标不能评定精子的真实受精能力。目前低渗膨胀试验作为检验精子膜功能的一种方法得到广泛认可,利用它可检验具有完整膜的精子是否具有生化活性。本试验通过对冷冻2只黑猩猩精液进行低渗膨胀来评定冷冻精子的膜完整性。试验结果显示,本研究中的黑猩猩的冷冻精子在低渗溶液中的膨胀率较高,表明试验黑猩猩的冷冻精液有较高的活力,精子具有较高的穿透率和受精能力。     

公牛精子与卵透明带结合力测定方法的试验

以精子与透明带结合能力为基础的预测人精子受精潜力的测定方法已经建立。本试验的目的是建立适用于公牛精液检查的类似方法。结果表明不同受精能力的公牛之间在同批卵子透明带上所结合的精子相对数目存在差异。这种差别表明,精子与透明带结合能力与公牛的繁殖力之间可能存在着相关性。现将本试验的方法与结果介绍如下。试验当天,从4头具有繁殖力的公牛采得精液,立即取0.5毫升的精液样品用4.5毫升的磷酸缓冲液(PBS)稀释,以300g 离心15分钟后,弃去4毫升上清液,加入等量的PBS 液洗涤精子,并重复一次。取洗涤后的     

低渗膨胀试验在精液品质检查上的应用

精液品质的常规检查主要检查精子活力、畸形率、顶体完整率及生存时间等指标，不足之处在于作精子活力检查时只考虑精子运动的数量而忽略了运动的质量，而且用目测法估计主观性较大；做精子形态检查时只评定精子形态是否完整而不能真实反映是否是活精子。生存时间虽较完整的反映了精子的质量，但操作起来较复杂且时间长。近年来用去透明带仓鼠卵穿透试验（HOPT）来检测精子受精力被认为是一种评价精子功能较为准确且可靠的方法，但此项技术操作复杂，难度大，尚未成为一种常规的分析方法。精子膜的形态完整性和功能活性是受精过程中的一个…     

用滴压制片法检查公牛的精子顶体

在人工授精或公牛不育的检查中,常忽略精子顶体的检查。实践证明,仅凭常规的精子活力检查不能完全反映公牛的健康状态和生殖能力。国外有人试验认为“公牛生殖力的降低与精子的形态学缺陷有关:精子顶体形态异常与不育有关”。由于精子顶体在精子与卵子的受精过程极端重要,其内含有崩解卵丘细胞和使精子穿过卵子透明带的物质。精子顶体异常,除了公畜异常的生理情况以外,也常发生在制作精液过程和冷冻保存的损伤,而且还发生于因检查精子顶体在操作中的理、化学损伤。后一种损伤影响了检查精子顶体完整率的准确性。故此,在检查技术上如何减少顶体的损伤,这是值得研究的问题。近年,我们试用滴压精液制片法检查公牛的精子顶体,并用一般的精液涂片染色法作对照,相比,滴压法顶     

顶体反应进程对公猪精液体外受精最佳精卵比的影响

精液质量参数相似公猪获得相同体外受精(in vitro fertilization,IVF)效果时所需精卵比不同的原因。常规方法鉴定公猪精液质量参数,以不同精卵比进行体外受精并确定不同公猪精液体外受精时的最佳精卵比,分别检测了各公猪精子结合透明带能力、获能及顶体反应状况。3头试验用公猪(A、B和C)精液在精子密度、活率、活力和畸形精子率上无显著差异(P0.05),17℃保存3 d内精子的活率在三者间无差异(P0.05)。3头公猪精液在IVF中达到最佳受精效率时所需的精卵比分别为500∶1、1 000∶1和200∶1。精子结合透明带能力和获能进程检测显示三者无显著差异(P0.05),但顶体反应进程检测显示三者间具有显著差异(P0.05)。顶体反应进程差异是导致相似精液质量精液之间在IVF中最佳精卵比不同的主要原因。     

第三讲母猪生殖生理

第三节受精、妊娠与分娩一、受精(一)配子的运行1.射精部位在交配过程中,公猪将精液直接射到母猪子宫或子宫颈中。母猪的子宫颈没有阴道部,使得精液能顺利射入子宫内。2.精子获能精子在受精前必须在雌性生殖道内经历一段时间,并发生一系列生理性、机能性变化,才具有与卵母细胞受精的能力,这种现象称精子获能。公猪精子获能需要3～6小时。3.受精部位在输卵管上1/3的壶腹部受精。4.顶体反应精子获能之后,在穿越透明带前后,精子顶体开始膨大,精子质膜和顶体外膜开始融合,使精子顶体形成许多泡状结构,通过空泡间隙释放出透明质酸酶、放射冠穿透…     

动物精液品质评定方法的研究进展

人工授精和体外受精技术的广泛应用,使精液保存技术得到了快速发展。精子的质量和功能状态直接影响其受精能力。文章综合阐述了近几年动物精液品质评定的方法:精子质膜完整性检测、线粒体活性的测定、受精能力的检测和精液中酶活性的测定。     

精液冷却过程中应激蛋白90对猪精子活动力的影响

公猪的精子对冷休克高度敏感,在迅速冷却时失去活力,称之为“冷休克”,而应激蛋白90(HSP90)外源的低表达阻碍细胞周期和减弱冷休克反应。对受精来说,精子运动性是一个重要的参数,HSP90和精子运动有很大的联系。因此,研究猪精子冷却过程中HSP90与精子运动力的关系是很必要的。Geldanamycin(GA)是一种特效的HSP90抑制剂(抗生素),能快速和选择性地抑制HSP90的活性。研究使用此种抗生素抑制HSP90功能,评价HSP90对猪精子活动力的影响。1材料与方法1.1供试精液试验用猪精液采自长白猪和约克夏猪,采取手握法采集精液。精液过滤、离心后,…     

猪精液品质评价与冷冻保存技术

为了研究猪精液品质的评价指标和冷冻保存技术,更好地服务于畜牧规模化养殖,试验对猪精液品质的评价指标、冷冻保存原理和方法、解冻方法等内容做了综合评述。结果表明:精液品质评价的指标有精液量,精子密度,精子活力,精子畸形率,精液颜色、气味和pH值,顶体完整率。用干冰、液氮和液氦等作为冷却源,将采集的精液做特殊处理后保存其中,使精子细胞的代谢活动完全受到抑制,达到长期保存的目的,当温度升高后又恢复其活性且具备受精能力。常用的解冻方法有干解法和湿解法,不同的解冻方法和解冻温度对精子的活性有不同影响。     

猪精子α-L-岩藻糖苷酶活性定位及其在精-卵结合及受精中的作用

本试验旨在证明猪精子中α-L-岩藻糖苷酶的存在及其在受精中的作用.猪精子α-L-岩藻糖苷酶活性用分光光度计405nm波长测定,并在受精液中添加α-L-岩藻糖苷酶特异抑制因子(deoxyfuconojirimycin hydrochloride,DFM-H)或特异单糖(L-岩藻糖)来检测时该酶活性的影响.结果显示,猪精子含有明显的α-L-岩藻糖苷酶活性.当精子用10μmol/L钙离子载体A23187处理1h后,有70%精子发生顶体反应和72%的酶活性被释放.体外受精液中添加250μmol/L DFM-H或30mmol/L,L-岩藻糖,可分别抑制66%或63%的精子α-L-岩藻糖苷酶活性,并相应抑制37%或36%的透明带表面精子结合数及56%或67%的精子侵入卵数.这些结果证明,猪精子α-L-岩藻糖苷酶主要分布于精子顶体中,特异地作用于透明带寡糖链中的α-L-岩藻糖残基,而参与精子穿入透明带的过程.     

预冻温度、甘油含量和稀释液种类对冷冻绵羊精液的影响

在有关绵羊的集约化育种中,近来特别引人注意的是精液在极低的温度下进行保存。这个问题已经有过许多研究,尽管取得了些进展,但是迄今的冷冻试验都不能使绵羊精子的受精能力免于下降。冷冻前,精子预处理所必要的操作程序,一般只是在实验室内进行试验和评价,而这些试验往往不能反映精液的受精能力。例如在冷冻猪精时,稍微改变一下甘油的用量就会明显影响受精能力,而这种情况在     

昆明小鼠与西门塔尔牛异种体外受精初步研究

卵母细胞胞质能否支持异种动物体外受精及受精卵能否发育可为揭示受精本质提供理论参考。为研究异种动物体外受精影响因素，本实验利用昆明小鼠卵母细胞为受体，进行西门塔尔牛冷冻精子体外受精，并从受精液组成、受精条件和有无透明带3个方面考察雄原核的形成及受精卵发育情况。结果显示：在西门塔尔牛冷冻精子的受精液和受精条件下，雄原核形成率高于小鼠试验组（11.7%vs2%）(P<0.05)；且在无透明带条件下，其雄原核的形成率（17.8%vs 12.79%）和卵裂率（27.27%vs 5.2%）均高于有透明带组（P<0.05）。以上结果初步表明，模拟精子源体外受精所需的“原生境”条件可提高异种动物体外受精的成功率。     

蛋白酶体在精子获能和受精中的作用

26S蛋白酶体是一个多亚基蛋白酶,在人、鼠、猪、牛、海鞘和棘皮动物受精研究中,表明它是一种特异性的靶蛋白。在研究哺乳和非哺乳动物物种受精过程中发现蛋白酶体的位置,蛋白酶体和精子移动有关,蛋白酶体与透明带(zona pellucida,ZP)结合促进顶体胞吐,精子泛素化和蛋白水解酶抑制剂有助于阻碍精子多精入卵,蛋白酶水解被抑制改变精子获能进程,精子表面结合腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)的消耗阻碍猪和棘皮动物受精,蛋白酶体水解抑制剂阻碍精子穿过ZP,但是不改变哺乳动物精子和卵子结合的效率,不改变和精子有关的去泛素化活性和体外受精(in vitro fertilization,IVF)时单精受精和多精受精的平衡。总的来说26S蛋白酶体与人和动物受精的诸多事件有关,为精子和卵子结合机制的研究提供理论依据。     

精液质量和人工授精蜂王表现之间的关系

蜜蜂精液贮存技术的发展，大大提高了我们选择和保留优良蜜蜂品系的能力。用各种不同的检测方法，如精子活力测定、受精囊内精子数的测定以及人工授精蜂王后代工蜂和雄蜂蛹的比例测定等来评价精液的贮存质量。     

家蚕生殖细胞冷冻保存及精液冷冻生存评价

家蚕人工授精已是较为成熟的技术,而家蚕生殖细胞的冷冻保存在特定基因的长期保存等方面具有重要意义.目前评价精子冷存效果的标准主要是依据精子的数量、密度、活动能力、畸形率、顶体完整率等,但这些指标并不能准确反映精子的受精能力.而精液当中各种酶活力的变化确切反映了精子的受精能力,因而精子酶学研究在评定冷冻精液品质、顶体完整率以及受精过程中的调控等方面具有很好的应用前景.     

用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力

研究了用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力。对36头西门塔尔、23头夏洛来和12头利木赞牛冷冻精子的实验结果表明：三个品种的牛冻精均能穿入去透明带仓鼠卵，并形成发育良好的雄原核。穿透率在70％－80％左右，有原核卵百分率在30％左右。去透明带 鼠卵穿透试验是检测牛冻精受精能力的有效方法。     

输精量和精液稀释对母鸡受精持续时间的影响

人工授精技术在种鸡场普遍使用,在稳定受精率的同时也增加了劳动强度。母鸡具有长时间储存精子并保有受精的能力,从而可以达到延长鸡输精间隔时间的目的,进而取得更好的经济效益。研究以矮小褐壳蛋鸡为试验材料,探究输精量以及稀释精液与母鸡持续受精时间是否相互关联。结果显示:输精无论采用原精液还是稀释精液,当精液量达到一定水平后,再增大精液量,也不能提高母鸡的受精率,以及延长母鸡受精持续时间。当精子数量一定时,精液稀释对母鸡受精率和受精持续时间的影响不显著。表明输精量和精液稀释都不是导致母鸡具有长时间储存精子并保有受精能力的原因。     

对获能刺激的反应可以反映出精子相关功能的差异

精子，尤其是种猪的精子，在体外很容易冷却和老化。精液稀释剂产品的不断开发，能保护精子不受低温的伤害。新的精液稀释剂和其他保护策略需要通过精子必要功能的敏感试验。受精过程中最关键的是精子获能。     

哺乳动物精子检测技术研究进展

普通光学显微镜检测精液存在主观性、可变性、分析的精子数量少和与受精能力相关性差等缺点。近些年来,一些新的技术用于检测精子,可以更加细致地评价精子的特性。荧光染色技术可以用于评价精子的特殊性质和功能,包括质膜完整性、获能状态和顶体状态。联合使用荧光染料,可以同时检测精子几种功能特点。流式细胞仪可以在短时间内分析大量的经荧光标记的精子。计算机辅助精子分析系统可以提供精子活力和形态学上客观的和详细的信息。通过检测精子与透明带或者输卵管上皮附着、精子穿透卵母细胞,可以获得精子受精能力的信息。未来的研究方向仍是寻找有效的预测精子受精能力的参数。