如何做好新生犊牛血清的生产管理和质量监控

进行动物细胞、器官或组织的培养时，大多都需要在培养基中添加必需的新生犊牛血清或者胎牛血清。由于价格上新生犊牛血清比胎牛血清要低得多，并且也足以满足一些常规培养的要求，因此，新生犊牛血清制品在很长一段时间内会拥有广阔市场，生产这一产品会带来很大经济效益。由国家药品监督管理局颁布的《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》(2000年版)，首次登录了“牛血清”条目，     

牛血清中非特异性因子对貉传染性肠炎病毒增殖的抑制作用

7例从丹麦进口的成牛血清,5例本地成牛血清、3例初生犊牛血清及1例胎牛血清对貉传染性肠炎病毒核内包涵体形成抑制率(平均值)分别为71.6％、77.1％、5.8％及23.4％,30例从丹麦进口成年牛血清、12例本地成年牛血清、12例初生犊牛血清及1例胎牛血清对REV的红细胞凝集抑制价平均分别为1:72.4、1:68、1:54.6及1:64。在有牛血清存在的情况下,应用组织培养增殖病毒时,REV的红细胞凝集价明显下降。牛血清中的抑制因子对猫胎肾细胞株具有亲和性。该抑制因子不是来自抗REV或者与REV有交叉反应的某种病毒的抗体,而是种非特异性抑制因子。     

用供卵牛血清体外培养牛胚胎试验

牛受精卵的培养及移植一般用牛胎血清、犊牛血清、新生犊血清和去势牛血清等。这些血清对受精卵发育的有效性差异很大,使用前需进行试验。本试验以供卵牛血清,培养新鲜和解冻后的胚胎,比较其发育效果。     

兽用生物制品生产用牛血清质量标准研究——牛血清对Sp2/0细胞增殖试验研究

为制定兽用生物制品生产用牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准,将处于对数生长期的Sp2/0细胞分散,配制成50万/mL细胞悬液,用含10%不同牛血清的MEM营养液,在96孔细胞培养板上作对倍稀释,在5%CO2培养箱37℃培养48 h,计数每种血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率。结果表明,胎牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为20%-26%,犊牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为12%-18%。以胎牛血清作为标准参考血清计算不同牛血清对Sp2/0细胞的相对克隆形成率,3批胎牛血清的相对克隆形成率均在80%以上,6批有效期之内的新生牛血清的相对克隆形成率为50%左右。因此,将兽用生物制品生产用胎牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于80%;新生犊牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于50%。     

环形泰勒虫裂殖体感染细胞培养技术的改进

在环形泰勤虫裂殖体胶冻细胞苗工厂化生产中，将小转瓶培养改为大转瓶培养，在此基础上又用成年健康黑白花牛血清代替犊牛血清，加犊牛血清的培养液收获细胞数为１４６．０万个／ｍＬ，而加成年牛血清的培养液在２次细胞培养中收获细胞数分别达１５３．８万个／ｍＬ和１６２．０万个／ｍＬ。     

犊牛注射佐剂后血清中抗体的测定

３０头５日龄犊牛腹膜腔内注射自制的油包水佐剂，１４天后，应用补体结合反应与双相琼脂扩散反应，检测犊牛血清中的抗体浓度。结果表明，试验组犊牛血清中的抗体浓度均比对照组高７．５－８个滴度，呈现免疫有效。     

健康牛血清游离氨基酸的分析

使用日立835-50型氨基酸分析仪对30头健康牛血清的游离氨基酸进行了分析。犊牛血清的游离氨基酸的总含量比成牛血清多50mg/1000ml;每种游离氨基酸的浓度也是不一样的,有的是成牛高,有的是犊牛高。因此,如果用多份成牛和犊牛血清进行组织培养,效果可能会好。     

几种动物血清作为CEF培养天然培养基的比较研究

测试了６种不同动物血清作为鸡胚成纤维细胞（ＣｈｉｃｋｅｎＥｍｂｒｙｏＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＣＥＦ）培养天然培养基的效果。其结果为：所试各血清对ＣＥＦ均具有促细胞贴壁作用。胎牛血清、鸡血清、兔血清促细胞生长作用较强，２４ｈ可使ＣＥＦ长满单层；胎牛血清支持细胞生存期最长（２０ｄ），其次是成牛血清和山羊血清（１７ｄ）。     

不同冻存液对奶牛乳腺上皮细胞冻存质量的影响

试验旨在探究奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）最佳的冻存液以改善乳腺上皮细胞的冻存质量。BMECs传至第5代后分别加入以下10种不同配方的冻存液。A组：85%DMEM＋10%胎牛血清＋5%DMSO;B组：80%DMEM＋10%胎牛血清＋10%DMSO;C组：75%DMEM＋10%胎牛血清＋15%DMSO;D组：70%DMEM＋10%胎牛血清＋20%DMSO;E组：85%DMEM＋5%胎牛血清＋10%DMSO;F组：75%DMEM＋15%胎牛血清＋10%DMSO;G组：70%DMEM＋20%胎牛血清＋10%DMSO;H组：80%DMEM＋10%胎牛血清＋10%甘油;I组：70%DMEM＋10%胎牛血清＋20%甘油;J组：60%DMEM＋10%胎牛血清＋30%甘油,冻存前统一调整细胞密度到1×106个/mL冻存。分别对复苏后的细胞进行台盼蓝染色计算存活率和PI/Hoechst33258双染计算凋亡率。结果表明,BMECs经不同冻存剂冻存复苏后,细胞活力、形态学及凋亡率表现有所不同,其中B组和G组的活力和24h贴壁率较其他组高,二者的凋亡率较低,二者之间差异无显著性（P〉0.05）;传代后B组细胞的生长状况最好。     

牛病毒性腹泻/粘膜病的免疫扩散试验程序及判定标准

1、细胞的制备和培养(1)犊牛肾原代细胞:取非疫区的犊牛肾按常规方法制备细胞,所用的培养基为0.5%水解乳蛋白和10%犊牛血清的Earle氏液,每毫升含青链霉素各100单位。犊牛血清应事先经56℃灭活30分钟,而且不含粘腆病抗体,置37℃进行培养。(2)牛鼻甲细胞:取非疫区犊牛(最好是胎牛)的鼻甲,剪成小块(约1立方毫米)。用0.25%胰酶在35℃消化10分钟,让组织块沉下后倒掉胰酶,然后加新胰酶,在35℃消化30分钟(或4℃过夜),用吸管吹打组织块,两层纱布过滤,滤出液用2,000rpm离     

猪卵母细胞在玻璃化冷冻液中的培养效果

本试验的目的是要选择较好的用于猪卵母细胞玻璃化冷冻的玻璃化冷冻液，玻璃化液由ＴＣＭ－１９９、ｍＰＢＳ、Ｋｉｅｖ液分别加２０％的犊牛血清与３种抗冷冻剂（丙三醇、１，２──丙二醇和乙二醇）组成。猪卵母细胞采自屠宰厂的卵巢并培养在ＴＣＭ－１９９＋２０％犊牛血清、ｍＰＢＳ＋２０％犊牛血清和Ｋｉｅｖ＋２０％犊牛血清中，在３７℃、湿度１００％条件下培养至少５个小时。５小时后逐渐加入抗冷冻剂，使其终浓度达５０％。培养５分钟后，将猪卵母细胞依次移至抗冷冻剂浓度为２５％，１２．５％和０％的培养液中，培养５分钟，而后进行台盼蓝死活染色。结果表明猪卵母细胞在各组培养后的存活率没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），但乙二醇结果优于其它抗冷冻剂，而ＴＣＭ－１９９好于其它两类培养液。     

鸡传染性法氏囊病病毒快速适应鸡胚成纤维细胞的研究

将鸡传染性法氏囊病病毒的鸡胚组织毒或法氏囊组织毒直接在鸡胚成纤维细胞(CEF)上盲传3～13代后。能产生特征性细胞病变效应(CPE)。病毒在含65℃灭能30分钟的犊牛血清的细胞生长液制备的CEF上传代,比在含有56℃灭能的犊牛血清的生长液制备的CEF上传代能早3～5代出现CPE,而得到适应;鸡胚高代毒比鸡胚低代毒更易适应CEF;法氏囊组织毒和鸡胚低代毒对适应CEF的进程没有显著差异。     

日本黑牛发生一种新的遗传性疾病

自1990年以来，在日本中部地区的幼龄日本黑牛中发现一种新的疾病．其特征是生长不良和蹄延长。被侵袭犊牛血清尿素氮和肌酐浓度高，临床诊断提示为肾衰竭。流行病学、临床和病理学研究表明是一种涉及肾小管发育不全的新的遗传性疾病。     

谈新生牛血清的质量控制

新生牛血清是指出生14h之内的未吃初乳的犊牛血清,也有人称之为小牛血清、犊牛血清等.由于它未受初乳影响,具有丰富的营养物质,抗体、补体中的有害成分最少,因而在生物学领域中得到了广泛应用,特别是在生物制品的生产制造过程中得到了大量应用.     

60Coγ射线辐照的犊牛血清对细胞培养及病毒增殖的影响

现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系。这些技术几乎都是以细胞培养作为载体而发展起来的,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用,更是起到了不可替代的基础性作用。犊牛血清是细胞培养中最重要的培养基,它具有促进细胞增殖和诱导细胞分化等生物学功能,犊牛血清中的外源病毒会影响到生物制品的质量与     

水牛卵母细胞体外受精及其早期胚胎性别鉴定

从屠宰场收集了本地水牛卵巢380个，平均每个卵巢回收3．29枚可用卵母细胞。分别采用添加5％、10％自制发情牛血清和国产胎牛血清培养液体外成熟培养水牛卵母细胞，结果表明，发情牛血清影响牛卵母细胞体外成热的效果与胎牛血清的效果无显著差异（48．89％vs51.11％，52．22％Vs50．00％），2种浓度间亦无显著差异。在胚胎培养液中添加10％的发情牛血清，比添加5％发情牛血清的卵裂率和胚胎发育率显著升高（34．85％Vs23．58％，39．13％Vs31.48％），差异显著。通过自主设计的两对引物扩增公水牛特有的Sry基因以及公母水牛共有的水牛1．715卫星DNA序列，采用连续多重PCR方法，能够有效地对水牛早期胚胎进行性别鉴定。     

应用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗的研究试验

生产鸡痘细胞苗一直以来都是在细胞中加入适量犊牛血清的培养液进行培养．但是由于犊牛血清中广泛性的存在牛黏膜病的病毒抗体，给鸡痘细胞苗的生产带来了很大的困难。为了排除该病毒抗体的干扰，顺利而稳定地生产鸡痘细胞苗，因此笔者应用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗的试验。最后测得两种细胞苗的效价基本相等．从而可以得出利用小牛血清代替犊牛血清生产鸡痘细胞苗是可行的。     

γ-聚谷氨酸对断奶犊牛血清生化指标的影响

[目的] 研究γ-聚谷氨酸对断奶犊牛血清生化指标的影响。[方法] 将体重相近的荷斯坦断奶犊牛16头,按同质原则分为对照组和试验组,每组8头。两组犊牛每天每头饲喂3 kg颗粒饲料,玉米秸秆随意采食。试验组颗粒饲料中按照千分之五的比例加入γ-聚谷氨酸（膏状液体,含量为20%）。试验时间70 d,预试期10 d,正试期60 d。在试验最后一天采集血液样品测定血清生化指标。[结果] 对照组犊牛血清中IgG、IgA和IgM含量显著（P<0.05）高于试验组;对照组犊牛血清中SOD、GSH-Px活性显著（P< 0.05）高于试验组;两组AST与ALT活性差异不显著（P>0.05）;对照组和试验组犊牛血清中TP、ALB、BUN、NEFA、GLU、Ca、P、Fe、Zn含量差异不显著（P>0.05）,试验组断奶犊牛血清中Cu、VA和VC含量显著（P<0.05）低于对照组。[结论] ①γ-聚谷氨酸会降低断奶犊牛血清中免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）的含量;②γ-聚谷氨酸有提高断奶犊牛机体抗氧化能力的可能;③γ-聚谷氨酸可能会促进断奶犊牛对Cu、VA和VC的吸收与利用;④γ-聚谷氨酸未对断奶犊牛肝脏功能、能量代谢、能量平衡、蛋白质利用产生负面影响。     

仔猪血清与胎牛血清培养猪耳缘成纤维细胞的比较性研究

采用组织块贴壁培养法,分别用10%仔猪血清和10%胎牛血清DMEM培养基进行猪耳缘成纤维细胞原代、传代培养。结果表明,两组成纤维细胞生长及形态、贴壁率、生长曲线、细胞增值能力均无差异。仔猪血清能完全能替代胎牛血清对猪耳缘组织成纤维细胞进行培养。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。