间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究

利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于 PRRS病毒血清抗体检测的新方法     

乳胶凝集试验诊断猪囊虫病

采用新鲜痘猪囊内液体，离心，取上清作为抗原原液，加乳胶颗粒，经处理，制成致敏原。分别同患猪血清和脑脊液标本，应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验，检查赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取的371份患猪血清和138份脑脊液，诊断猪囊虫病。以待检血清出现“ ”以上凝集者，对照不凝集判为阳性。通过试验，两者的符合率为86.9%（血清），94.7%（脑脊液）。     

乳胶凝集试验与血清中和试验检测猪伪狂犬病血清抗体的 …

应用血清中和试验（ＳＮＴ）和伪狂犬病乳胶凝集试验（ＬＡＴ）诊断试剂盒对两种伪狂犬病是性血清、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）高兔血甭及６０份被检猪血清进行了ＰＲＶ抗体效价测定和相关性分析,两种方法测得的抗体效价之间呈强相关性（ｒ＝０．９６）,且ＬＡＴ效价比ＳＮＴ一般高出一个滴度;能干为自３５个猪场的４１４份猪血清进行了ＰＲＶ抗体检测,并与ＳＮＴ检测结果进行了对比,结果在ＳＮＴ检测为阳笥的１７１份血清中,ＬＡ     

应用乳胶凝集法诊断猪囊虫病的研究

自赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取371份患猪血清、138份脑脊液，用乳胶凝集试验诊断猪囊虫病。用无菌注射器抽取新鲜囊虫病痘囊内液体，经4000转/分离心沉淀10分钟，吸取上清作为抗原原液，与一定浓度的乳胶颗粒经适当处理，制成致敏原，分别同患猪血清和脑脊液标本应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验作检查。以待检血清出现“ ”以上的凝集、而对照组不凝集判为阳性。通过试验，两血清的符合率为86.9%，脑脊液的符合率为94.7%。     

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖,待出现细胞病变后,反复冻融,收获病毒液,用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定,选择致敏乳胶的最佳条件,制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清,其中血凝抑制抗体阳性为161份,阴性为42份,阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份,阴性为53份,阳性率为73.89％,两种方法阳性符合率为93.16％,经统计学检验P＞0.05,两者差异不显著。结果表明,乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛,具有简便、准确的优点,在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。     

检测猪瘟抗体间接ELISA方法的建立及应用

用猪肾传代细胞PK-15增殖猪瘟病毒（CSFV）兔化弱毒苗株（HCLV），病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、浓缩后作为包被抗原。经各种条件的优化，建立了检测猪瘟血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度分22、28mg／L，血清最佳稀释度为1：40，与猪细小病毒、O型口蹄疫、猪衣原体阳性血清呈阴性反应，与HCV标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与标准阴性血清和临床未感染CSFV的猪血清呈阴性反应；用HI和本EI。ISA方法检测94个猪厂送检血清1455份。其中血清稀释液中不含PEG6000的914份送检血清阳性率为83．7％，与HI符合率为96．6％，HI阳性率略高为85．7%；血清稀释液中含2％PEG6000的541份送检血清阳性率为88．72％，与HI符合率为97．3％，HI阳性率为88．17％。结果表明本试验所建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于临床猪瘟血清抗体的定性和定量检测。     

检测猪伪狂犬病病毒gE抗体红细胞凝集试验的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)—猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病毒gE抗体的红细胞凝集试验。利用方阵滴定试验筛选出最佳抗原工作浓度为55μg/mL,血清最佳稀释度为1∶20,作用时间15 min,与猪瘟(CSF)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪乙型脑炎(JE)、猪布氏杆菌病(Brucellosis)阳性血清和PRV gE缺失疫苗接种的猪免疫血清均不出现红细胞凝集现象,与PRV标准阳性血清反应出现肉眼可见的凝集圈。与美国进口的PRV抗体检测gE-ELISA诊断试剂盒检测结果比较,50份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%。红细胞凝集试验检测方法具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

应用ELISA间接法检测猪流行性腹泻抗体的研究

应用猪流行性腹泻病毒(PEDV)吉(J)毒株猪胎肠单层细胞培养物,以冻融法制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测PED抗体的方法。对30头份经直接免疫荧光技术证实的PED病猪群血清测定,97％为阳性;检测32头份无PED猪场猪血清,93％为阴性。对1份PED“华毒株”,1份“川毒株”以及3头份“吉毒株”PED免疫血清测定,均为阳性。对猪传染性胃肠炎血清、猪轮状病毒病血清、疑似猪血球凝集性脑脊髓炎血清、鸡传染性支气管炎血清及猪梭菌性肠炎血清共16头份检测均为阴性,证明PEDV不与TGEV等其它3种冠状病毒血清发生交叉反应。89头份疫区猪血清的区域性试验阳性率为75％(67/89);对82头份屠宰猪血清测定,53％阳性。抗原包被板保存期试验表明,包被板在-20℃可保存2个月。     

应用地高辛探针诊断猪细小病毒病

利用地高辛标记的ＰＵＰ重组质粒探针,分别对了株猪细小病毒（ＰＰＶ）分离毒及ＰＰＶ－ＢＭ１株细胞培养物的ＤＮＡ抽提物进行斑点杂交,结果均为阳性,而对照的猪瘟产为狂犬 病病毒ＰＲＶ）、乙型脑炎病毒及ＰＫ－１５细胞为阴性;对７份自然感染病料进行处理,杂交结果为阳性反应,对照健康猪组织,猪瘟病料、猪伪狂犬病病料则为阴性。