塔里木马鹿体表和游离蜱携带部分病原的检测

为了解新疆某场塔里木马鹿寄生蜱携带病原情况,采用PCR法检测马鹿体表蜱和环境中蜱携带的部分病原并进行鉴定。结果表明,69份蜱组织DNA样本有6份样本呈阳性,总阳性率8.7%(6/69),其中体表和环境中蜱样本阳性率分别为16.1%(5/31)和2.6%(1/38);经序列比对分析,3份鉴定为狍泰勒虫(Theileria capreoli),1份鉴定为无浆体未定种(Anaplasmasp sp.),1份为蜱的共生菌线粒体纤原体(Candidatus Midichloria mitochondrii)。结果提示应加强该场马鹿体表蜱和环境中蜱的驱治工作。     

四川省攀西地区羊梨形虫的分子流行病学调查

为了解四川省攀西地区羊梨形虫的感染情况及种类分布,本研究采用原虫、泰勒虫18S r RNA基因通用引物和种特异性引物对采集自凉山州和攀枝花市7个县/市的497份羊血样样品进行套式PCR检测,并对阳性样品进行测序和序列分析。结果显示,攀西地区7个县/市羊梨形虫阳性率为11.27%(56/497),其中吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫阳性率分别为10.46%(52/497)、0.20%(1/497),混合感染率为0.20%(1/497),未检出绵羊泰勒虫。分歧巴贝斯虫和Babesia sp.KO1阳性率分别为0.20%(1/497)和0.80%(4/497),Babesia sp.KO1与吕氏泰勒虫混合感染率为0.20%(1/497),未检出莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫。山羊和绵羊梨形虫阳性率分别为10.35%(47/454)和20.93%(9/43)。经卡方检验,西昌市、布拖县、会理县和米易县梨形虫阳性率均与美姑县、普格县和盐边县差异显著(p0.05),山羊与绵羊梨形虫阳性率也差异显著(p0.05)。本研究结果表明攀西地区存在羊梨形虫的感染,且以单一病原感染为主,其中吕氏泰勒虫为主要虫种,该地区应加强对羊梨形虫病的防控。     

四川省甘孜州藏绵羊梨形虫感染情况的调查

梨形虫病是严重危害牛羊养殖业的寄生虫病之一,本试验的目的是对四川省甘孜州藏绵羊主产区开展梨形虫感染情况调查。2018年6月—2019年5月,采集了甘孜州泸定、丹巴等9县主要藏绵羊养殖区临床健康藏绵羊全血352份,采用靶向18S rRNA的巢氏PCR进行梨形虫核酸检测,挑选阳性样本的PCR产物测序用于虫种的鉴定。结果表明,352份藏绵羊全血样本中梨形虫核酸阳性样本147份,平均阳性率为41.76%(147/352),其中半农半牧业县平均阳性率为48.25%(124/257),纯牧业县平均阳性率为24.21%(23/95);藏绵羊感染的虫种有吕氏泰勒虫(46/68)、绵羊泰勒虫(14/68)和奥氏巴贝斯虫(3/68)。本试验结果表明,甘孜州藏绵羊梨形虫感染率较高,优势虫种为吕氏泰勒虫,为甘孜州藏绵羊梨形虫病防控提供了重要参考。     

吉林省龙井市牛东方泰勒虫的流行病学调查

牛东方泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的东方泰勒虫寄生在牛的红细胞及淋巴细胞中,从而引起的一种具有传播性的血液原虫病,以高烧、贫血、出血、异常消瘦以及体表淋巴结肿大等症状为主要临床特征。为了掌握牛东方泰勒虫病在吉林省龙井市地区的流行情况,本试验采用血涂片染色镜检与PCR检测相结合的方法对该地域的牛血液样本进行牛东方泰勒虫病的流行病学调查,并利用等位特异型引物对该病进行分型。试验结果表明,龙井地区牛东方泰勒虫PCR检测样本阳性率为32.08%(17/53),C-型的阳性率和I-型的阳性率均为13.21%(7/53),而B-型仅为7.55%(4/53),且存在两种基因型的混合感染,B型和I型混合感染率为1.87%(1/53),B型和C型混合感染率1.87%(1/53)。     

伊犁尼勒克县与新源县马泰勒虫抗体检测

马泰勒虫病是一种经蜱传播的急性、季节性血液原虫病,在我国主要流行于新疆、内蒙古等地。为了解伊犁地区尼勒克县、新源县放牧马感染马泰勒虫的情况,本试验用马泰勒虫竞争性ELISA(cELISA)检测试剂盒,对尼勒克县、新源县放牧马(n=315)进行马泰勒虫抗体阳性率的检测。结果显示,两个县均不同程度地感染了马泰勒虫,其中尼勒克县马泰勒虫阳性率为29.82%(51/171),新源县马泰勒阳性率为53.33%(77/144),新源县阳性率较高。经统计分析发现,台努尔哈拉牧场、马场牛队马泰勒虫感染存在明显差异,与尼勒克乡、乌赞乡、那拉提镇、阿勒托别乡不同年龄段马泰勒虫感染无明显差异。此外,不同地区感染程度不同。试验数据可为当地的马泰勒虫防控提参考。     

伊犁部分地区马泰勒虫抗体的检测

为了解伊犁部分地区马场感染马泰勒虫(Theileria equi)的情况,试验将重组原核表达质粒pGEX4T-1/EMA1转化至大肠杆菌菌株BL21表达系统中,诱导表达56 ku的重组蛋白(EMA1);经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,对伊犁州六个不同地区随机采集的样品(n=352)进行马泰勒虫抗体的检测。结果表明:以GST-EMA1蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法可明显区分马泰勒虫阳性血清和健康马血清。在所检测的血清样品中,马泰勒虫血清抗体阳性率为7.4%(26/352),其中乌尊布拉克乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为7.3%(4/55)、昭苏镇的马泰勒虫血清抗体阳性率为13.2%(10/76)、萨尔阔布乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为8.2%(6/73)、察汗乌苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为6.5%(4/62)、喀拉苏乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.0%(1/49)、喀夏加尔乡的马泰勒虫血清抗体阳性率为2.7%(1/37);伊犁州等六个地区马场马泰勒虫血清抗体阳性率随年龄而改变,其中7岁马匹的马泰勒虫的血清抗体阳性率最高。说明马泰勒虫在伊犁地区马匹中普遍存在,应该加强对该病的检测、监控。     

吉林省牛瑟氏泰勒虫病分子流行病学调查

为了解吉林省牛瑟氏泰勒虫病感染情况,本试验根据牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列设计引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法对吉林省珲春、通化、安图、舒兰、龙井、辽源、白山共7个县市采集的247份血液样本进行了牛瑟氏泰勒虫病分子流行病学调查,并进行不同地区、不同饲养方式、不同性别及不同年龄之间的比较。结果显示,牛瑟氏泰勒虫总体阳性率为39.68%(98/247),其中通化阳性率最高为70.00%(14/20),龙井阳性率最低为20.00%(8/40),地区之间除安图和白山差异不显著(P>0.05)外,其他各地区之间均差异显著(P<0.05);散养牛阳性率64.44%(58/90)与规模化养殖牛阳性率25.48%(40/157)之间差异极显著(P<0.01);母牛阳性率38.46%(50/130)与公牛阳性率41.03%(48/117)之间差异不显著(P>0.05);1岁以内牛阳性率为56.67%(34/60),1～3岁牛阳性率为42.22%(38/90),3岁以上牛阳性率为26.80%(26/97),不同年龄间差异显著(P<0.05)。结果表明,吉林省牛瑟...     

江西省高安地区牛泰勒虫病的流行病学调查

本研究用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)结合聚合酶链式反应(PCR)对我国江西省60头肉牛样品(包括血清和血液基因组)进行了牛泰勒虫病的初步调查。结果显示,该省泰勒虫血清阳性率为100%,PCR检测阳性率28.3%。其中,环形泰勒虫(Ta)阳性率为26.7%,瑟氏泰勒虫(Tser)阳性率为15%,中华泰勒虫(Tsin)阳性率为3.3%,环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫共同感染率为13.3%,环形泰勒虫和中华泰勒虫共同感染率为3.3%。结果表明,江西省牛泰勒虫病感染较为严重,本研究为该地区牛泰勒虫病的综合防治提供了数据参考。     

四川省阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫分子流行病学调查

为调查阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫感染率,采用巢式PCR,对采自阿坝州5个县的200份全血样本进行检测,扩增梨形虫18S rRNA基因部分序列并克隆测序,经比对后确定虫种。结果5个县的梨形虫总阳性率为49.0%(98/200),其中红原县47.5%(19/40)、壤塘县67.5%(27/40)、阿坝县8.3%(2/24)、金川县8.3%(4/48)、小金县95.8%(46/48);牦牛感染的虫种全部为中华泰勒虫,总感染率为26.9%(29/108)。其中红原为35%、阿坝为8.3%、壤塘为100%、金川为8.3%,;藏绵羊感染的虫种全部为吕氏泰勒虫,总感染率为75.0%(69/92)。其中红原为60.0%、壤塘感染率为45.8%,小金县95.8%。阿坝州牦牛和藏绵羊梨形虫感染率较高,感染虫种单一,分别为中华泰勒虫和吕氏泰勒虫,地方株之间的同源性明显高于种间同源性。     

吉林省部分地区蜱和羊携带羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体分子流行病学调查

为调查吉林省部分地区蜱虫和羊体内羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的流行情况，本试验采用PCR方法对采自吉林省5个地区的340份羊血液样本和841份蜱虫样本进行检测，并对部分阳性样本测序，建立系统发育树。结果显示，蜱虫中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别为4.64%(39/841)和7.13%(60/841);羊血液样本中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别17.06%(58/340)和10.00%(34/340),混合感染率为3.24%(11/340)。蜱虫和羊血液样本中感染的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫单独感染，未检测到尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫。系统发育树分析显示，蜱虫和羊血液样本中检测到的泰勒虫与吕氏泰勒虫处于同一分支，与吕氏泰勒虫河南株亲缘关系较近，与尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫亲缘关系较远；蜱虫和羊血液样本中检测到的嗜吞噬细胞无浆体与韩国株、俄罗斯株处于同一分支，亲缘关系较近。结果表明，吉林省羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体感染普遍存在。本调查结果为吉林省羊泰勒虫病和嗜吞噬细胞无浆体病的综合防治提供了理论依据。     

羊泰勒虫套式PCR检测方法的建立

为了建立一种特异、敏感、快速检测羊泰勒虫方法,以羊泰勒虫主要表面蛋白(MPSP)基因设计引物,建立羊泰勒虫套式PCR检测方法。结果表明,该方法只能扩增出羊泰勒虫,而对照组羊巴贝斯虫、羊无浆体和弓形虫基因组DNA均未扩出目的条带。该方法敏感性是普通PCR的1 000倍,其最低检测到1拷贝数的MPSP基因。对采自吉林珲春地区30份羊血液样本检测发现,套式PCR阳性率为46.6%(14/30),高于普通PCR(40.00%,12/30)和血液涂片染色(23.33%,7/30),三者阳性符合率为100%。结果表明,所建立的套式PCR可用于羊泰勒虫病的诊断和流行病学调查。     

新疆天山马鹿戊型肝炎病毒血清流行病学调查

为了解新疆天山马鹿戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,试验采用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法对新疆地区3个集约化鹿场和1个散养鹿场的410份马鹿血清进行抗戊型肝炎病毒Ig G抗体检测,比较不同鹿群及不同年龄段马鹿HEV抗体阳性率的差异。结果表明:所检测的血清总的抗体阳性率为32.4%(133/410),4个鹿群的抗体阳性率依次为:32.5%(65/200)、46.0%(46/100)、21.0%(20/95)、13.3%(2/15),且差异极显著(P0.01);3个年龄段鹿群的抗体阳性率依次为:9.3%(7/75)、43.8%(92/210)、27.2%(34/125),且差异极显著(P0.01)。说明新疆天山马鹿存在HEV的自然感染。     

四川省攀西地区山羊泰勒虫病血清学检测

为了解四川省攀西地区山羊泰勒虫病流行情况,用双抗原夹心ELISA方法,对采自凉山彝族自治州和攀枝花市10个县/市的640份山羊血清样品进行检测。结果显示:攀西地区10个县/市羊泰勒虫血清抗体阳性率介于52.78%～100%,平均阳性率为73.44%(470/640);春季阳性率最高,秋季最低;经卡方检验,不同地区和季节的羊泰勒虫血清抗体阳性率差异均显著(χ~2=54.392,P 0.01和χ~2=38.157,P 0.01)。结果表明,攀西地区羊泰勒虫病流行较为严重,且流行呈现明显的地区和季节性特征。本研究为该地区羊泰勒虫病防控提供了流行病学参考数据。     

新疆托克逊部分地区牛环形泰勒虫感染情况调查

为了解2014-2016年托克逊县部分地区牛环形泰勒虫病的感染情况,采用血液涂片法对托克逊县4个乡疑似牛环形泰勒虫的835例进行病原学检测,并分析各年龄段和不同地区牛环形泰勒虫的感染情况。结果表明,该疫区2014-2016年牛环形泰勒虫阳性率为49.46%(413835);4个乡均不同程度感染牛环形泰勒虫,其中伊拉湖乡牛环形泰勒虫阳性率最高,为53.80%(99/184)。不同年龄段牛环形泰勒虫感染无显著性差异。调查结果为托克逊地区环形泰勒虫病的防控提供了参考。     

潍坊市牛泰勒虫病感染情况调查

本研究用血液涂片检查结合聚合酶链式反应(PCR)对潍坊市104头奶牛血液样品进行了牛泰勒虫病的初步调查。结果显示该市泰勒虫血液涂片染色阳性率为15.4%,PCR检测瑟氏泰勒虫阳性率为8.7%,环形泰勒虫阳性率为20.2%,表明潍坊市牛泰勒虫病感染率较高。本研究为该地区牛泰勒虫病的综合防治提供了数据参考。     

中国不同地区羊吕氏泰勒虫分子流行病学调查及遗传进化分析

为了解吕氏泰勒虫在中国不同地区山羊和绵羊中的流行情况,本研究应用基于吕氏泰勒虫18S rRNA基因位点的PCR检测方法,对采自中国河南、甘肃、陕西、山西、贵州、云南、新疆7个地区的281份羊血液样品进行检测,并对阳性样品测序以进行序列分析。结果显示,羊吕氏泰勒虫总感染率为35.23%(99/281)。不同采样点羊吕氏泰勒虫感染率差异极显著(P0.01),其中河南省羊吕氏泰勒虫感染率最高(98%,49/50),新疆最低(0)。绵羊和山羊吕氏泰勒虫感染率分别为51.67%(31/60)和30.77%(68/221),差异极显著(P0.01);放牧羊吕氏泰勒虫感染率(41.55%,86/207)极显著高于舍饲羊(17.57%,13/74)(P0.01);羊吕氏泰勒虫感染率在春、夏、秋及冬四季分别为56.00%(28/50)、42.75%(59/138)、9.43%(5/53)和17.50%(7/40),差异极显著(P0.01);≥12月龄和12月龄羊吕氏泰勒虫感染率分别为33.50%(67/200)和39.51%(32/81),差异不显著(P0.05)。此外,遗传进化分析表明,本研究获得的羊吕氏泰勒虫分离株与中国流行的吕氏泰勒虫分离株同源性高达99.60%以上,且位于同一分支上。本研究为进一步了解中国不同地区羊吕氏泰勒虫的流行现状及分布提供了重要参考依据。     

托克逊县牛环形泰勒虫媒介蜱形态鉴定及病原检测

为了解托克逊县璃眼蜱及其携带病原情况,采用形态学方法和分子生物学方法对璃眼蜱形态学及其携带病原牛环形泰勒虫的基因(Tams1)进行PCR扩增,鉴定和检测采自托克逊地区疑似牛体表璃眼蜱(473枚)及其携带牛环形泰勒虫的感染情况。结果表明:采集的硬蜱经形态学鉴定为小亚璃眼蜱(248枚)和亚洲璃眼蜱(225枚)。小亚璃眼蜱携带牛环形泰勒虫有20枚,阳性率为8.06%(20/248);亚洲璃眼蜱携带牛环形泰勒虫有16枚,阳性率为7.11%(16/225)。4个乡采集的璃眼蜱均有不同程度携带牛环形泰勒虫的情况,其中伊拉湖乡牛环形泰勒虫阳性率最高,为8.40%(11/131)。说明托克逊县的气候环境适合媒介蜱的孳生,是当地牛环形泰勒虫病广泛流行的重要因素。     

新疆部分地区羊泰勒虫病的流行情况调查

为了解新疆地区羊泰勒虫的感染情况,本研究在新疆阿勒泰地区、巴州地区和哈密地区随机采集山羊和绵羊血样(679份),对其进行18S rRNA PCR检测及其基因序列比对分析。结果显示,新疆阿勒泰地区、巴州地区和哈密地区羊泰勒虫病阳性率分别为23.3%(63/270)、7.63%(12/163)和5%(12/246),且均为绵羊泰勒虫病;基于18S rRNA基因序列比对分析,显示分离的虫株与新疆喀什、土耳其分离的虫株同源性为99.8%;系统发育进化树分析显示,分离株同喀什株、土耳其株、伊拉克株进化关系一致,与坦桑尼亚株、苏丹株、法国株、西班牙株进化关系相差较远。本试验结果表明,新疆阿勒泰地区、巴州地区及哈密地区均存在绵羊泰勒虫的感染情况,本研究结果为新疆羊泰勒虫病综合防控奠定基础。     

云南省腾冲市牛羊感染梨形虫的分子流行病学调查

为了解腾冲市牛、羊感染梨形虫的流行情况,本研究选择腾冲市11个乡镇为采样点,采集牛、羊血液样本,采用分子生物学方法,扩增包括泰勒虫属和巴贝斯虫属在内的梨形虫科18S rRNA基因约1 600 bp片段,阳性产物进行测序,根据序列同源性比对和遗传进化分析,进行虫种鉴定。共采集758头牛、羊的血样,检出阳性207头,总阳性率27.31%。其中牛、羊阳性率分别为45.02%(149/331)、13.58%(58/427)。11个乡镇的牛均有检出,6个乡镇的羊有阳性。检出虫种包括巴贝斯虫(Babesia)和泰勒虫(Theileria)两属共13种,均为蜱传血液原虫,泰勒虫占82.13%(170/207),巴贝斯虫占17.87%(37/207)。巴贝斯虫种类包括:狍巴贝斯虫(B.capreoli)、猎户巴贝斯虫(B.venatorum)、双芽巴贝斯虫(B.bigemina)、牛巴贝斯虫(B.bovis)、微小巴贝斯虫(B.microti)等5种;泰勒虫种类包括:吕氏泰勒虫(T.luwenshuni)、环形泰勒虫(T.annulata)、水牛泰勒虫(T.buffeli)、东方泰勒虫(T.orientalis)、瑟氏泰勒虫(T.sergenti)、绵羊泰勒虫(T.ovis)、附膜泰勒虫(T.velifera)和一种新的未命名泰勒虫共8种。牛感染6种泰勒虫和4种巴贝斯虫,羊感染3种泰勒虫和2种巴贝斯虫。该结果表明腾冲市养殖的牛羊存在梨形虫病的广泛流行,且虫种丰富,具有较高的多样性特征,需加强防范。     

四川省理塘县牦牛感染泰勒虫的分子流行病学调查及虫种鉴定

为调查四川省理塘县牦牛泰勒虫的感染情况及流行规律,2019年5—11月和2020年4—10月自理塘县采集临床健康牦牛全血共345份,采用以18S rRNA为靶基因的巢式PCR方法进行泰勒虫检测,分析理塘县牦牛泰勒虫感染的季节规律、年龄段、体重变化、性别特点,对全部泰勒虫核酸检测阳性样本共计65份进行虫种鉴定。结果显示:345份牦牛样本中检测出泰勒虫核酸阳性样本65份,平均阳性率为18.84%;5、6月牦牛泰勒虫阳性率高于其他月份;2～5岁组牦牛泰勒虫阳性率最高,显著高于5岁以上组牦牛(P0.05),与0～2岁组牦牛差异不显著(P0.05);感染泰勒虫的牦牛体重普遍偏轻;公牦牛感染率略高,差异不明显;65份泰勒虫核酸检测阳性样本成功测序58份,鉴定出感染的虫种有中华泰勒虫57份、吕氏泰勒虫1份,其中中华泰勒虫占比98.28%,吕氏泰勒虫占比1.72%。提示:首次对理塘县牦牛感染泰勒虫的流行规律进行调查,理塘县牦牛泰勒虫感染率较高,不同季节、年龄段之间存在差异,优势虫种为中华泰勒虫,为理塘县牦牛梨形虫病的防控提供了重要参考。