PCR和斑点杂交检测鸡传染性贫血病毒

通过聚合酶链反应（ｐｃＲ）扩增鸡传染性贫血病毒（ｃＡＶ）ＤＮＡ特定片段，将此ｐｃＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记后作为探针进行斑点杂交，以此检测ＣＡＶ并作流行病学调查。对从江苏省不同地市随机采集的２月龄左右不同疾病的病鸡ＤＮＡ样品进行检测，在被检的５２个不同鸡群来源的病料中，有３６个鸡群来源的病料ＤＮＡ显示ＣＡＶ阳性（群阳性率为６９．２％）；备组织中ＣＡＶＤＮＡ含量有所差异，依次为胸腺＞脾、骨髓、肝＞肾、法氏囊、脑。用ＰＣＲ检测得到的阳性鸡的组织病料感染ＳＰＦ鸡，在感染后第２４天检查，出现贫血症状。初步调查表明，在江苏一些地区ＣＡＶ感染已相当普遍，但它与发病的关系还有待于进一步研究。     

病鸡血清中鸡传染性贫血病病毒DNA的PCR扩增及抗体的ELISA检测

根据鸡传染性贫血病病毒（ＣＡＶ）的基因结构，设计并合成一对限制扩增长度为０．６８ｋｂ的ＰＣＲ引物．直接对临床可疑病鸡的血清进行靶ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增．在不同地区的３批样品中，有２批扩增出一二分子量接近０．７ｋｂ的单一特异性ＤＮＡ片段．用限制酶ＢｇｌⅡ消化ＰＣＲ产物．可获得分子量分别为０．３３ｋｂ和０．３５ｋｂ两个ＤＮＡ片段，其酶切位点与靶ＤＮＡ的相吻合．将ＰＣＲ扩增为阳性的病料接种６日龄ＳＰＦ鸡胚，并取其１８日龄胚肝和由接种鸡肛孵出的雏鸡的血清重新进行ＰＣＲ扩增，结果均为阳性，而同期对照胚肝及雏鸡血清为阴性．此外还用胚胎时接种过病料的雏鸡肝、脾和胸腺等组织抽提液作抗原，建立了检测ＣＡＶ血清抗体的ＥＬＩＳＡ方法．研究结果提示，用ＰＣＲ直接对病鸡血清中ＣＡＶＤＮＡ的扩增以及ＣＡＶ抗体的ＥＬＩＳＡ检测是快速和特异的．它为鸡传染性贫血病（ＣＩＡ）的流行病学调查、实验室诊断、ＣＡＶ毒株的分离和鉴定提供了必要的检测手段．     

狄高辛标记DNA探针对鸡马立克氏病的流行病学研究

用狄高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒特异性ＤＮＡ探针，对自然感染鸡羽囊、人工感染鸡羽囊和脏器、同居感染鸡羽囊进行了检测。结果表明，自然感染鸡，其羽囊最早出现阳性的日龄为４２日龄，随日龄增大，羽囊阳性检出率升高，１５０日龄达最高峰（２６．７％）。以后则阳性率显著下降（６月龄为０．４８％，１年以上为０．２４％）。鸡人工感染马立克氏病国际标准强毒（ＭＤＶ－ＧＡ强毒）后３ｄ，就可从５只鸡中３只的心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃等脏器检出Ⅰ型ＭＤＶ－ＤＮＡ；２５ｄ，５只鸡的脏器均能检出ＭＤＶ－ＤＮＡ；同时，感染后１０ｄ，就可从羽囊检出ＭＤＶ－ＤＮＡ，１５ｄ羽囊检出阳性率达１００％。同居感染鸡从羽囊排毒的最早时间为同居后３１ｄ，即接触强毒２１ｄ后开始持续排毒，直至死亡。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎（ＩＢ）可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验、血凝（ＨＡ）试验、气管环培养（ＴＯＣ）感染试验、单克隆抗体（Ｍａｂ）ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＳ病毒（ＩＢＶ）．在用其中９份接种８～９周龄ＳＰＰ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起病死亡率（６０～８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制（ＨＩ）试验，结果均为阳性．     

鸡传染性贫血病毒感染胸腺集落刺激因子对骨髓粒单系祖细胞增殖功能的影响

本文研究了鸡传染性贫血病毒感染鸡胸腺ＣＳＦ对正常鸡骨髓粒单系祖细胞（ＣＦＵ—ＧＭ）增殖功能的影响．结果表明，雏鸡感染ＣＩＡＶ后１４天胸腺ＣＳＦ对ＣＦＵ—ＧＭ刺激作用与对照鸡比较未见明显异常．感染后２１天，刺激作用较对照鸡明显增强（ｐ＜０．０１）；感染２８天以后，其刺激作用达正常成水平．结果证明，ＣＩＡＶ感染引起的骨髓造血机能障碍与胸腺ＣＳＦ活性无关．     

一日龄雏鸡感染鸡盆血病病毒及鸡呼肠病毒的协同作用

１日龄ＳＰＦ来航鸡经口双重感染鸡贫血病病毒（ＣＡＶ）Ｃｕｘ－１株及鸡呼肠病毒（ＲＥＯＶ）Ｓ１１３３或Ｕｃｈｉｄａ株。于接种后第１４天，检查血细胞压积（ＰＣＶ）、称体重、观察骨髓、胸腺及法氏囊病变。结果，双重感染ＣＡＶ及Ｓ１１３３株ＲＥＯＶ的雏鸡与感染其中之一病毒的雏鸡相比，其体重增重少，病变重，而且比仅感染ＣＡＶ的雏鸡在平均ＰＣＶ上也明显低。双重感染ＣＡＶ及Ｕｃｈｉｄａ株ＲＥＯＶ的雏鸡，不加重发病     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

鸡传染性贫血病的综合防制

鸡传染性贫血病（Ｃｈｉｃｋｅｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ａｎｅｍｉａ，ＣＩＡ）是由鸡贫血病毒（Ｃｈｉｃｋｅｎ Ａｎｅｍｉａ Ｖｉｒｕｓ，ＣＡＶ）引起的，其特征性病变为骨髓黄化，胸腺萎缩，出现造血机能障碍和免疫机能损害［１，２］。自 １９７９年从日本发现和分离到 ＣＡＶ以来［３］，德国、英国、美国、澳大利亚、荷兰和以色列都已先后报道了本病的存在。对ＣＡＶ感染的流行病学调查已表明，世界各地鸡群中，对ＣＡＶ的感染率都相当高，甚至在曾经认为是ＳＰＦ鸡群中也有４０％－５０％表现出ＣＡＶ抗体阳性。由此可见商品雏鸡中…     

PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验对鸡传染性贫血病临床诊断的应用比较

应用能特异性扩增出鸡传染性贫血病毒（ Ｃ Ａ Ｖ） ０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ 的已知引物，对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ感染的 １５～３０ 日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行了 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增。结果，在被检的 ２０ 份样品中，有 ６ 份为 Ｐ Ｃ Ｒ 阳性，阳性率 ３０％ 。利用地高辛标记的 ０８５ ｋ ｂ 的 Ｃ Ａ Ｖ 核酸探针对相同样品进行斑点杂交，结果与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验（ Ｉ Ｉ Ｆ Ａ）发现，有 ７ 份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性，与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为 ７７％ 。初步结果表明，江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染， Ｉ Ｉ Ｆ Ａ 与 Ｐ Ｃ Ｒ 的结果有差异     

用地高辛探针对江苏省鸡传染性贫血病进行流行病学调查

用地高辛标记的核酸（ＤＮＡ）探针对的扬州、江都、连云港、苏州、无锡等５蛭９个养鸡场（户）随机取样１０６份（分别为１２￣６０日龄的肉鸡、蛋鸡和草鸡,采集胸腺、法氏囊和脾脏组织,抽提ＤＮＡ）进行检测ＣＡＶ感染情况,ＣＡＶ阳性鸡２２份阳必率为２０．７％,各鸡场阳性率人５￣６０％不等。结果表明,在处的一些地区鸡群中ＣＡＶ的感染已非常普遍,有的地区甚至十分严重,控制该病的发生已刻不容缓。     

用狄高辛标记DNA探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒

用狄高辛标记ＤＮＡ探针从人工感染鸡脏器检出Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ），检出结果表明，人工感染ＧＡ强毒第三天就可从５只鸡中的三只心、肝、肺、肾、法氏囊、胸腺、肌胃检出Ⅰ型ＭＤＶ，第２５天５只鸡的脏器均能检出Ⅰ型ＭＤＶ。同时从感染第１０天就可从羽囊检出Ⅰ型ＭＤＶ，到第１５天羽囊检出阳性率１００％。     

鸡传染性贫血病对雏鸡新城疫疫苗免疫的抑制机理──Ⅰ．细胞因子的变化

１日龄健康ＡＡ雏鸡感染ＣＩＡＶ后８天进行ＮＤ疫苗免疫，免疫后２９天用ｖＮＤＶ攻击，于免疫后７、１４、２８和攻毒后１０天取材检测．给果，感染ＣＩＡＶ雏鸡经ＮＤ免疫后７天，胸腺Ｔ细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）诱生活性比未感染的免疫对照鸡明显降低（Ｐ＜０．０１）；脾脏Ｔ细胞ＩＬ－２诱生活性于７和２８天显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）．感染免疫鸡免疫后１４天脾脏淋巴细胞干扰素（ＩＦＮ）诱生活性明显降低（Ｐ＜０．０１）．结果表明感染ＣＩＡＶ鸡对ＮＤ疫苗免疫的分子免疫调节作用明显减弱，ＨＩ抗体效价于免疫后７～２８日明显降低（Ｐ＜０．０５）。ＮＤ强毒攻击后，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡的免疫保护率为６０％％，明显低于免疫对照鸡（１００％）．     

鸡贫血病毒引起免疫抑制和贫血的机理

鸡贫血病毒（ＣＡＶ）可引起鸡临床和亚临床性疾病，是一种世界性的重要禽病原体。在幼龄雏鸡，由于ＣＡＶ引起骨髓中类成红细胞的破坏而引起暂时的严重贫血以及皮质胸腺的衰竭而引起的免疫缺陷，从而引发其它免疫和疫苗免疫失败，胸腺细胞和类成红细胞衰竭通过ＣＡＶ诱发的凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）而发生，ＣＡＶ编码蛋白凋亡素（ａｐｏｐｔｉｎ）是这种现象的主要诱导物。     

鸡传染性贫血病对雏鸡新城疫疫苗免疫的抑制机理──Ⅱ．T、B细胞功能变化

１日龄健康雏鸡感染ＣＩＡＶ后８天进行ＮＤ疫苗免疫和免疫后２９天用ｖＮＤＶ攻击，于免疫后７、１４、２８天和攻毒后１０天取材检测。结果，感染ＣＩＡＶ雏鸡ＮＤ免疫后，胸腺和脾脏Ｔ细胞增殖反应分别于７天和７～１４天比未感染免疫对照鸡明显减弱（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）法氏囊和脾脏Ｂ细胞增殖反应均于７～１４天明显减弱（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。ｖＮＤＶ攻击后，脾脏和胸腺Ｔ细胞增殖反应均比未感染ＣＩＡＶ的免疫对照鸡显著降低（Ｐ＜０．０１．Ｐ＜０．０５）。上述结果表明，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡中枢和外周免疫器官的细胞免疫应答和体液免疫应答功能均明显降低，并与其分子免疫调节功能降低密切相关。     

鸡传染性贫血病毒感染胸腺集落刺激因子对骨髓粒单系祖细胞增殖功…

本文研究了鸡传染性盆血病毒感染鸡胸腺ＣＳＦ对正常鸡骨髓粒单系祖细胞增殖功能的影响。结果表明，雏鸡感染ＣＩＡＶ后１４天胸腺ＣＳＦ对ＣＦＵ－ＧＭ刺激作用与对照鸡比较未见明显异常。感染后２１天，刺激作用较对照鸡明显增强；感染２８天以后，其刺激作用达正常鸡水平。结果证明，ＣＩＡＶ感染引起的骨髓造血机能障碍与胸腺ＣＳＦ活性无关。     

带母源抗体的青年鸡皮下接种传染性法氏囊病活疫苗的效果

在１日龄和３周龄鸡的脾粘着（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被正常鸡血清（ＮＣＳ）中和过的传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）的感染性，有３周龄鸡的（ＣＳＡ）细胞中，检测到了被母源抗体（ＭＮ－Ａｂ）中和过的ＩＢＤＶ的感染性。此外，发现１日龄鸡制备的ＣＳＡ细胞含有补体受体（ＣＲ），１周龄鸡制备的ＣＳＡ细胞既含有ＣＲ又有Ｆｃ受体（ＦｃＲ）。然而，即使ＣＳＡ细胞上的ＦｃＲ被热凝集ＮＣＳ（５６℃，６０分钟）阻断的情况下，     

感染鸡传染性贫血病毒雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白含量的动态变化

鸡传染性贫血病（ Ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｎｅｍ ｉａ， Ｃ Ｉ Ａ）是由鸡传染性贫血病毒 （ Ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｎｅｉｍ ｉａ ｖｉｒｕｓ， Ｃ Ｉ Ａ Ｖ）引起的一种以再生障碍性贫血和免疫抑制为主要特征的传染病。该病自１９７９ 年首次在日本发现以来，世界许多国家和地区有该病发生和流行的报道；我国１９９２ 年也分离到该病原。 Ｃ Ｉ Ａ Ｖ 感染雏鸡后主要侵害骨髓造血组织和胸腺、法氏囊、脾脏等淋巴组织，引起造血功能和免疫功能障碍，致使雏鸡容易发生条件性感染如化脓性皮炎、大肠杆菌病、肺曲霉菌病等，从而造成严重的经济损失。该病已引起国际养禽业的高度重视，被列为禽病研究的前沿课题。 Ｃ Ｉ Ａ Ｖ 感染对禽病疫苗免疫的影响也有少量报道，有研究发现，实验感染 Ｃ Ｉ Ａ Ｖ 可影响雏鸡对马立克氏病（ Ｍ Ｄ）、禽痘（ Ｆ Ｐ）及传染性喉气管炎（ Ｉ Ｌ Ｔ）疫苗接种的免疫保护效应。至于 Ｃ Ｉ Ａ Ｖ 感染对 Ｎ Ｄ疫苗免疫的影响，目前尚不完全清楚， Ｎ Ｄ仍然是当前严重危害养禽业的重要疫病之一，对其防制主要靠疫苗免疫，故进一步研究 Ｃ Ｉ Ａ Ｖ 感染对 Ｎ Ｄ 疫苗免疫的影响及其机理具有重要现实意义。据此，本试验对１日龄感染 Ｃ     

鸡贫血病病毒感染雏鸡细胞周期的研究

用流式细胞仪对雏鸡感染鸡贫血病毒后不同时期胸腺和骨髓细胞的细胞周期进行了分析，结果显示感染鸡骨髓和胸腺发生了Ｇ１阻滞，这表明ＤＮＡ合成抑制，Ｇ２／Ｍ期细胞数量明显减少，这说明增殖性细胞在减少。本实验结果提示增殖性细胞减少是鸡传染性贫血病（ＣＩＡ）中胸腺淋巴细胞和骨髓造血细胞大量减少的重要原因之一，这为阐明ＣＡＶ的发病机理提供了新资料