| 副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 凌娇,王权,万莹,白雪瑞,蒋蔚,潘翠玲.副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用[J].畜牧与兽医,2018(4):93-99. |
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| 作者姓名： | 凌娇 王权 万莹 白雪瑞 蒋蔚 潘翠玲 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所; |
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| 摘 要： | 建立一种基于TaqMan探针法同步定量检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的双重荧光定量PCR方法。根据副溶血弧菌toxR基因和霍乱弧菌ompW基因设计特异性引物与TaqMan探针。toxR和ompW探针5'端分别标记FAM、CY5荧光报告基团,3'端均标记BHQ1荧光淬灭基团。结果显示:该方法的副溶血弧菌和霍乱弧菌最低检测限均达到10 CFU/m L,灵敏度高;特异性试验表明这两种细菌与其他病原菌(大肠杆菌O157、沙门氏菌、拟态弧菌、创伤弧菌)无交叉反应;批间和批内重复性实验表明变异系数均小于1.5%,说明重复性好。采用人工染菌虾肉样品,副溶血弧菌和霍乱弧菌的最低检测限分别为100 CFU/m L和50 CFU/m L,人工染菌贝类样品的最低检测限分别为50 CFU/m L和50 CFU/m L。两种细菌在虾肉中富集2 h后的最低检出限均为1 CFU/m L。结论:本研究所建立的双重荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的特点,包括DNA提取的整个检测过程可在1至3 h内完成,是同时快速检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的有效手段。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 霍乱弧菌 toxR ompW 双重荧光定量PCR |
Establishment and application of theduplex real-time PCR of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholera |
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