应用重组肌肉抑制素C-端重组蛋白提高仔鼠出生质量的研究

为探讨利用重组肌肉抑制素促进肌肉生长的可能性,本研究原核表达并纯化了肌肉抑制素C-端重组蛋白.将雌性小鼠同雄性小鼠合笼,妊娠后分笼饲养.应用重组蛋白免疫雌性昆明白小鼠.利用间接ELISA法检测抗血清效价.每周测母鼠及仔鼠体质量1次.结果表明:(1)免疫后对照组和试验组母鼠体质最差异不显著(P>0.05).在妊娠后期(免疫后第11周),两组间体质量出现差异(P<0.05),试验组为(56.23±3.37)g,而对照组为(64.11±3.18)g.试验组体质量在第12周达到(79.16±3.72)g.而对照组为(75.23±3.44)g,差异极显著(P<0.01).分娩后,这种差异消失(P>0.05).(2)仔鼠出生体质量在2处理组间差异极显著(P<0.01),试验组仔鼠出生体质量比对照组增加25.8%左右;但在生长阶段仔鼠体质量差异有逐渐缩小的趋势.结论:应用肌肉抑制素C-端重组蛋白免疫母鼠可以显著提高仔鼠出生体质量.     

肌肉生长抑制素的研究进展

肌肉生长抑制素(简称肌抑素)属TGF-β超家族,是骨骼肌生长的负调控因子,参与肌纤维增生和肥大的调控。本文综述了肌肉生长抑制素蛋白的结构、活性调控、信号转导途径以及肌抑素基因的表达和生物学作用。     

microRNA-128对小鼠失神经肌肉萎缩中肌纤维的影响

为探究microRNA-128(miR-128)在体内对小鼠失神经腓肠肌的作用,试验建立了小鼠腓肠肌失神经萎缩模型,将10 nmol miR-128模拟物或miR-128抑制剂注射至小鼠失神经腓肠肌组织中,14 d后经实时定量PCR检测miR-128的表达量,比较肌肉湿重和肌纤维直径,研究miR-128表达改变对肌肉发育的影响。结果表明:注射miR-128模拟物的失神经腓肠肌组织肌纤维直径显著低于对照组,而注射了miR-128抑制剂的失神经腓肠肌组织肌纤维直径显著增加。说明miR-128在体内具有一定的肌损伤修复功能,在一定程度上能够在体内对肌肉分化发挥调控作用。     

猪肌肉生长抑制素基因的克隆及原核表达

本试验旨在通过基因工程方法获得重组肌肉生长抑制素蛋白。根据基因库肌肉生长抑制素基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点及保护碱基,提取汉普夏猪的骨骼肌总RNA,用RT-PCR方法扩增肌肉生长抑制素全长基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,测序后EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,克隆到pET-30a( )中,构建原核表达载体pET-30a-M,将重组表达质粒转化至E.coliBL21(DE3)中,诱导表达。结果表明,成功扩增出肌肉生长抑制素全长基因;克隆载体经过DNA序列测定,所得基因与国外报道的完全一致;成功构建原核表达载体pET-30a-M;经IPTG诱导,表达出了6×His-M融合蛋白,用组氨酸标签抗体做Western印记证明产物大约48 ku,与预期大小相符,肌肉生长抑制素蛋白在大肠杆菌中成功的进行了表达。     

肌肉生长抑制素研究进展

肌肉生长抑制素是一种分泌型的多肽。小鼠中该基因的缺失可导致骨骼肌的明显增大,而且在双肌牛中该基因的缺失产生了突变,这表明肌肉生长抑制素可能是骨骼肌生长的负调控因子。本文综述了肌肉生长抑制素的基因结构及其分子作用机制,并就它对动物体成分的影响、应用及尚存在的问题作了概述。     

饲粮的不同蛋白质水平对12周龄麒麟鸡肌肉品质和肌肉营养成分的影响

试验旨在研究饲粮的不同蛋白质水平对麒麟鸡肌肉品质和肌肉营养成分的影响。试验选取1日龄体重相近的健康麒麟鸡200只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复10只鸡。各组分别饲喂蛋白质水平为15%、17%、19%、21%、23%的试验饲粮,能量水平均为12.40 MJ/kg,试验期为12周,通过屠宰实验、肌肉养分和组织结构分析,确定基于麒麟鸡肌肉品质的适宜饲粮蛋白质水平。结果表明:随着饲粮蛋白水平的提高,肌肉粗蛋白和粗脂肪含量逐渐提高;胸肌剪切力、pH值、失水率无显著影响,滴水损失显著降低(P0.05);腿肌剪切力、pH值无显著变化,腿肌失水率和滴水损失显著降低(P0.05);19%饲粮蛋白水平组可降低胸肌纤维直径(P0.05)和腿肌纤维直径(P0.05)。以麒麟鸡肌肉品质作为评价指标的适宜饲粮蛋白质水平为19%。     

品种和体重对猪肌肉生长抑制素表达的影响

本文旨在研究猪的体重和品种对其背最长肌的肌肉生长抑制素基因表达的影响,并对猪100kg时的胴体性状与肌肉肌肉生长抑制素基因表达量的相关性进行分析。试验采用荧光定量PCR方法,以β-actin基因为内标,研究不同体重(20、50和100kg)和品种(汉普夏猪和长白×撒坝猪)对猪背最长肌的肌肉生长抑制素基因表达的影响,同时考察试验猪在100kg时的胴体肉质指标。结果表明:①猪背最长肌中肌肉生长抑制素的表达随体重的增加呈上升的趋势(P>0.05);②相同体重条件下长撒猪背最长肌中肌肉生长抑制素表达均显著高于汉普夏猪(P<0.05),其中20kg时达到极显著水平(P<0.01);③肌肉生长抑制素的表达与瘦肉率呈极显著的负相关(P<0.01),与背膘厚则呈极显著的正相关(P<0.01),与滴水损失和肌内脂肪的相关性不显著(P>0.05)。本研究结果表明猪背最长肌的肌肉生长抑制素基因的表达量随体重增加而提高,品种间差异显著,并且肌肉生长抑制素基因的表达与瘦肉率、背膘厚存在显著的相关性。     

复方中草药添加剂对AA肉鸡肌肉生长发育的影响

为研究复方中草药添加剂对肉鸡肌肉生长发育的影响,试验选用健康1日龄AA(Arbor Acres)肉鸡400羽,随机分成4组,每组5个重复,每个重复20只。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%的复方中草药添加剂,试验期42 d。在21、42日龄时将肉鸡称重屠宰,分离胸肌和腿肌进行称重并计算胸肌率和腿肌率,取适量肌肉组织进行肌纤维直径测定和组织切片制作。结果表明:与对照组相比,21日龄时,各试验组肉鸡的平均体重、平均日增重、肌肉重量与肌肉率无显著变化(P0.05),而1.0%组肉鸡的腿肌纤维直径显著降低(P0.05),平均日采食量和耗料增比有所降低;42日龄时,0.5%组肉鸡的平均体重和平均日增重升高(P0.05),平均日采食量和耗料增比降低,其肌肉发育最好,胸肌肌肉率显著提高(P0.05),胸肌纤维直径显著降低(P0.05)。以上结果表明,饲料中添加0.5%和1.0%复方中草药添加剂可以促进肉鸡肌肉发育,提高肌肉率,降低肌纤维直径,改善其组织结构。     

肌肉生长抑制素的研究新进展

最近的一些研究表明减少或者阻断肌肉生长抑制素的抑制作用能够改善几种肌肉生长障碍疾病的治疗效果,但是一些研究也表明肌肉生长抑制素的作用不仅局限于骨骼肌。在医学或者畜牧方面利用肌肉生长抑制素基因时,必须考虑到对其他组织的潜在影响。笔者综述了肌肉生长抑制素基因在脂肪组织、心肌、脑和肌腱方面的研究进展。     

饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物对肉仔鸡肌纤维特性及肌肉超氧化物歧化酶活性的影响

本试验旨在研究饲粮中添加超氧化物歧化酶模拟物(SODm)对肉仔鸡肌纤维特性及肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。试验选取1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡360只,随机分为6组,每组6个重复,每个重复10只鸡。各组分别饲喂SODm水平为0(对照)、1.0‰、1.5‰、2.0‰、2.5‰、3.0‰的试验饲粮,试验期为42 d。结果表明,各组肉仔鸡生长性能指标无显著差异(P0.05)。1.0‰SODm组肉仔鸡胸肌纤维密度显著高于其他各组(P0.05),1.5‰SODm组肉仔鸡胸肌纤维直径显著高于除2.0‰SODm组外的其他各组(P0.05)。1.5‰SODm组肉仔鸡腿肌肌纤维密度显著高于其他各组(P0.05),1.5‰SODm组肉仔鸡腿肌肌纤维直径显著低于其他各组(P0.05)。2.0‰SODm组肉仔鸡胸肌剪切力显著低于对照组(P0.05)。3.0‰SODm组肉仔鸡胸肌SOD活性显著高于其他各组(P0.05),1.5‰SODm组肉仔鸡腿肌SOD活性显著高于除3.0‰SODm组外的其他各组(P0.05)。由此可知,饲粮中添加SODm可以改善肉仔鸡肌纤维特性,提高肌肉中SOD的活性,在一定程度上改善肉品质,同时增强肌肉的抗氧化能力。     

藏羊MSTN基因克隆、生物信息学及组织表达分析

【目的】 对藏羊肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因进行克隆和生物信息学分析，检测其在藏羊不同组织中的表达，为探究MSTN基因在藏羊中的生物学功能提供参考。【方法】 以藏羊背最长肌组织cDNA为模板，克隆藏羊MSTN基因完整CDS区序列并测序，用SeqMan程序对测序结果进行拼接，并用BLAST在线程序对组装后的序列进行分析鉴定。用生物信息学软件进行相似性比对、系统进化树构建及生物信息学分析，用实时荧光定量PCR检测MSTN基因在藏羊不同组织中的表达量。【结果】 藏羊MSTN基因CDS全长为1 128 bp，编码375个氨基酸。藏羊MSTN基因氨基酸序列与绵羊、牦牛、牛、猪、恒河猴、人、黑猩猩、犬、鸡及斑马的相似性依次为100.0%、93.4%、93.4%、95.2%、94.4%、94.2%、94.4%、93.1%、87.8%和87.5%；系统进化树分析结果表明，藏羊与绵羊的亲缘关系最近，与斑马和鸡的亲缘关系最远。藏羊MSTN蛋白属于亲水性分泌蛋白，且具有不稳定性，不含跨膜结构，含1个信号肽，存在31个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化修饰位点，主要分布在线粒体和细胞质中；MSTN蛋白二级结构以无规卷曲为主，其次是α-螺旋、延伸链和β-转角；三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示，MSTN基因在藏羊不同组织中均有表达，其中在臂三头肌和半腱肌的表达量显著高于肺脏、下丘脑、心脏、肝脏、十二指肠、瘤胃和肾脏（P<0.05）。【结论】 成功克隆了藏羊MSTN基因；该基因在藏羊肌肉中的表达量高于内脏组织。该结果为进一步研究MSTN基因对藏羊肌肉生长发育的调控机制奠定了基础。     

Analysis of DNA Methylation and mRNA Expression Level of MSTN Gene in Xinjiang Bashiby Sheep

In order to investigate DNA methylation and expression levels of myostatin (MSTN) gene in mscule and fat, 5 months of age of Bashiby sheep were selected, the promoter region and exon 1 methylation levels of MSTN gene was analyzed using bisulfite sequencing PCR (BSP). Real-time PCR was used to detect the expression level of MSTN gene in biceps femoris, femoral triceps, semitendinosus, semimembranosus, longissimus dorsi muscle and tail fat of Bashiby sheep. The results showed that the methylation probability of muscle was higher than fat, the methylation probability of biceps femoris, femoral triceps, semitendinosus, semimembranosus, longissimus dorsi muscle and tail fat were 74.2%, 74.2%, 83.2%, 83.7%, 82.1% and 25.3%, respectively. The expression levels of MSTN gene in biceps femoris, femoral triceps, semitendinosus, semimembranosus, longissimus dorsi muscle were significantly lower than tail fat in Bashiby sheep (P < 0.05), but there were no significant difference among biceps femoris, femoral triceps, semitendinosus, semimembranosus and longissimus dorsi muscle (P > 0.05).The DNA methylation was negatively correlated with the expression levels in muscle and fat of Bashiby sheep (r=-0.886, P < 0.05).     

新疆巴什拜羊肌肉生长抑制素基因DNA甲基化与mRNA表达量分析

为了探究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因在肌肉和脂肪中的DNA甲基化模式及mRNA表达水平,试验以5月龄巴什拜羊羔羊为研究对象,采用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）检测MSTN基因启动子区和第1外显子甲基化模式,并通过实时荧光定量PCR检测MSTN基因在巴什拜羊股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌和尾脂中的mRNA表达水平。结果显示,肌肉组织甲基化概率高于脂肪组织,其中,股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌和尾脂的甲基化概率分别为74.2%、74.2%、83.2%、83.7%、82.1%和25.3%,MSTN基因在股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌中的表达水平显著低于尾脂（P < 0.05）,股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌和背最长肌之间差异不显著（P > 0.05）,巴什拜羊肌肉和脂肪MSTN基因DNA甲基化水平与MSTN基因表达量呈显著负相关（r=－0.886,P < 0.05）。     

肌肉生长抑制素在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达

本试验旨在探究肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达情况，分别选取幼年（7日龄）、性成熟（21~28日龄）、体成熟（42~56日龄）和老年（84日龄以上）4个发育阶段的健康小鼠（各3只）为研究对象，采用实时荧光定量PCR、HE染色、免疫组织化学等方法研究小鼠不同发育时期MSTN基因在心肌组织中的表达及不同时期心肌组织的发育。实时荧光定量PCR结果显示，MSTN基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中均有表达，且其在小鼠老年时期的表达量最高，体成熟时期的表达量最低；幼年小鼠和性成熟小鼠心肌组织中MSTN基因表达水平显著低于老年小鼠（P<0.05），而体成熟小鼠则极显著性低于老年小鼠（P<0.01）。HE染色结果显示，小鼠心肌细胞核及肌纤维的生长在不同发育时期明显不同，其中幼年时期的细胞核最多，肌纤维排列相对较紧密，而在性成熟、体成熟、老年时期心肌的发育指标依次降低。免疫组织化学结果显示，MSTN基因主要在心肌细胞核中表达，其各个时期表达量与实时荧光定量PCR的结果相符合。     

初生和成年黑藏羊肉品质与肌纤维特性差异分析

旨在比较放牧条件下不同年龄间黑藏羊肉品质与肌纤维组织学特性的差异.本研究选择青海自然放牧条件下体况良好的初生黑藏羊(平均体重(2.31±0.49)kg)和12月龄黑藏羊(平均体重(36.58±1.26)kg)各5只,依据年龄分为2组,即羔羊组(lamb)和成年羊组(adult).通过三磷酸腺苷酶(ATPase)染色、酶...     

绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达

Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138 bp的转录产物,并用Western blotting检测到78 ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。     

新疆也木勒白羊肌肉生长抑制素基因在不同生长时期的表达研究

试验采用实时荧光定量PCR技术测定也木勒白羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因在不同生长时期(0～6月龄)的表达量,采用2^－ΔΔCt分析不同生长阶段表达量的差异,旨在掌握也木勒白羊不同生长时期MSTN基因的表达规律,为也木勒白羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料.结果发现,MSTN基因在3月龄也木勒白羊肌肉中的表达量显著低于其他月龄(P<0.05),其余各月龄差异不显著(P>0.05);MSTN在脂肪中的表达量0月龄相对较低,随月龄增长,表达量升高,在5月龄达到最高,后随月龄增长表达量降低.MSTN基因在肌肉和脂肪中的表达量随着月龄增长有一定的规律可循,其表达规律可为也木勒白羊肉用性能的选育提供一定的科学依据.     

干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

为研究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响,本试验以牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型为对象,以前期设计合成3个干扰RNA（si-MSTN-1、si-MSTN-2、si-MSTN-3）并对其进行干扰效果筛选为基础,将干扰效果极显著的si-MSTN-2（si-MSTN）转染牛骨骼肌卫星细胞,通过EdU染色法检测干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响;进一步对干扰MSTN的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,通过肌管形成状态和分化标志因子综合分析干扰MSTN对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响：首先通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化时期的肌管形成状态,然后利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测牛骨骼肌卫星细胞分化标志因子MyoG和MyHC在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果显示,干扰MSTN后,牛骨骼肌卫星细胞中EdU阳性细胞率极显著增加（P < 0.01）,说明下调MSTN表达极显著促进了牛骨骼肌卫星细胞的增殖;牛骨骼肌卫星细胞诱导分化后形成的肌管数量和直径均呈现增大趋势,牛骨骼肌卫星细胞成肌分化标志因子MyHC在mRNA和蛋白水平的表达均极显著高于对照组（P < 0.01）,说明下调MSTN表达能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本研究结果表明,干扰MSTN可以显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖及成肌分化过程。本试验结果为进一步开展MSTN对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控机制研究提供了参考。     

Effects of dietary neutral detergent fiber on muscle fiber type composition and meat quality characteristics of black Tibetan sheep北大核心CSCD

The effects of different neutral detergent fiber （NDF） diets on body size indexes，muscle fiber type and meat quality of Qinghai black Tibetan sheep were investigated. Forty healthy 2-month-old black Tibetan sheep with similar body weights ［（10.28±0.43 kg］ were randomly divided into 2 groups with 20 rams per group. They were fed diets with differing neutral detergent fiber （NDF） levels of 26.33% （group L） and 46.14% （group H）. Using enzyme-linked immunosorbent assay， ATPase histochemical stain and real-time PCR， the muscle fiber characteristics，gene expression of myosin heavy chains （MyHCs） and meat quality in Black Tibetan sheep were evaluated. Results were as follows：1） The tagma indexes in group H were significantly lower than those in group L （P<0.05）. 2） The number of type II a muscle fibers in group H was significantly more than in group L （P< 0.05），and the areas of type I and type II a muscle fibers in group H were also greater than in group L （P< 0.05）. 3） The mRNA expression levels of MyHC I and MyHC IIa in group L were lower than those in group H （P<0.05），but the mRNA expression levels of MyHC IIb and MyHC IIx exhibited an opposite movement （P< 0.05）. 4） Compared with group L，superoxide dismutase，glutathione peroxidase，catalase and total antioxidant capacity contents increased （P>0.05） in group H，while the malondialdehyde （MDA） content was significantly decreased with in group L. 5） The muscle shear force in Group L was higher than that in Group H （P<0.05），while the redness （a*） was lower than that in Group H （P>0.05）. In conclusion，compared with a low-NDF diet，the high-NDF diet effectively reduced the proportion of glycolic muscle fiber and also enhanced antioxidant capacity，improving the muscle quality of black Tibetan sheep. © 2022 Editorial Office of Acta Prataculturae Sinica. All rights reserved.