首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 687 毫秒
1.
《畜牧与兽医》2015,(5):81-84
建立Con A刺激山羊外周血淋巴细胞增殖模型,采用酶联免疫方法和黄嘌呤氧化酶法测定富硒女贞子作用后淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。分析富硒女贞子对山羊外周血淋巴细胞因子分泌、SOD的影响,探讨富硒女贞子免疫调节机制及抗氧化作用。结果:富硒女贞子蛋白质、齐墩果酸,普通女贞子多糖可明显刺激淋巴细胞产生IL-2,但与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。富硒和普通女贞子均极显著提高外周血淋巴细胞中SOD的活性(P0.01),且富硒女贞子的作用效果明显优于普通女贞子。研究结果表明,富硒女贞子可促进山羊外周血淋巴细胞IL-2的分泌,可提高其抗氧化能力。  相似文献   

2.
富硒女贞子对山羊外周血淋巴细胞增殖活性的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过提取富硒女贞子多糖、蛋白质和齐墩果酸,采用MTT法测定三大类物质体外对山羊外周血淋巴细胞增殖活性的影响。方差分析的多重比较结果显示富硒女贞子多糖、蛋白质和齐墩果酸体外均具有促进ConA刺激山羊外周血淋巴细胞分裂增殖的作用,且富硒女贞子蛋白质组分、齐墩果酸组分的作用效果明显优于普通女贞子组,各相应浓度比较差异显著比例分别达到63.64%、40.00%。说明富硒女贞子能进一步提高山羊外周血淋巴细胞的增殖活性。  相似文献   

3.
为了研究在不同热应激强度处理下,小鼠乳腺上皮细胞环磷酸腺苷(c AMP)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化,试验将传至第3代的乳腺上皮细胞分为对照组(37℃)和热应激组,其中热应激组分为39℃组(0.5,1,1.5,2 h)和41℃组(0.5,1,1.5,2 h),同时提供5%CO2和饱和湿度的培养环境。结果表明:与37℃对照组相比,39℃培养1,1.5 h的小鼠乳腺上皮细胞c AMP水平显著升高(P0.05);39℃培养2 h和41℃培养0.5,1,1.5,2 h的小鼠乳腺上皮细胞c AMP水平极显著升高(P0.01)。与37℃对照组相比,39℃培养1.5 h的小鼠乳腺上皮细胞SOD活性显著高于对照组(P0.05),39℃培养1 h、41℃培养0.5,1,1.5,2 h的小鼠乳腺上皮细胞SOD活性极显著高于对照组(P0.01)。与37℃对照组相比,41℃培养1.5 h的小鼠乳腺上皮细胞MDA含量显著高于对照组(P0.05),39℃培养0.5,1,1.5,2 h和41℃培养1 h的细胞内MDA含量极显著高于对照组(P0.01)。说明随着热应激强度加强,小鼠乳腺上皮细胞的c AMP浓度上升;随着温度升高,MDA含量有下降趋势,SOD活性明显上升;在不同的热应激时间下,细胞的SOD活性呈下降趋势,MDA含量处于波动状态。  相似文献   

4.
为了探索富硒女贞子对奶牛热应激的干预作用,试验选用40头年龄、胎次、产奶量相近的中国荷斯坦奶牛随机分为4组,其中组1~组3每头每天拌料饲喂60g、40g、20g剂量的富硒女贞子,组4每头每天拌料饲喂40g普通女贞子。通过试验期间每旬前3天下午15时1次/d给药,检测血常规和血清中内分泌、抗氧化性能、细胞因子、热应激休克蛋白的变化。结果发现:用药后,组2的ACTH水平和皮质醇水平显著下降(P0.05),T3恢复到正常水平。组1、组2的热应激休克蛋白含量显著升高(P0.05),组2和组4的SOD和GSH-PX水平显著提高(P0.05)。组1、2、4的IFN-γ水平显著提高(P0.05),表明富硒女贞子可以有效改善热应激期间奶牛的内分泌、抗氧化能力、免疫能力,促进HSP70分泌,显示良好的抗热应激效果。  相似文献   

5.
6.
应用特异性方法检测转化生长因子(TGF-β1)对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用,用不同浓度的TGF-β1作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,在不同时间收集培养细胞及其培养液,应用MTT法检测细胞增殖、应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率法检测细胞凋亡。结果表明,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞增殖差异显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强。细胞凋亡检测显示,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞凋亡差异均显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强。TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡。  相似文献   

7.
应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测王不留行邻苯二甲酸二丁酯对乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响,研究王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯对奶牛泌乳中期乳腺上皮细胞增殖和泌乳性能的影响。试验结果表明,王不留行增乳活性单体成份邻苯二甲酸二丁酯对奶牛乳腺上皮细胞的增殖和细胞活力提高均显著(P0.05);能显著提高乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达(P0.05),也能提高乳糖的分泌(P0.05,P0.05)。因此,王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯可显著提高乳腺上皮细胞的增殖和泌乳能力。  相似文献   

8.
《中国兽医学报》2017,(10):1928-1932
通过提取富硒女贞子蛋白和普通女贞子蛋白,采用MTT和ELISA法检测其对奶牛外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte;PBL)增殖活性和多种细胞因子分泌功能的影响。试验结果表明,2种蛋白均可促进ConA刺激下的奶牛外周血淋巴细胞增殖,效果随浓度的增加而上升,在浓度高于400 mg/L时普通女贞子蛋白较对照组效果显著(P<0.05),富硒女贞子蛋白差异极显著(P<0.01),且富硒女贞子蛋白在各个浓度均优于普通女贞子蛋白,差异显著(P<0.05)。富硒女贞子蛋白组的IL-2、IL4、IL-6、IFN-γ水平均显著高于对照组(P<0.05),其中IL-4水平与对照组差异极显著(P<0.01),普通女贞子蛋白的IL-4和IFN-γ较对照组也有显著提高(P<0.05)说明富硒女贞子蛋白可以进一步提高奶牛外周血淋巴细胞细胞活性,并调升细胞因子的分泌。  相似文献   

9.
本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10~1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。  相似文献   

10.
《畜牧与兽医》2015,(6):105-108
通过观察小鼠热应激模型的生长指标、免疫器官指数、血清IL-2及激素的动态水平,探讨富硒女贞子抗热应激的调节作用。将108只ICR小鼠随机分成6组(每组设3个重复),分别为常温对照组(C)、热应激组(HS)、普通女贞子组(1.5 g/kg,CLL)和富硒女贞子组(剂量分别为0.75 g/kg、1.5 g/kg、3.0 g/kg,分别表示为HSLL、MSLL、LSLL)。除C组外,其他各组于T:(40±1)℃,RH:40%~50%人工气候室中,11:00-13:00热应激2 h,应激期间不间断供水和药液(自由饮用);其余时间置于白天T:(35±4)℃,RH:45%~50%环境下,夜晚T:(28±5)℃,RH:30%~40%环境下,连续高温应激7 d。结果表明,在高温应激条件下,LSLL组的增重率(WG)和生长率(SGR)分别显著和极显著高于HS组(P0.05,P0.01);CLL组、MSLL组、LSLL组免疫器官指数均显著高于HS组(P0.05);热应激前期(1~3 d),HS组血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度显著增高(P0.01),CLL、MSLL和LSLL组均无显著差异(P0.05);HS组的皮质醇(CORT)浓度较C组显著升高(P0.05),女贞子各组均有降低,其中MSLL组与C组无显著差异(P0.05);HS组血清中的T3、T4浓度总体上呈现下降的趋势,但是CLL、LSLL组的T3、T4浓度均显著高于HS组(P0.01);IL-2方面,在热应激前期(1~3 d),富硒女贞子HSLL组、LSLL组的IL-2显著高于HS组和C组(P0.05,P0.01)。结果提示,富硒女贞子和女贞子对热应激造成小鼠生长不良及免疫器官损伤均具有明显的缓解作用,并能够增强热应激小鼠免疫调节功能,通过机体的内分泌-免疫调节网络系统,改善机体的内环境稳态,发挥提高动物耐热能力的作用,且以低剂量(0.75 g/kg)富硒女贞子组作用最佳。  相似文献   

11.
为了探讨角鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SQLE)基因对体外培养奶牛乳腺细胞凋亡及增殖的影响,本研究用RNAi技术敲低奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因;用实时荧光定量PCR方法检测奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因及凋亡和周期相关基因的表达;用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用周期和凋亡检测试剂盒筛选细胞,用流式细胞术准确计数处于不同周期的细胞数和凋亡细胞数。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞转染siRNA后,SQLE基因相对表达量显著下降(P0.05),细胞增殖受到极显著抑制(P0.01);G1期细胞数量显著下降(P0.05),G2期细胞数量没有显著性改变,S期细胞数量显著上升(P0.05);肿瘤坏死因子超家族成员6(又称Fas或CD5)的相对表达量显著上升(P0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(cyclin dependent kinase inhibitor 1B,P27)相对表达量显著上升(P0.05),而细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤因子2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,Bax)显著下降(P0.05)。综上所述,敲低SQLE基因通过调节相关基因的表达抑制乳腺上皮细胞的增殖。  相似文献   

12.
本实验旨在研究苜蓿黄酮对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞的影响。将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0,25,50,75和100 μg/mL苜蓿黄酮,同时置于细胞培养箱37℃,5%CO2培养72 h,再在 42℃恒温水浴锅中热应激1 h后返回细胞培养箱培养12 h,检测细胞活性、抗氧化指标和相关基因的表达。结果显示:1)添加25 μg/mL组的细胞活性显著高于0和50 μg/mL组(P<0.05),其他各组之间差异不显著。2)相对于0 μg/mL组,50~100 μg/mL组细胞的GSH-Px活性升高(P<0.01),LDH和MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),而CAT活性无显著性差异。3)相对于0 μg/mL组,50和75 μg/mL组Caspase3和Socs3基因表达降低(P<0.01),25 μg/mL组P53、Stat1和Socs1基因表达升高(P<0.01或P<0.05),而Bcl-2和Fas基因表达无显著差异。综上所述,在热应激下,苜蓿黄酮能够提高体外培养奶牛乳腺上皮细胞的活性,改善抗氧化能力和抑制细胞凋亡,其中添加75 μg/mL效果较好。  相似文献   

13.
本试验旨在研究银杏叶提取物(Ginko biloba extract,GBE)对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×104个/孔接种于96孔板,培养48 h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000 μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理(0、0.5、1、2和4 h)建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150 mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长(P<0.01),50 μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率(P<0.01)。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSH-Px含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4 h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。  相似文献   

14.
本试验旨在研究银杏叶提取物(Ginko biloba extract,GBE)对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×104个/孔接种于96孔板,培养48h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理(0、0.5、1、2和4h)建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长(P0.01),50μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率(P0.01)。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSHPx含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。  相似文献   

15.
为探讨热应激对科尔沁牛和科尔沁肉牛抗氧化功能的影响,选择体况相近、身体健康的母牛各20头,分别在热应激(夏季)和非应激(春季)对其进行了抗氧化指标比较。结果表明,在热应激状态下,科尔沁肉牛血清中的SOD、GSH含量差异显著高于科尔沁牛(P<0.05),T-AOC含量有比科尔沁牛有升高趋势,但差异不显著(P>0.05),MDA含量极显著低于科尔沁牛(P<0.01);在非应激期间科尔沁肉牛和科尔沁牛差异不显著(P>0.05);热应激下科尔沁牛和科尔沁肉牛血清中的SOD、GSH、T-AOC含量较非应激状态极显著降低(P<0.01),科尔沁牛的MDA含量较非应激状态极显著升高(P<0.01),科尔沁肉牛的MDA含量较非应激状态显著升高(P<0.05)。生理指标中热应激期间科尔沁牛的直肠温度显著高于科尔沁肉牛(P<0.05),而呼吸频率无显著差异(P>0.05)。综上表明,在热应激状态下科尔沁肉牛比科尔沁牛的抗氧化能力更强,耐热应激能力强于科尔沁牛,更能较好地适应高热环境。  相似文献   

16.
几种中草药抗蛋鸡热应激作用分子机制的初步研究   总被引:13,自引:0,他引:13  
试验选用59周龄海兰褐蛋鸡80只,随机分为4个处理组,试验1~3组分别添加1%的女贞子、五味子和四君子汤,试验4组为对照组。试验期为4周。研究这几种中草药对热应激状态下蛋鸡生产性能、抗氧化功能、内分泌以及HSP70基因表达的影响。鸡舍内平均温度为(32.0±0.5)℃,相对湿度为60%~70%。结果表明:(1)女贞子、五味子和四君子汤显著提高了热应激状态下蛋鸡的产蛋率(P<0.05),女贞子和五味子显著降低料蛋比(P<0.05);(2)女贞子、五味子和四君子汤能显著降低蛋鸡组织和血清脂质过氧化物含量;(3)女贞子和五味子能显著降低血清GOT和ALT活性(P<0.05),四君子汤显著降低血清ALT活性(P<0.05);(4)五味子和四君子汤极显著提高了血清中T3含量(P<0.01),女贞子、五味子和四君子汤显著降低高温条件下产蛋鸡血清中Cor含量(P<0.05);(5)女贞子、五味子和四君子汤显著提高肝脏HSP70基因表达(P<0.05)。由本试验结果可见,女贞子、五味子和四君子汤能通过增强热应激下蛋鸡脂质稳定性、调节内分泌以及提高HSP70基因表达等途径改善热应激下蛋鸡的生产性能,减轻热应激对蛋鸡的危害。  相似文献   

17.
本试验旨在研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对热应激诱导的猪小肠上皮细胞IPEC-J2抗氧化能力、内质网应激通路蛋白表达和细胞凋亡的影响。采用单因子试验设计,试验分3组,分别为对照组(CON,37℃)、热应激组(HS,43℃)和NAC加热应激组(NAC+HS,43℃)。其中NAC+HS组细胞在NAC(0.5 mmol/L)预处理12 h后,进行热应激处理4 h,测定细胞氧化损伤情况、活性氧自由基(ROS)含量、抗氧化酶的活性、线粒体膜电位变化、细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达。结果表明:与CON组相比,热应激导致细胞中ROS和丙二醛(MDA)含量显著增加,铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)、锰超氧化物歧化酶(SOD2)和过氧化氢酶(CAT)的表达量提高(P<0.05);与HS组相比,添加NAC降低了氧化损伤和抗氧化酶(SOD2、CAT)的表达(P<0.05)。与CON组相比,热应激增加热休克蛋白A5(HSPA5)、磷酸化真核细胞翻译启始因子2α(p-eif2α)、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达量(P<0.01);添加NAC降低HSPA5、...  相似文献   

18.
葛根素(Pue)是从中药野葛或甘葛藤根中提取的黄酮类化合物,有明显的抗氧化功能。Pue是否有对热应激时牛睾丸支持细胞(SCs)保护作用尚不清楚。本研究采用42℃热应激1 h,然后34℃恢复6 h。用CCK-8检测细胞存活率;用Hoechst33258检测细胞凋亡;用分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的变化,以及Western-Blot检测HSP70蛋白表达。结果显示,热应激后细胞存活率下降,细胞发生凋亡,产生氧化损伤。葛根素和维生素E可以极显著降低热应激时细胞MDA含量,显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。Pue与维生素E组相比无显著性差异。此外,葛根素可显著增加受热应激SCs中HSP70蛋白的表达。上述结果表明,葛根素能减少热应激下SCs的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及增加热休克蛋白HSP70的表达有关。  相似文献   

19.
不同中药对奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
为研究中药对奶牛乳腺抗氧化能力的影响,选取7种中草药(王不留行、黄芪、漏芦、木通、通草、蒲公英、甲珠)测定其对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力的影响.测定了奶牛乳腺上皮细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)质量分数、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果表明中药组奶牛乳腺上皮细胞SOD、GSH-Px和CAT活性高于或显著高于正常对照组(P>0.05,P<0.05,P<0.01),MDA、NO、NOS质量分数低于或显著低于正常对照组(P>0.05,P<0.05,P<0.01).中药能减少脂质过氧化产物MDA的生成,同时提高奶牛抗氧化酶活性,增强了奶牛的抗氧化能力.  相似文献   

20.
为了探讨角鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SQLE)基因对体外培养奶牛乳腺细胞凋亡及增殖的影响,本研究用RNAi技术敲低奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因;用实时荧光定量PCR方法检测奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因及凋亡和周期相关基因的表达;用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用周期和凋亡检测试剂盒筛选细胞,用流式细胞术准确计数处于不同周期的细胞数和凋亡细胞数。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞转染siRNA后,SQLE基因相对表达量显著下降(P<0.05),细胞增殖受到极显著抑制(P<0.01);G1期细胞数量显著下降(P<0.05),G2期细胞数量没有显著性改变,S期细胞数量显著上升(P<0.05);肿瘤坏死因子超家族成员6(又称Fas或CD5)的相对表达量显著上升(P<0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(cyclin dependent kinase inhibitor 1B,P27)相对表达量显著上升(P<0.05),而细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤因子2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,Bax)显著下降(P<0.05)。综上所述,敲低SQLE基因通过调节相关基因的表达抑制乳腺上皮细胞的增殖。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号