牛痘—RHDV重组病毒对兔病毒性出血症的保护作用

为了预防家兔和野兔病毒性出血症ＲＶＨＤ，用牛痘病毒本哈根株构建 了一株重组牛痘ＲＨＤＶ病毒。此重组病毒表达ＲＨＤＶ衣壳蛋白（ＶＰ６０）。对表达产物分析表明，此重组蛋白的大小为６０ＫＤａ，作为抗原，在免疫沉淀和间接免疫荧光试验中可与抗ＲＨＤＶ抗体反应，用重组病毒免疫接种兔，可产生高水平的抗ＲＨＤＶ特异抗体。通过皮内和口服途径接种，可使免疫动物抵抗ＲＨＤＶ强毒的攻击。     

兔出血症病毒结构蛋白及其降解产物的分析

采用弗里昂１１３抽提结合蔗糖梯度密度离心法从人工感染兔出血症（ＲＨＤ）病兔肚脏组织中纯化ＲＨＤ病毒，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＲＨＤＶ由一种结构蛋白构成，分子量为６０ＫＤ，称为ＶＰ６０。应用抗ＲＨＤＶ单克隆抗体进行免疫印迹试验表明，ＶＰ６０可发生蛋白降解，其产物有３８ＫＤ、２８ＫＤ和２６ＫＤ几种多肽成分．     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用（摘要）

本文应用鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ—ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙烯胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６μｇ／ｍｌＩＢＤＶ蛋白。作者比较了ＬＰＡ、直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ试验的检出率高于ＡＧＰ。ＬＰＡ和ＤＦＡ试验结果的符合率为８６％。     

用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒（ｒａｂｂｉｔｈａｅｍｏｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,简称,ＲＨＤＶ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体（Ａｂ１）的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ａｂ２）的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体（Ａｂ１）免疫,诱导产生抗独特型抗体（Ａｂ２）是一种具有广阔的应用前景的新技术     

兔出血症病料中病毒核酸成分的分析鉴别

将兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）感染死亡兔肝反复冻融，分别经氯仿抽提，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀浓缩，蔗糖垫底超速离心，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析及蔗糖密度梯度离心，得到纯化的ＲＨＤＶ。电镜观察，ＲＨＤＶ粒子无囊膜，大小为３２～３４ｎｍ。核酸展层法显示，病毒基因组核酸长度约为７．０ｋｂ。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸，在琼脂糖凝胶电泳呈现２条主带；当以λＤＮＡ－ＨｉｎｄⅢ消化物为分子量标准时，它们分别位于相当于２０ｋｂ（Ａ带）和２．０ｋｂ（Ｂ带）的位置。用ＤＮＡｓｅ、ＲＮＡｓｅ及Ｓ１核酸酶消化试验分析表明，Ａ带是一种双股ＤＮＡ，而日带为单股ＲＮＡ。在Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中只有Ｂ带可以与德国提供的ＲＨＤＶ－ｃＤＮＡ克隆探针发生杂交反应，而Ａ带不与该探针显示任何反应。此外，用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与Ａ带一致的核酸提取物。本研究表明，在我国流行的ＲＨＤ病料中，出现的约７．０ｋｂ的单股ＲＮＡ是ＲＨＤＶ病原特异的。     

兔出血症病毒结构蛋白及其降解产物的分析

采用弗里昂１１３抽提结合庶糖梯度密度离心法从人工感染兔出血症病兔肚脏组织中纯化ＲＨＤ病毒，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＲＨＤＶ由一种结构蛋白构成，分子量为６０ＫＤ，称为ＶＰ６０。应用抗ＲＨＤＶ单克隆抗体进行免疫印迹试验表明，ＶＰ６０可发生蛋白降解，其产物有３８ＫＤ、２８ＫＤ和２６ＫＤ几种多肽成分。     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。     

兔出血症病毒提纯和多肽的比较研究

我们采用了甘油－酒石酸钿梯度离心、琼脂糖４Ｂ层析和ＤＥＡＥ３２离子交换层析等三种方法提纯兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）进行比较，其结果发现ＤＥＡＥ３２离子交换层析效果最好，获得的病毒纯度最高，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗ－Ｂｌｏｔ试验表明，ＲＨＤＶ只有一条蛋白多肽分子量为６１ＫＤ，截然不同于以往国内研究报道的ＲＨＤＶ具有３－６条结构多肽等结果，在国内属首次报道。     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集和胶乳凝集抑制试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ，直接萤光抗体试验和琼脂扩散沉淀试验三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性，敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

HIV－1gag基因重组痘苗病毒的构建和高效表达

Ｇａｇ蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定，分离了６株重组痘苗病毒。免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫酶试验检测表明，６株病毒均能表达ｇａｇ基因，其中以ｖ１６ＬＧ△２的Ｇａｇ蛋白表达量最高，占细胞裂解物上清的５．１９％，相当于１４．７μｇ／１０６细胞，接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为ｐ５５ｇａｇ蛋白前体，但也有一部分被加工，生成成熟蛋白ｐ２４ｇａｇ、ｐ１７ｇａｇ及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（ＶＬＰ），并可诱导小鼠产生抗Ｇａｇ蛋白抗体     

猪水泡病病毒抗独特型抗体的研究—Ab2的制备与鉴定

用猪水泡病病毒中和单抗２Ｂ６和４Ｈ９免疫家兔，制备出ＳＶＤＶ兔抗独特型抗体。经亲和层析纯化，用ＥＬＩＳＡ鉴定性质，结果表明，所制备的Ａｂ２能竞争抑制Ａｂ１与ＳＶＤＶ抗原结合，同时，Ａｂ２与Ａｂ１的结合可被病毒抗原阻断，表明所制备的Ａｂ２具有ＳＶＤＶ抗原内影像关系。     

应用重组杆状病毒表达NDVF糖蛋白和预防ND

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）和家蚕核型多体病毒（ＢｍＮＰＶ）构建的杂合杆状病毒表达了鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｄ２６株的融合（Ｆ）糖蛋白，将编码Ｆ蛋白的基因插入宿主范围扩展的改良杆状病毒表达载体，重组杆状病毒ＨｙＦ１２１感染的草地贪夜蛾（ｓｆ）细胞中，表达的Ｆ蛋白定位于细胞表面，ＨｙＦ１２１感染吞蛹后，用感染蚕蛹制取抗ＮＤＶ的亚单位疫苗，这种亚单位疫苗接种鸡后可抵抗ＮＤＶ强毒的攻击。     

以鸡痘病毒为载体的新城疫病毒重组疫苗的免疫效力

构建了表达速发型新城疫病毒（ＮＤＶ）融合蛋白（Ｆ）和血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）糖蛋白的鸡痘重组病毒ＴＲＯＶＡＣ－ＮＤＶ。ＳＰＦ鸡免疫试验表明，一次注射得组病毒有使鸡产生大量血凝抑制（ＨＩ）抗体。并能维持８周以上，而且重凤苗能诱导对经肌肉和呼吸道途径攻击ＮＤＶ的免疫力。带母滞病毒（ＦＰＶ）的免疫力，但ＮＤＶ的特异性体液应签水平降低。     

用抗原免疫构建分泌免出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的，从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中，不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体的细胞克隆，同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞，用抗原而不用单克隆抗体免疫，诱导产生抗独特型抗体是一种具有广阔的应用前景的新技术。     

人免疫缺陷病毒1型vpu基因在大肠杆菌中的表达

将编码人１型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）蛋白Ｕ的ｖｐｕ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ２（ｐＥＴ－１７ｂ去掉了一含起始密码子ＡＴＧ的６０ｂｐ小片段）的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建成重组表达质粒ｐＥＴ－１７ｂ２，并使ｖｐｕ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达，产物为１６０００的Ｖｐｕ重组蛋白，表达量占菌体总蛋白的１１．２％。蛋白质印迹试验表明，重组Ｖｐｕ蛋白与抗Ｖｐｕ抗体发生特异性反应     

表达嵌合性传染性法氏囊病病毒结构蛋白的重组杆状病毒…

作者对传染性氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）变异株ＧＥＳ的大基因片Ａ编码的ＶＰ３结构基因进行修饰，使之编码中和表位Ｂ６９。该表位只在ＨＢＤ古典株中发现，将可编码ＶＰ，ＶＰ４和修饰的ＩＢＤＶ变株ＶＰ３各结构蛋白的较大片段Ａ的嵌合性ｃＤＮＡ克隆在重组件状病毒中表达。用一组中和性单克隆抗体（ＭＡｂ）对所表达的嵌合性蛋白进行测定，表明该嵌合性蛋白不但包含ＧＬＳ变异株的所有表位，而且包含只在古典株中发现的Ｂ６９中和表     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

兔感染非致病性兔出血症样病毒的血清转化研究

某商业兔场已４年未发生兔病毒性出血症（ＲＨＤ），在对２３８只兔的ＲＨＤＶ抗体普查中发现兔血清转化现象，且其原因是由一株与ＲＨＤＶ抗原性相关、但无致病性的嵌杯病毒所致。３１日龄断奶仔兔的阳性率为３３．３％，断奶后５～７天、１３～１４天、１９～２０天、３２～３３天的阳性率分别为２７．６％、５６．１％、９０．３％、１００％。种兔血清全为阳性。种兔和刚奶仔兔的ＲＨＤＶ抗体主要是ＩｇＧ。然而，在断奶后１３～１４天却主要是ＩｇＭ和ＩｇＡ。大龄育肥兔ＩｇＭ和ＩｇＡ减少，ＩｇＧ增多。血清转化时未出现ＲＨＤ特异症状。由此可知，肉兔在断奶后不久就感染了这种非致病性病毒。     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。