苜蓿多糖和黄芪多糖对肉仔鸡淋巴细胞增殖的影响

本试验旨在研究苜蓿多糖(water soluble alfalfa polysaccharide,WSAP)和黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)2种不同植物来源的多糖对肉仔鸡外周血液和脾脏中淋巴细胞增殖的影响.将4种不同浓度的WSAP和APS分别加入到鸡血液淋巴细胞和脾脏淋巴细胞中,培养48 h后用MTT法测定T、B淋巴细胞增殖的变化.结果表明:WSAP、APS在一定浓度下能显著促进肉仔鸡血液和脾脏中淋巴细胞的增殖,其中WSAP以20 μg/mL,APS以100 μg/mL效果最好.此外,APS对肉仔鸡淋巴细胞增殖的效果要好于WSAP,但APS的有效添加量比WSAP多.由此表明WSAP、APS促进淋巴细胞增殖可能是其发挥免疫作用的机制之一,且不同植物来源的多糖免疫效果不同.     

马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞GSH和GSSG水平的影响

为观察马尾藻多糖(SP)对鸡脾脏淋巴细胞内氧化还原状态的影响,无菌分离鸡脾脏淋巴细胞,采用终浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的马尾藻多糖分别刺激培养鸡脾脏淋巴细胞4、8、12、24h,测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平。结果表明,各浓度SP与鸡脾脏淋巴细胞共同培养4、8、12h均能不同程度地升高细胞内GSH水平,降低鸡脾脏淋巴细胞内GSSG水平,升高鸡脾脏淋巴细胞内GSH/GSSG比值,与空白对照组相比差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。说明SP可以通过调节鸡脾脏淋巴细胞内GSH和GSSG的水平来调节细胞内的氧化还原状态,从而发挥其抗氧化作用。     

4种多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

将5种浓度的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。将3种浓度的APS、IRPS、ARPS和CYPS分别加入到培养的淋巴细胞中培养24 h时收集细胞培养上清液,测定一氧化氮含量和一氧化氮合酶的活力。结果表明,适宜浓度的4种多糖均能提高细胞培养液中一氧化氮的含量、一氧化氮合酶的活力和促进淋巴细胞增殖,且4种多糖效果相当,这可能是多糖提高细胞免疫功能的机理之一。     

紫锥菊多糖对鸡淋巴细胞体外增殖影响

为了评价紫锥菊多糖免疫增强效果,将4种浓度的紫锥菊多糖分别加入体外培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养44 h后,用MTT法测定淋巴细胞增殖变化。结果表明,4种浓度的紫锥菊多糖对鸡淋巴细胞均有促进增殖及协同的作用,其中在50-100μg/mL浓度范围内效果最为显著。     

黄芪多糖活性组分对鸡脾脏淋巴细胞功能的影响

探讨黄芪多糖不同活性组分对鸡脾脏淋巴细胞功能的影响。首先采用MTT法测定APSt和APS40、APS60、APS80、APS90黄芪多糖活性组分对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度,然后,分别用MTT法和ELISA法检测黄芪多糖活性组分对健康和免疫抑制鸡脾脏淋巴细胞增殖和分泌IL-2的影响。结果表明,各黄芪多糖活性组分均具有一定的促进淋巴细胞增殖和IL-2分泌的作用,且有一定的浓度依赖性,综合比较,各黄芪多糖活性组分对鸡脾脏淋巴细胞的作用顺序为:APS80APStAPS90APS60APS40。结论,APS80提高鸡脾脏淋巴细胞功能的作用最强,可作为进一步研制成免疫增强剂的候选药物。     

硫酸化酵母葡聚糖对鸡淋巴细胞的影响

为研究硫酸化酵母葡聚糖(SCG)对鸡细胞免疫的影响,将7种浓度SCG单独或与Con A、LPS加入到鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化;将5种浓度的SCG分别与Con A加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定IL-2和IFN-γ的含量。结果显示,SCG浓度在在250~2 000μg/m L时,SCG+Con A、SCG各剂量组随着多糖浓度的增加其A570值先增加后降低(P0.05);SCG+LPS各剂量组的A570随着多糖浓度的增加而降低,2 000μg/m L剂量组显著低于其他三组(P0.05);均具有显著的量效关系。SCG浓度在62.25~1 000μg/m L时,多糖组脾脏淋巴细胞体外培养上清液中IL-2与IFN-γ浓度,随着多糖浓度的增加其促进淋巴细胞分泌细胞因子的能力先增加后降低,具有明显量效关系;且均在250μg/m L时效果最好。结果表明,SCG在合适剂量能单独或协同Con A、LPS刺激鸡T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫。     

列当多糖对鸡淋巴细胞体外增殖能力的影响

为探讨列当多糖(OSP)对鸡脾脏淋巴细胞和外周血淋巴细胞增殖作用的影响,试验用水提醇沉法提取列当多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对列当多糖进行检测,采用MTT法测定列当多糖的安全浓度及对鸡淋巴细胞的增殖能力。结果显示:试验所提取的列当多糖均具有多糖的特征峰为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,OSP30和OSP80的增殖作用强且对T淋巴细胞增殖的浓度范围最大。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,OSP30和OSP80的增殖作用强且对B淋巴细胞增殖的浓度范围最大。结果表明,OSP30及OSP80对脾脏淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强。     

胸腺素α_1对鸡脾脏淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

为进一步阐明胸腺素α1(Tα1)的作用机制,采用MTT比色法、RT-PCR相对半定量法和RIA法研究了不同浓度的Tα1对离体培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2基因表达及其分泌的影响。结果表明,10μg/mL和1μg/mL Tα1处理鸡脾脏淋巴细胞能显著提高由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化率(P<0.05),显著提高鸡脾脏淋巴细胞IL-2基因表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量(P<0.05),且以10μg/mL浓度的效果最佳。0.1μg/mL的Tα1对脾脏淋巴细胞增殖转化和IL-2基因表达与分泌无显著作用(P>0.05)。提示,Tα1对鸡免疫功能的调节同其剂量有关,并可能在基因转录水平上调节IL-2的分泌。     

两种刺激剂对鸡单个核细胞增殖的作用

为确定刀豆蛋白A(Con A)和植物血凝素(PHA)在体外刺激鸡外周血单个核细胞(c PBMC)增殖的作用。采用密度梯度离心法从20日龄左右健康鸡的外周血中分离PBMC,分别用不同浓度的刺激剂Con A和PHA刺激不同浓度的PBMC,经24、48、72或96 h培养后,用MTS法检测鸡PBMC增殖的情况。结果显示:刺激剂浓度3.125μg/m L,培养72 h对浓度为1×106个/m L的鸡淋巴细胞增殖显著或明显强于其他条件,而PHA和Con A之间无显著差异(P0.05)。本试验获得了体外刺激c PBMC的最佳培养条件。     

淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的调节作用研究

为研究淫羊藿多糖(EPS)体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定淫羊藿多糖活性及对鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用。根据活性检测结果,选择用50%的乙醇醇沉的淫羊藿多糖进行安全浓度试验;根据安全浓度检测结果,选择2 500.00μg/mL、1 250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL 5个浓度,用MTT法测定淫羊藿多糖单独和协同LPS刺激对鸡脾脏淋巴细胞增殖率的影响。结果显示:不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,但乙醇浓度为50%醇沉的淫羊藿多糖活性最佳。淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度为2 500.00μg/mL。淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏淋巴细胞,均显示出不同程度增强脾脏淋巴细胞的活性,且均在浓度为1 250.00μg/mL时显示出较强的体外增强鸡脾脏淋巴细胞增殖的能力,说明淫羊藿多糖在安全浓度范围内可刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,从而实现调节免疫功能的作用。     

复方中药多糖对体外脾淋巴细胞增殖、NO生成和蛋白激酶G的影响

将5种不同浓度复方中药多糖(CPPS)加入到小鼠脾淋巴细胞中培养48 h,观察CPPS对小鼠脾淋巴细胞增殖、对体外培养的脾淋巴细胞中NO的生成和蛋白激酶G(PKG)活性的影响。结果显示,CPPS能显著提高淋巴细胞增殖,显著升高细胞培养液中NO的生成,细胞内PKG活性明显提高,且CPPS、NO和PKG与淋巴细胞增殖有一定相关性。CPPS可能通过NO介导信号通路,引起第二信使环化鸟苷酸(cGMP)生成,从而提高PKG活性促进淋巴细胞的增殖,发挥其免疫调节作用。     

胸腺素α_1调节鸡脾脏淋巴细胞免疫功能的信号转导途径

在无菌条件下,从健康墟岗黄鸡体内取出脾脏,分离淋巴细胞并进行体外培养。在细胞培养液中分别加入终浓度为0.01 mol/L咖啡碱、0.05 mol/L EDTA、0.01 mol/L氯化锂和5μg/mL甲派氟丙嗪,然后用10μg/mL胸腺素α1(Tα1)处理,再加入20μg/mL ConA,研究Ca2+-肌醇磷脂-蛋白激酶系统和cAMP-肌醇磷脂-蛋白激酶系统在Tα1调节淋巴细胞免疫功能中的作用,揭示Tα1调节免疫功能的信号转导机制。结果表明,咖啡碱处理能显著增强Tα1促进脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2的基因表达,提高培养液中IL-2浓度(P<0.05);而EDTA处理能显著抑制Tα1促进脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2的基因表达与分泌的作用(P<0.05);氯化锂和甲派氟丙嗪对Tα1的免疫调节作用的影响不明显(P>0.05)。结果提示,Tα1调节鸡脾脏淋巴细胞的增殖和IL-2的基因表达与分泌的作用,主要通过cAMP、Ca2+和PKC等第二信使的介导。     

阿魏根粗多糖对鸡脾脏和外周血淋巴细胞体外增殖作用的影响

为研究新疆阿魏多糖（FSP）对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖作用的影响。本研究用水提醇沉法得到阿魏总多糖（FSP_t）和3种分级多糖（FSP₃₀、FSP₅₀、FSP₇₀）,并通过苯酚-硫酸法和红外光谱对FSP进行检测。通过MTT法测定各级FSP的安全浓度及其对鸡外周血T淋巴细胞及脾脏B淋巴细胞的增殖能力。结果显示,提取的FSP均具有多糖的特征峰,为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同PHA刺激T淋巴细胞增殖,其中FSP_t的增殖作用较强。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同LPS刺激B淋巴细胞增殖,其中FSP₇₀和FSP_t增殖作用较强。综上所述,各级FSP中,FSP_t对脾脏B淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强,可以作为进一步研究的材料。     

Effects of Polysaccharides from Ferula sinkiangensis Root on Proliferation of Chicken Peripheral Lymphocyte and Spleen Lymphocyte in vitro

To investigate the effects of Ferula sinkiangensis polysaccharides (FSP) on cell proliferation of chicken splenic lymphocytes and peripheral lymphocyte in vitro. By the method of water extract-alcohol precipitation,total Ferula sinkiangensis polysaccharide (FSP_t) and 30%,50%,70% gradient alcohol precipitation of polysaccharides (FSP₃₀,FSP₅₀ and FSP₇₀) were extracted, and detected by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method. The safe concentration of all classifications of polysaccharide were detected and the effect of FSP on lymphocyte proliferation of chicken spleen and peripheral blood were measured by MTT method. The results showed that the absorption peak of FSP were conformed to belong by polysaccharide compounds. Peripheral blood T lymphocyte proliferation test indicated that FSP_t,FSP₃₀ and FSP₇₀ alone or cooperated with PHA could stimulate T lymphocyte proliferation under a certain concentration,and FSP_t showed a better proliferation effect. Spleen B lymphocyte proliferation test showed that FSP_t,FSP₃₀ and FSP₇₀ alone or cooperated with LPS could stimulate B lymphocyte proliferation under a certain concentration,FSP_t and FSP₇₀ showed a better proliferation effect. In conclusion,FSP showed the strong effect on lymphocyte proliferation of chicken spleen and peripheral blood in vitro,and that would be the materials for further research.     

白花蛇舌草提取物对肉鸡淋巴细胞增殖功能的影响

为了研究中药白花蛇舌草对肉鸡免疫力的调节作用,探讨其作用机理。在体外培养的肉鸡血液和脾脏淋巴细胞中加入不同浓度的白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮等成分,观测其对淋巴细胞增殖功能的影响。白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮分别在浓度为4 000 mg/L、1 000 mg/L~2 000 mg/L和5 mg/L~100 mg/L时对鸡血液淋巴细胞有明显的刺激增殖作用(P0.05),在浓度为200 mg/L~800 mg/L、10 mg/L~1 600 mg/L和25 mg/L~50 mg/L时对鸡脾脏淋巴细胞的增殖具有明显的刺激作用(P0.05)。研究结果说明白花蛇舌草水煎剂、粗多糖和总黄酮对体外培养的肉鸡淋巴细胞的增殖均有促进作用。     

The effect of transportation on the immune status of Bos indicus steers

This study investigated the effect of 72 h of road transport on the immune status of Bos indicus steers (n = 10; age = 15 to 18 mo). Total and differential leukocyte numbers and lymphocyte function were determined at 2 d before transport (-48 h), immediately after 72 h of transport (72 h), and 6 d after transport (216 h). Phytohemagglutinin (PHA)-stimulated lymphocyte proliferation, interferon-gamma production, and tetanus-toxoid specific antibody levels were determined. Total leukocyte and eosinophil numbers showed a transient decrease at 72 h (immediately after transport; P < 0.05) and returned to baseline values by 6 d after transport. Lymphocyte numbers and antibody titers were unaffected by transportation. The PHA-stimulated lymphocyte proliferation decreased (P < 0.05) at 72 h and returned to baseline levels 6 d after transport. This study demonstrated that transportation of mature Bos indicus steers caused transient decreases in leukocyte numbers and lymphocyte function, although all measures recovered by 6 d after transport. Therefore, Bos indicus cattle may be vulnerable to infection during this period.     

复方鸡脾组织提取液及紫术散对鸡新城疫疫苗的增益效应

复方鸡脾组织提取液和中药紫术散可使鸡新城疫(ND)疫苗诱导的鸡血清抗体效价显著上升,维持时间延长,并能提高鸡外周血B淋巴细胞EAC花环形成率、T淋巴细胞ANAE阳性率和大颗粒淋巴细胞(LGL)的百分率.由此认为,这两种制剂对鸡ND苗诱导的体液免疫和细胞免疫都具有促进效应,可作为免疫增效剂.     

Changes in water‐holding capacity and textural properties of chicken gizzard stored at 4°C

The water‐holding capacity (WHC), and toughness (shear force) of chicken gizzard were evaluated during postmortem storage for 4.5, 7, 12, 24, 48, 72 and 96 h at 4°C. Degradation of the cytoskeletal proteins desmin, talin and vinculin were monitored by sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting during the same designated storage period. The WHC of the gizzards decreased significantly from 12 h to 72 h of storage, but by 96 h the WHC was restored to the level measured after storage for 12 h. The shear force value of the gizzards increased rapidly until 12 h and then decreased until 24 h, with a further slight decrease by 48 h. Degradation products of desmin, talin and vinculin appeared at 96 h, 12 h and 48 h postmortem, respectively. The intensity of immunolabeling for desmin, talin and vinculin after storage for 96 h decreased to 51%, 25% and 52% of the initial value. The appearance of desmin degradation products was accompanied by an increase in WHC. This suggests that the postmortem degradation of desmin is involved in the increase of WHC in chicken gizzard during storage at 4°C, and talin and vinculin may be involved.     

鸡贮精腺上皮细胞的分离及原代培养

试验旨在探讨稳定可靠的贮精腺上皮细胞分离及原代培养方法,为研究鸡贮精机理提供细胞模型。以鸡输卵管的子宫阴道交接部组织样为材料,采用酶消化法和组织块培养法分离培养母鸡贮精腺上皮细胞,观察母鸡贮精腺上皮细胞的培养情况,比较不同细胞培养方法获得贮精腺上皮细胞的生长情况。结果表明,用胶原酶或胰酶单独消化母鸡子宫阴道交接部组织,经100目过滤后获得的贮精腺上皮细胞24 h后可贴壁,但48～72 h后细胞死亡;用胶原酶Ⅺ(0.01 g/mL)与胰酶(0.25%)先后消化母鸡子宫阴道交接部组织后再经100目过滤获得的贮精腺上皮细胞贴壁性良好,24～48 h细胞出现明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,开始死亡;用组织块培养法7 d可获得鸡贮精腺上皮原代细胞,该细胞可传2～3代;用组织块培养法获得的细胞进行免疫组化试验,发现细胞表达贮精腺差异表达基因编码的NXPH1蛋白,该蛋白在培养细胞内的表达符合其分泌蛋白特性,表明组织块培养法所获细胞可用于后续研究。综上,用组织块培养法获得的鸡贮精腺上皮细胞可为研究母鸡贮精腺机制提供细胞模型。     

荧光定量PCR方法检测IBV病毒在CEK细胞中的动态变化

为揭示鸡传染性支气管炎病毒（IBV）在鸡胚肾细胞（CEK）中复制增殖的动态变化规律,通过实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测IBV病毒感染CEK3、6、12、24、36、48、72h后病毒增殖量的动态变化。结果显示,随着时间增加,IBV病毒增殖出现规律性变化,3～12h时IBV增殖不明显,36h时IBV开始大量复制,48h时达到高峰,但72h后有所下降。试验表明IBV在细胞内复制增殖的最佳时间在接毒后48h,其复制增殖情况与细胞状态负相关。