益生菌混合培养物对黄曲霉菌生长以及产毒效果的影响

为探讨乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、尿肠球菌3种益生菌的混合培养物对黄曲霉菌生长及产毒效果影响,将乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、尿肠球菌活化后进行培养,调整浓度为1×108cfu/m L,将乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌和尿肠球菌均按照1∶1比例制成益生菌混合培养物,并以乳酸杆菌作为对照,分别加入黄曲霉菌培养基中,测定不同类型益生菌混合物对黄曲霉菌菌落生长抑制率、黄曲霉菌孢子生长抑制率和黄曲霉产毒量抑制效果。结果显示:在培养72、96 h时,乳酸杆菌和尿肠球菌混合物组、乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌混合物组对黄曲霉菌菌落生长率与乳酸杆菌组相比,分别提高了27.1%、49.6%、42.1%、61.6%(P0.05);在培养6、18、24 h时,乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌混合物组黄曲霉菌孢子的抑制率与乳酸菌组相比,分别提高了35.4%、16.2%、21.1%(P0.05);培养18、24 h时,乳酸杆菌和尿肠球菌混合物组与乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌混合物组黄曲霉菌产毒量抑制率均高于乳酸杆菌组,分别提高了24.5%、41.9%、55.2%、65.4%(P0.05)。综上所述,枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌混合培养物对黄曲霉菌生长及产毒具有很好抑制效果。     

富硒乳酸菌对饲喂黄曲霉毒素日粮肉鸡生产性能和抗氧化功能的影响

为研究富硒乳酸菌拮抗黄曲霉毒素对肉鸡生产性能和抗氧化功能的影响,选取150羽1日龄雄性AA肉鸡,随机均分成3组,对照组饲喂基础日粮,攻毒组和富硒乳酸菌组分别饲喂添加100μg/kg黄曲霉毒素B1(AFB1)的日粮及同时添加100μg/kg AFB1和3.33%富硒乳酸菌的日粮。预试验7 d,正式试验30 d。统计试验全期的生产性能指标,并测定试验第10、20和30天的血清抗氧化指标。结果显示:富硒乳酸菌组和对照组的末重和日增重均显著高于攻毒组(P<0.05),而料重比均极显著低于攻毒组(P<0.01);试验第10、20和30天时,富硒乳酸菌组和对照组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均极显著或显著高于攻毒组(P<0.01或P<0.05),而丙二醛(MDA)含量均极显著低于攻毒组(P<0.01)。结果提示:富硒乳酸菌具有提高黄曲霉毒素导致的肉鸡生产性能下降和抗氧化功能降低的作用。     

产毒黄曲霉颉颃菌的筛选及复合菌剂的构建

研究旨在获得能抑制产毒黄曲霉生长及产毒的高效能复合菌剂。用紫外荧光法和平板对峙法筛选出不产毒且能抑制产毒黄曲霉的颉颃菌株,应用形态学、分子生物学方法鉴定初筛菌株,通过牛津杯法测定初筛菌的发酵液对产毒黄曲霉及其初筛菌生长的影响,基于正交试验获得直观最佳抑制产毒黄曲霉生长及产毒的复合菌剂配方。结果表明:从土壤中筛选出的4株霉菌,分别鉴定为木霉（A-1、A-2）、曲霉（F-501）以及青霉（Q-281）,对产毒黄曲霉生长的抑制率为木霉A-1 51%、木霉A-2 66%、曲霉F-501 61%、青霉Q-281 53%。A-1发酵液对产毒黄曲霉生长的抑制效果最明显,抑菌圈直径为18.00 mm。F-501、A-1发酵液分别对A-1、Q-281有抑制作用,抑菌圈直径分别为12.22、8.12 mm。A-2发酵液对A-1、F-501有抑制作用,抑菌圈直径均为10.52 mm。正交试验直观最优复合菌剂的配方:A-1、A-2、Q-281孢子浓度分别为1×10⁴、1×10⁶、1×10⁶个/mL,其对黄曲霉毒素B1（AFB1）生成的抑制率为7...     

乳酸菌对寄生曲霉孢子活性的影响

国外对乳酸菌抑制黄曲霉生长与产毒的研究始于1980年.乳酸菌主要被应用于多种发酵乳制品中,其代谢产生的低pH值环境可抑制多种有害微生物的生长.在多种发酵乳制品中存在的寄生曲霉可使食品腐败或产生对人类有危害的黄曲霉毒素.试验旨在研究植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌对曲霉孢子是否具有灭活作用.     

利用体外法研究不同水平黄曲霉毒素B1对蜀宣花牛瘤胃内环境的影响

以3头安装永久性瘤胃瘘管的蜀宣花牛母牛为试验动物,采用瘤胃微生物体外培养法,研究添加不同水平的黄曲霉毒素B1(0.1μg/m L,1.0μg/m L,5.0μg/m L,10.0μg/m L)对母牛瘤胃p H值、氨态氮(NH3-N)及挥发性脂肪酸(VFA)浓度随时间的动态变化规律。结果表明:添加黄曲霉毒素B1能够降低微生物降解蛋白质的活性,随着B1浓度的升高,微生物降解能力下降的起始时间节点逐步提前;添加10μg/m L B1组的VFA浓度较低,该水平下微生物活性较弱,不利于瘤胃发酵,且添加10μg/m L B1组的乙酸比例较低,推测10μg/m L水平下纤维分解菌的活性相对受到抑制。     

发酵性结合酵母菌的富硒能力的研究

以试验室保存的发酵性结合酵母菌为出发菌株,初步对该酵母菌进行耐硒范围的测定,并采用3,3'—二氨基联苯胺盐酸盐法测定不同发酵条件下酵母菌的硒含量。通过单因素试验和正交试验研究发酵时间、装液量、不同硒质量浓度及不同接种量对酵母菌富硒能力的影响。结果表明:酵母发酵的最佳条件是发酵时间48 h,装液量80 m L/250 m L,接种量12%(体积/体积),加硒时间8 h,富硒酵母的生物量可达6.04 g/L,总硒含量达10.2 mg/L。     

发酵性接合酵母的富硒能力分析与发酵条件优化

本试验以实验室保存的发酵性接合酵母为出发菌株,采用3,3’-二氨基联苯胺盐酸盐法测定不同发酵条件下酵母菌的硒含量,并通过单因素试验和正交试验研究了发酵时间、装液量、硒浓度、接种量对酵母菌富硒能力的影响。结果表明:酵母发酵的最佳条件为发酵时间36 h,装液量60 m L/250 m L,接种量12%(V/V),加硒时间8 h。此条件下富硒酵母的生物量可达5.96 g/L,总硒含量达10.10 mg/L。     

液相色谱-串联质谱法同时测定饲料中17种霉菌毒素

本研究旨在建立饲料中17种霉菌毒素的液相色谱串联质谱快速分析方法。样品用甲醇∶水(80∶20,v/v)混合溶剂超声提取,经离心后提取液直接用0.1%甲酸溶液(5 mmol/L乙酸铵)稀释后进行液相色谱-串联质谱分析。采用Acquity BEH C18色谱柱分离,用0.1%甲酸溶液(5 mmol/L乙酸铵)-甲醇作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离(雷索酸内酯类化合物为负离子模式),多反应监测模式检测,基质校准外标法定量。各物质峰面积与样品质量浓度(6种黄曲霉毒素浓度范围0.15~25μg/L,T-2和HT-2浓度范围为0.25~25μg/L,赫曲霉毒素A浓度范围为0.125~12.5μg/L,2种伏马毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度范围为5~500μg/L,5种雷索酸内酯类化合物浓度范围为1.25~250μg/L)呈良好的线性关系,线性回归系数均大于0.99。添加回收实验结果表明,17种霉菌毒素猪、鸡配合饲料中平均添加回收率在77.5%~90.9%,批间RSD在4.30%~9.13%。17种霉菌毒素在猪、鸡配合饲料中的检测限为0.50~10.0μg/kg,定量限为2.50~30.0μg/kg。该方法能满足饲料中17种霉菌毒素含量分析的要求。     

不同酵母菌种富硒能力比较与发酵条件优化

将啤酒酵母、产朊假丝酵母、克鲁斯假丝酵母和葡萄汁酵母4种酵母菌株分别接种到不同硒浓度的YEPD琼脂培养基中,观察不同酵母菌株的耐硒能力;比较4株酵母菌株在相同硒浓度下的生长情况以及有机硒的转化率,选出1株富硒能力强的酵母,并对发酵条件进行优化,确定最佳的硒添加量和添加方式。结果表明:啤酒酵母的耐硒能力和富硒能力均为最强,当硒添加量为20μg/mL时,在发酵12,18和24 h分3次添加,啤酒酵母的综合富硒效果最好,活菌数为2.74×108cfu/mL,有机硒转化率为85.5%。     

利用荧光定量技术检测生鲜乳中黄曲霉毒素M_1

本试验利用荧光定量检测技术检测生鲜乳中黄曲霉毒素M_1,最低检出限为0.047μg/L;取空白生鲜乳样品按0.05μg/L、0.1μg/L黄曲霉毒素M_1标准品进行添加,回收率均在90.00%～110.00%之间。各添加浓度批内、批间变异系数均低于15%;用该黄曲霉毒素M_1荧光定量检测卡和仪器法分别对50份生鲜乳盲样进行测定,结果全部相符,提示该法简便快捷、检测结果可靠,可用于黄曲霉毒素M_1的快速检测。     

黄曲霉菌及其毒素的检验

1黄曲霉菌 属真菌门、半知菌亚门丛梗孢科曲霉属。本菌为需氧菌,最适温度30~33℃,相对湿度80%~90%为最佳条件。花生、玉米是其较好的生长基质。寄生曲霉也是产生黄曲霉毒素（AFT）的主要菌株,其特性与黄曲霉类似,我国分布较少。青霉、毛霉和根霉等真菌也能产生AFT,但产毒量甚微,其特性与黄曲霉类似。黄曲霉菌菌落生长较快,10~14天直径可达3~4厘米或6~7厘米。菌落正面色泽也随其生长由白色变为黄色及黄绿色,呈半绒毛状。     

啤酒酵母作为富硒菌株的评价

通过单因子试验和正交试验,在优化发酵条件的基础上,以啤酒酵母的生物量和有机硒含量为指标评价啤酒酵母的耐硒能力和富硒效果。结果表明,啤酒酵母的最佳富硒条件为:250mL三角瓶中,装液量80mL,5%接种量,10μg/mL Se4+浓度,34℃,培养24h。在此发酵条件下,啤酒酵母的有机硒含量达(1024±121)μg/g,有机硒转化率为(94.03±6.14)%,生物量为(5.02±1.18)×1011cfu/g。因此,啤酒酵母是较好的富硒菌株。     

不同紫花苜蓿品种植株浸提液对种子萌发和幼苗生长的自毒效应

以5个紫花苜蓿品种为浸提液提取材料,分别用不同浓度(0、10、30、50、70g/L)的根、茎、叶浸提液处理甘农3号紫花苜蓿种子及幼苗,研究不同处理对其种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明:5个苜蓿品种植株浸提液对甘农3号种子萌发和幼苗生长具有明显自毒效应,其效应因苜蓿品种、器官和浸提液浓度不同而存在显著差异。同一品种、相同浓度下自毒效应强弱顺序为叶茎根;同一品种和器官的浸提液随着浓度的增大,甘农3号苜蓿种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数均显著降低,胚根长、胚芽长及根系活力显著减小;随着浸提液浓度逐渐增大(10~70g/L),种子发芽势、发芽率的化感指数(RI)也逐渐增大(0.002 6~12.640 0),同时受抑制程度逐步增强,而且,叶浸提液对种子发芽势、发芽率抑制作用最强,根浸提液抑制作用最弱,茎浸提液抑制作用居中。同样的,随着浸提液浓度增大,幼苗的胚根长、胚芽长受抑制程度也逐步增大(1.3%~54.1%),其中根浸提液抑制率在1.3%~31.3%,茎浸提液抑制率在4.0%~34.1%,而浓度为50g/L叶浸提液抑制率达到54.1%,浓度为70g/L叶浸提液甚至致使苜蓿种子和幼苗腐烂或死亡,检测不到胚根长、胚芽长。不同苜蓿品种的自毒作用存在差异;同一苜蓿品种,根、茎、叶浸提液的自毒效应叶浸提液最强,其次为茎浸提液,根浸提液自毒效应最弱。苜蓿自毒作用会抑制种子萌发和幼苗的胚根、胚芽生长。     

绿色富硒生物猪饲料中AFB1达标生产工艺优化研究

饲料中黄曲霉毒素(AFB₁)容易超标,检出率达80%~100%,毒性大,具强致癌性,可抑制生猪免疫机能,降低动物生产性能,引起动物继发感染,还会在动物产品中残留而威胁人类健康,给生猪养殖带来经济损失,降低猪肉食品安全性。本文通过使用先进固体发酵系统设备和益生菌发酵技术,采用单因素试验和响应面中试优化,获得发酵降解猪饲料AFB₁的最佳工艺参数为硒浓度0.3 mg/kg,发酵时间12 h,量子波强度30 Hz,益生菌菌种组合CGMCC NO.17328混合CGMCC NO.15611。该工艺将猪饲料AFB₁量从63.41μg/kg降解到2.98μg/kg,降解率达到95.30%,AFB₁含量达到国家饲料安全标准。生产工艺适合养猪场低成本快速生产AFB₁达标猪饲料。     

生物降解花生粕中黄曲霉毒素B1的研究

为探讨生物降解黄曲霉毒素的作用,试验采用在花生粕中接种黄曲霉菌,并在30℃环境中培养7 d,使其产生黄曲霉毒素,然后分别采用高温高压法、添加1%乳酸菌和1%酵母菌3种方法处理试样,并测定其黄曲霉毒素B1(AFB1)含量。结果发现,经高温和高压处理可破坏部分AFB1,但仍有72.3%的AFB1存在;经乳酸菌30℃厌氧培养72 h,可使99.4%的AFB1得到破坏;经酵母菌30℃培养72 h可使83.4%的AFB1得到降解,且乳酸菌的处理效果显著优于酵母菌的处理效果。     

体外培养中硒对黄曲霉毒素B_1损伤凡纳滨对虾肝胰腺细胞的影响

本试验旨在研究体外培养中硒(Se)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺细胞抗氧化能力的影响以及对黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性的缓解作用。在体外培养肝胰腺细胞的基础上,设定含不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75μg/m L)Se的培养液,研究Se对肝胰腺细胞抗氧化能力的影响;另用浓度为1 600μg/L的AFB1侵染细胞,探究Se对AFB1毒性的缓解作用。结果表明:当Se浓度处于0~0.45μg/m L时,随着Se浓度的增加,丙二醛(MDA)含量呈现降低趋势,但各个浓度之间并没有显著差异(P0.05),过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力随着Se浓度的增加而增强,Se浓度为0.45μg/m L时GSH-Px活力显著高于其他浓度(除0.30μg/m L)时(P0.05);当Se浓度处于0.45~0.75μg/m L时,随着MDA含量升高的同时CAT、GSH-Px活力下降。当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1侵染后,随着培养时间的增加,MDA含量表现一直升高的趋势,同时CAT、GSH-Px活力都有一定程度的下降;当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1和浓度为0.45μg/m L的Se共同作用后,随着培养时间的增加,MDA含量有一定程度的改善,CAT、GSH-Px活力得到一定程度的恢复。由此可见,在体外培养条件下,浓度为0.45μg/m L的Se有利于提高凡纳滨对虾肝胰腺细胞的抗氧化能力,且在一定程度上能缓解AFB1对肝胰腺细胞的毒性作用。     

黄曲霉毒素B1化学发光免疫检测方法的建立

在利用化学法合成吖啶酯标记的黄曲霉毒素B1(AFB1)抗原(AFB1-BSA-AE)的基础上,建立了化学发光免疫分析法(CLIA)检测样品中的黄曲霉毒素B1(AFB1)含量。结果表明,该方法对应的回归线方程为y=-16.995Ln(x)+166.06,R2=0.9996,AFB150%竞争抑制浓度(IC50)为0.924 ng/m L,检测的线性范围为0.1~5.0 ng/m L。在黍米样品中的加标回收率为75%~115%,变异系数为0.36%~1.20%。     

2种中药提取液对兔球虫卵囊孢子化的影响

为了研究青蒿、秦皮这2种中草药不同质量浓度溶液对兔球虫卵囊孢子化的影响,笔者采用饱和食盐水漂浮法分离兔球虫卵囊,再将未孢子化的兔球虫卵囊分别置于不同质量浓度(0.25 g/m L、0.50 g/m L、1.00 g/m L)的青蒿及秦皮中药提取液中,28℃恒温连续培养5 d。每24 h在显微镜下观察兔球虫卵囊的孢子形成情况,计算兔球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,2种药物对球虫卵囊孢子化均有抑制效果,但在相同时间、相同浓度时秦皮的抑制作用高于青蒿,且随着药物浓度的增加,对球虫卵囊的孢子化抑制效果也增强。5 d后抑制效果最好的是1.00 g/m L的秦皮,孢子化率为62%;抑制效果最差的是0.25 g/m L的青蒿,孢子化率为85%。     

富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B1诱导鸡小肠上皮细胞凋亡的影响

试验旨在探究富硒乳酸菌对黄曲霉毒素B₁(AFB₁)对鸡小肠上皮细胞(CSIEC)凋亡的影响。将体外培养的CSIEC细胞分为对照组(C)、AFB₁(300 μmol/L AFB₁)、AFB₁+0.01 Se(300 μmol/L AFB₁+0.01 μmol/L富硒乳酸菌,以Se计)、AFB₁+0.05 Se和AFB₁+0.1 Se组,待细胞长至60%~70%汇合时,AFB₁+0.01 Se、AFB₁+0.05 Se和AFB₁+0.1 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液,对照组和AFB₁组更换为正常培养液,8 h后向含AFB₁组加入300 μmol/L AFB₁,继续培养24 h。用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blotting检测线粒体通路和内质网通路相关蛋白Bcl-2、Bax、PERK、ATF4、CHOP、GRP78、p53和p21的表达。细胞存活率检测结果表明,与对照组相比,其余各组CSIEC存活率均极显著降低(P<0.01);与AFB₁组相比,加硒各组存活率均极显著升高(P<0.01)。LDH活性检测结果表明,与对照组相比,其余各组LDH活性均极显著升高(P<0.01);与AFB₁组相比,加硒各组LDH活性均极显著降低(P<0.01)。细胞凋亡率检测结果表明,与对照组相比,AFB₁组TUNEL阳性细胞数极显著升高(P<0.01),且与加硒各组差异均不显著(P>0.05)。Bcl-2/Bax表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB₁组Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01),AFB₁+0.05 Se组显著升高(P<0.05)。内质网应激通路相关蛋白表达量检测结果表明,与对照组相比,AFB₁组PERK、CHOP、GRP78和p53的表达量均极显著升高(P<0.01);与AFB₁组相比,加硒各组PERK、GRP78表达量均极显著降低(P<0.01),AFB₁+0.05 Se和AFB₁+0.1 Se组CHOP和p53的表达量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05)。因此,富硒乳酸菌能够缓解AFB₁诱导的CSIEC凋亡。     

硒增强二十二碳六烯酸在脂多糖诱导巨噬细胞炎性反应中的抗炎作用

为了探究硒是否影响二十二碳六烯酸(DHA)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎性反应中发挥的抗炎作用。小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分别经10μg/m L DHA、10μg/m L DHA+0.05μmol/L亚硒酸钠、1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS+0.05μmol/L亚硒酸钠诱导24 h,同时设置无添加的正常组。采用半定量反转录PCR检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)mRNA表达量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定培养液上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量。结果显示,添加亚硒酸钠(0.05μmol/L)不仅显著或极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW 264.7细胞中促炎细胞因子TNF-αmRNA表达(P0.05)和IL-1β生成(P0.01)的抑制作用,还极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞中抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达的促进作用(P0.01)。由此提示,硒可增强DHA在LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用。