鳗弧菌灭活疫苗对杂交鲟的免疫效果初探

以0.5%的甲醛溶液为灭活剂,制备鳗弧菌灭活疫苗,经过无菌和安全试验后,按照2 m L/尾的剂量,通过腹腔注射途径注射浓度为1.78×108cfu/m L的鳗弧菌灭活疫苗对杂交鲟进行免疫;对照组用同等剂量生理盐水处理。免疫7 d后,对试验鱼进行鳗弧菌活菌攻毒。攻毒试验7 d后,计算疫苗的免疫保护率。结果表明,在实验室条件下,0.5%甲醛灭活的鳗弧菌疫苗对杂交鲟安全,免疫保护率为80%。     

一种复合益生菌对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究

以一种由光合细菌、短小芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌按照20%、2%和78%质量百分比组成的复合益生菌拌喂斜带石斑鱼30 d,以探讨其对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究。结果表明,三个不同复合益生菌用量组石斑鱼的体增重率、体增长率和肥满度均有显著提高,饲料系数均显著下降;各免疫特性指标中,血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、总抗氧化酶(T-AOC)和溶菌酶活力显著升高,总超氧化物歧化酶(SOD)活力极显著升高;复合益生菌饲料对哈维氏弧菌攻毒后石斑鱼的保护率显著提升。实验结果表明,实验复合益生菌饲料可有效促进石斑鱼的生长和体增重,降低饵料系数,显著提升石斑鱼非特异性免疫相关指标,但10、30、50 g/kg等不同用量组间差异不显著,需要进一步确定复合益生菌的合适用量。     

NDV、IBDV二联灭活苗对蛋雏鸡免疫程序研究

为探讨鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)二联灭活疫苗在蛋雏鸡养殖中的实际应用效果进行本试验。用鸡新城疫、传染性法氏囊二联灭活疫苗及传染性法氏囊活疫苗以不同免疫程序免疫7~14日龄蛋雏鸡,定期监测NDV、IBDV抗体水平,并在雏鸡60日龄时进行攻毒保护试验。结果表明,各二联苗免疫组NDV抗体水平在免疫后14 d即达到NDV血清学最低有效保护价标准,并维持至雏鸡60日龄。免疫后28 d,灭活苗一次性免疫各组IBDV中和抗体水平显著高于活苗两次免疫组,琼扩抗体水平与活苗两次免疫组无明显差异。雏鸡60日龄时攻毒,各免疫组均100%保护,对照组无保护。以上结果说明该二联灭活疫苗可替代IBDV活毒疫苗用于7~14日龄商品雏鸡免疫,免疫期至少为60d。     

应用小白鼠对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检的研究

为寻找更好的鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗的效检方法,本研究应用小白鼠代替本动物“鸡”,对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检。结果表明,小白鼠免疫体重为18～22g,疫苗免疫剂量为0.3ml/只;免疫后10d,攻毒体重为20～28g,攻毒剂量为2～3×107CFU/只时,可代替本动物“鸡”对鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗进行效检,判定标准为免疫组8/10以上保护,对照组5/5死亡为合格。本效检方法可缩短检验期限7d,降低检验成本,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点。     

大黄鱼弧菌病综合防治对策的初步研究

在5月下旬用哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活菌苗对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)幼鱼进行浸泡免疫,7月至8月高温季节投喂添加防病药物或者V.harveyi灭活菌苗的配合饲料,进行了综合防病试验。试验结果表明,V.harveyi灭活菌苗浸泡免疫接种可以有效地预防V.harveyi对受免大黄鱼的感染,但是,受免鱼对副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的感染则没有显著的保护;高温季节投喂添加药物的配合饲料能够有效地降低大黄鱼的死亡率,而将药物添加在鱼糜中后的投喂方式则不能获得明显防病效果;对受免鱼口服灭活菌苗后在56 d内仍然可以观察到加强免疫效果。     

应用小白鼠代替鸡对禽霍乱蜂胶灭活疫苗进行效检的研究

为寻找其他有效的禽霍乱蜂胶灭活疫苗的效检方法,应用小白鼠代替本动物鸡对禽霍乱蜂胶灭活疫苗进行效检.结果表明,小白鼠免疫时体重15～18 g,疫苗免疫剂量0.3 mL/只,免疫10 d后攻毒,攻毒时体重20～25 g,攻毒剂量5～9 CFU/只时,可代替本动物鸡对禽霍乱蜂胶灭活疫苗进行效检,判定标准为免疫组8/10以上保护,对照组5/5死亡为合格.本效检方法可缩短检验期限7 d,降低检验成本,具有敏感、特异、客观、简便等特点.     

水貂出血性肺炎、多杀性巴氏杆菌病、肺炎克雷伯杆菌病三联灭活疫苗的制备及其质量评价研究

为评价水貂出血性肺炎、多杀性巴氏杆菌病、肺炎克雷伯杆菌病三联灭活疫苗的质量,本研究对该三联灭活疫苗进行了疫苗的单剂量、单剂量重复和超剂量免疫的安全性试验,最小免疫剂量、免疫期等效力试验以及疫苗保存期试验。结果表明,该三联灭活疫苗对2月龄以上水貂安全,最小免疫保护剂量为0.5 m L(绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯杆菌含量分别为3.0×10~9 cfu/m L、3.0×10~9 cfu/m L和2.5×10~9 cfu/m L),免疫剂量为1.0 m L/只时即可为水貂提供8个月的完全免疫保护,疫苗在2℃~8℃贮藏15个月仍保持原有的免疫保护效率。本研究研制的该三联灭活疫苗使用安全,对受试动物能够提供100%的免疫保护。本研究为水貂出血性肺炎、多杀性巴氏杆菌病和肺炎克雷伯杆菌病的预防和该三联灭活疫苗的正确使用提供了参考依据。     

三种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼的保护性实验

为了探讨三种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼的免疫保护作用,在防病上提供理论依据,将分离自患病黄颡鱼的温和气单胞菌、恶臭假单胞菌和类志贺邻单胞菌3种细菌浓度均调至约5×108CFU/mL,按1∶1∶1的比例混合均匀成混合细菌悬液,然后制成福尔马林混合灭活疫苗,对黄颡鱼(体重约14.1g±1.2g)进行免疫保护试验,分别在免疫注射后7d、14d和28d进行3种细菌混合活菌的人工感染试验,以检测混合灭活疫苗的保护率。试验结果,使用0.5%福尔马林在25℃条件下灭活菌液24h可达到完全灭活要求,在人工感染后的第1d~3d为各试验组和对照组黄颡鱼的死亡高峰期,在免疫注射的7d、14d和28d后,混合灭活疫苗的免疫保护率依次为64.2%、92.4%和89.0%。表明本试验的3种细菌混合灭活疫苗对黄颡鱼具有一定的保护作用,在免疫注射14d后保护率达到最高。     

亚成体大熊猫病原菌EL-1和EL-2株毒力及菌苗免疫剂量的测定

以亚成体大熊猫病原菌EL-1和EL-2菌株注射实验动物小白鼠（KM）,测定其半数致死量,其中EL-1菌株LD50为2.75×10~8CFU/只,EL-2菌株LD50为4.03×10~8CFU/只,两菌制成灭活菌苗按一定的浓度梯度注射实验动物家兔,其最佳的免疫剂量为1×10~8CFU/只家兔。     

不同蓝耳病疫苗对仔猪免疫效果试验

选取了100只猪蓝耳病抗体检测呈阴性的仔猪作为研究对象,给仔猪进行不同疫苗注射,28 d后采集免疫仔猪的血清进行免疫抗体检测。结果表明,仔猪首次免疫和加强免疫使用弱毒疫苗的抗体阳性率达75%以上,远远高于灭活疫苗的抗体保护率30%~40%。为临床猪蓝耳病的防治提供了有力的依据。     

副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

建立一种基于TaqMan探针法同步定量检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的双重荧光定量PCR方法。根据副溶血弧菌toxR基因和霍乱弧菌ompW基因设计特异性引物与TaqMan探针。toxR和ompW探针5'端分别标记FAM、CY5荧光报告基团,3'端均标记BHQ1荧光淬灭基团。结果显示:该方法的副溶血弧菌和霍乱弧菌最低检测限均达到10 CFU/m L,灵敏度高;特异性试验表明这两种细菌与其他病原菌(大肠杆菌O157、沙门氏菌、拟态弧菌、创伤弧菌)无交叉反应;批间和批内重复性实验表明变异系数均小于1.5%,说明重复性好。采用人工染菌虾肉样品,副溶血弧菌和霍乱弧菌的最低检测限分别为100 CFU/m L和50 CFU/m L,人工染菌贝类样品的最低检测限分别为50 CFU/m L和50 CFU/m L。两种细菌在虾肉中富集2 h后的最低检出限均为1 CFU/m L。结论:本研究所建立的双重荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的特点,包括DNA提取的整个检测过程可在1至3 h内完成,是同时快速检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的有效手段。     

The detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio alginolyticus using modified culture media

Studies have been completed for the detection of Vibrio(V.) parahaemolyticus and V. alginolyticus in Baltic Sea fish. The author had prepared for that purpose a liquid culturing medium and a solid substrate. The percentage of positive findings is remarkable. The results so far recorded should be a good reason for further studies.     

副溶血弧菌和溶藻弧菌双重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立同时快速检测海产品中的副溶血弧菌(VP)和溶藻弧菌(VA)的双重PCR方法,本研究根据VP和VA的toxR基因序列设计针对这两种细菌的两对特异性引物,建立能够快速同时检测这两种细菌的双重PCR方法,并对该反应体系的特异性和灵敏度进行检测。结果显示纯培养细菌VP和VA的检测灵敏度分别为2.32×103cfu/mL和2.56×103cfu/mL,临床病料检测灵敏度分别为2 cfu和3 cfu;与枸橼酸杆菌、沙门氏菌、美人鱼弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌无交叉反应。研究表明本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好,并且经济实惠,值得推广应用。     

牛奶中土霉素对青海弧菌和费氏弧菌的毒性作用测定

本文通过应用费氏弧菌和青海弧菌,探究了牛奶中土霉素对这两种发光细菌的毒性抑制作用规律。牛奶中,一定浓度下,土霉素对青海弧菌生物发光的抑制率随作用时间呈对数趋势增加,在0.45mg/L作用下,该关系方程为y=0.3007ln（x）-0.1940,R2=0.9934;作用5min时,土霉素抑制率随着浓度变化的规律呈直线关系,之后呈对数关系,E50值在5min时为0.75mg/L,30min时降低至0.12mg/L;土霉素对费氏弧菌生物发光的抑制率随作用时间呈对数趋势增加,在0.55mg/L作用下,y=0.2742ln（x）-0.0942,R2=0.9961;其抑制率随着浓度变化的规律在5min呈指数关系,之后呈对数关系,在作用10min时,y=0.5524ln（x）＋0.9045,R2=0.9949,E50值在5min时为0.75mg/L,40min时降低至0.09mg/L。     

副溶血性弧菌分离鉴定

利用TCBS琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基对细菌进行分离,采用糖分解试验、氧化酶试验、IMVi试验等生化试验鉴定海产品中副溶血性弧菌,为防治疾病提供依据。     

Isolation of Vibrio vulnificus and atypical Vibrio from surface water of the Baltic Sea in Germany

From 1995 to 1997 several defined species like V. alginolyticus, V. anguillarum, V. cholerae (non O1 and non O139), V. mimicus, V. parahaemolyticus and V. vulnificus were isolated during a survey to determine the presence of V. vulnificus in the brackish water of the Baltic Sea in Germany. Moreover atypical Vibrio isolates were detected. Four isolates belonging to a group of atypical Vibrio and possibly representing a new species in the genus Vibrio were characterized in detail. All four strains were isolated from surface costal waters. Based on 16S rDNA sequence analysis they showed the highest relatedness to the species V. navarrensis and V. vulnificus. The strains did not harbor the species specific hemolysin gene vvhA from V. vulnificus as shown by PCR and hybridization experiments. Moreover, they differed in at least two biochemical parameters tested from the hitherto described Vibrio species. All these strains induced hemolysis on washed blood agar dishes and showed phase variations on Luria Bertani agar dishes. Because of the similarity to the eel pathogen V. vulnificus, we infected eels with one of the four atypical strains (CH-291), but no pathogenicity for eels could be detected. Furthermore, Vero cell tests with supernatants of bacterial cultures did not reveal secreted Vero cell cytotoxic compounds. This indicates a nonpathogenic nature of these strains.