牛链球菌的分离鉴定及生物信息学分析

本研究对某动物医院的一头病牛粪样进行细菌分离鉴定,PCR扩增细菌16S rDNA基因并测序,构建进化树,对该菌进行药敏试验分析及生长曲线的测定。结果显示,该菌在血琼脂、巧克力琼脂、LB琼脂等培养基上均能长出光滑凸起,边缘圆润,大小各异,颜色不同的菌落,而在MRS琼脂、高盐甘露醇琼脂上却不生长;生化鉴定结果显示,乳糖、麦芽糖、甘露醇等均为阴性,葡萄糖、西蒙氏柠檬酸盐、尿素均为阳性,上述结果初步鉴定此菌为牛链球菌;进化树的构建进一步证明了分离菌属于牛链球菌,其与牛链球菌RD09的同源性为99%;药敏试验结果显示,牛链球菌对强力霉素、卡那霉素极敏感,对红霉素高度敏感,对链霉素、新生霉素、复方新诺明、头孢曲松、庆大霉素均敏感,对氯霉素、头孢拉定、阿莫西林均耐药;从牛链球菌生长曲线可看出2~23 h是牛链球菌的高度繁殖期,23~28 h是稳定期,28 h以后开始衰退。本试验结果为进一步研究牛链球菌奠定基础。     

某奶牛场奶牛子宫内膜炎致病菌的分离鉴定

采集10头已确诊临床型奶牛子宫内膜炎患牛的子宫内容物,通过需氧和厌氧培养,根据细菌形态学及细菌生化特性进行分离鉴定。结果分离鉴定出3种27株细菌,分别为溶血性链球菌、非溶血性链球菌和大肠埃希菌。链球菌感染率为100%,溶血性链球菌感染率为70%,非溶血性链球菌感染率为30%。链球菌中,缺陷乏养球菌、毗邻乏养球菌和粪肠球菌所占比例较大。10份样品均分离到细菌,感染率为100%,其中绝大部分为多菌种混合感染。     

绵羊瘤胃内纤维降解菌的分离鉴定

试验从蒙古绵羊瘤胃中分离出3株厌氧细菌,通过细菌纤维降解性试验发现3株菌皆具有纤维降解能力;通过革兰氏染色试验发现3株菌均为革兰氏阳性菌;通过生理生化试验和16S rDNA基因序列测定及同源性分析,最终确定分离的3株菌分别为牛链球菌（Streptococcus bovis）、婴儿链球菌（Streptococcus infantarius）和粪肠球菌（Enterococcus faecium）,编号为E1、E2和E3。     

奶水牛牛分枝杆菌的分离与鉴定

从患疑似结核病的广西奶水牛群中进行牛分枝杆菌的分离和鉴定。共收集了238份临床样品(鼻黏液及牛奶),病料经1.25 mol/mL NaOH溶液预处理后,接种罗氏培养基进行细菌分离。分离菌经进一步纯化后进行抗酸性染色并镜检,镜检后判为阳性的细菌再接种到鉴别培养基上进行鉴别培养,同时,应用PCR方法对镜检为阳性的细菌进行进一步的鉴别检验。结果收集的所有临床样品,经37℃培养后共获得细菌12株。这12株菌经抗酸性染色后镜检都为分枝杆菌阳性,进一步经鉴别培养基鉴定12株菌中有2株为牛分枝杆菌,其余均为非典型分枝杆菌。2株牛分枝杆菌经PCR方法鉴定得以确诊。     

广州地区奶牛子宫内膜炎病原菌检验

从４０头患子宫内膜炎奶牛的子宫阴道分泌物中,经细菌的分离鉴定,共分离出５２株细菌,其中链球菌１８株,大肠杆菌１３株,葡萄球菌１０株,变形杆菌和克雷伯氏菌各３株、棒状杆菌２株,绿脓杆菌１株及其它细菌２株。     

牦牛源牛链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

本研究旨在从腹泻牦牛粪便中分离鉴定牛链球菌,并分析其溶血性、对小鼠的致病性及对抗菌药物的敏感性。将川西北阿坝州45份腹泻牦牛粪便于血平板上划线,37℃、5% CO₂培养24 h分离细菌,经16S rRNA序列扩增测序和系统发育分析鉴定出14株牛链球菌,其中8株巴黎链球菌,6株解没食子酸链球菌巴氏亚种;9株呈α溶血,5株呈β溶血。分离鉴定的牦牛源巴黎链球菌和解没食子酸链球菌巴氏亚种能引起试验小鼠的轻度腹泻;药敏试验结果显示分离菌株对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、乙酰螺旋霉素、环丙沙星、利福平、替考拉宁、氨苄西林和庆大霉素共9种抗生素高度敏感,对链霉素、卡那霉素、林可霉素、红霉素、四环素和克林霉素耐药率较高。本研究阐明了牦牛源链球菌的部分生物学特性,为该病的防控奠定了基础。     

呼和浩特地区牛羊布鲁菌流行株种及生物型鉴定

应用常规细菌学方法,对呼和浩特部分地区疑似布鲁菌病的牛、羊流产胎儿病料进行了布鲁菌分离,共分离到4株布鲁菌.进一步根据细菌形态、培养特性、生化特性以及平板凝集试验等对分离到的细菌进行种型鉴定.结果表明,其中3株为羊种布鲁菌生物3型,1株为牛种布鲁菌生物3型.本研究结果为内蒙古地区布鲁菌病的防控奠定了病原学基础.     

广西猪源链球菌分离株的分群鉴定

从广西南宁、玉林、来宾、柳州、钦州等9个市29个猪场的送检材料中,分离出95株猪链球菌.使用链球菌乳胶凝集标准诊断试剂盒(有兰氏A-G群)对其中56株典型链球菌进行了培养特性、生化试验和血清分群鉴定.结果有32株为D群链球菌,9株为C群链球菌,1株为F群链球菌,5株为G群链球菌,1株与C群和D群有交叉反应,2株与D群和G群有交叉反应,6株未能定群.小白鼠对56株分离菌的敏感性有所不同.本试验结果表明,广西地区猪链球菌病的病原已不是单一血清群,同一猪场存在着多种血清群的链球菌.这为猪链球菌病的防制提供重要依据.     

5株牛源肺炎链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定导致吉林省某肉牛场肉牛发病的致病菌,对分离菌进行形态特征、生化特性、分子生物学等鉴定,并对分离菌进行致病性和耐药性检测。结果表明:细菌分离培养共分离到5株病原菌,经分子生物学鉴定,5株病原菌均为牛肺炎链球菌,且均具有致病性;5株牛肺炎链球菌对阿米卡星、氟苯尼考、头孢噻肟敏感,对复方新诺明、泰乐菌素、青霉素钠、红霉素和头孢吡肟具有较强的耐药性,对环丙沙星、氯霉素、强力霉素和庆大霉素呈现不同程度的耐药现象。说明头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星可作为治疗牛链球菌病的首选药物。     

内蒙古某肉牛场呼吸道疾病病原的分离鉴定

2017年5月,内蒙古某肉牛场暴发呼吸道疾病,为了确诊该次疾病的病原,无菌采集牛鼻汁接种于鲜血琼脂培养基进行细菌的分离鉴定,同时对牛鼻汁中的病原进行PCR检测,并针对分离菌进行药物敏感性试验。根据细菌分离结果将该分离菌初步鉴定为链球菌;药敏结果显示,该分离菌对阿米卡星、壮观霉素、强力霉素和阿奇霉素高度敏感。PCR检测结果显示,病料中的牛呼吸道合胞体病毒和支原体PCR检测结果为阳性。由以上结果可以得出引起该肉牛场肉牛发病的病原为牛呼吸道合胞体病毒、支原体和链球菌。     

牛呼吸道疾病综合征病例的病原分析

本试验旨在查清广西某牛场1起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)病例的病原,指导牛场进行疾病防控。采取现场调查、临床症状与病理变化、病原分离鉴定等方法对病例病原进行分析,根据病原药敏试验结果进行治疗。从病例的肺脏组织中分离到1株支原体和1株革兰氏阴性致病杆菌。支原体分离株在PPLO固体培养基上可见典型的"煎蛋样"菌落,PCR扩增出牛支原体oppF基因特异性的448 bp目的片段,其oppF基因序列与美国分离的牛支原体国际标准株PG45的核苷酸序列同源性为98.4%。革兰氏阴性细菌分离株生化特性符合黏质沙雷氏菌特性,其16S rRNA基因PCR扩增出1 400 bp的目的片段,测序结果与GenBank上登录的黏质沙雷氏菌的核苷酸序列同源性达到99.0%,对小鼠具有致病性。牛支原体和黏质沙雷氏菌分离株均对壮观霉素、阿奇霉素、阿米卡星、庆大霉素和新霉素高度敏感,用高敏药物壮观霉素联合地塞米松等相关措施进行治疗,收到良好效果。结果表明,引起这次牛呼吸道疾病综合征的病原为牛支原体和黏质沙雷氏菌。     

牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了对某牛场患呼吸系统疾病的育肥牛进行病原的确证,采用生化及分子生物学鉴定法对患病牛鼻腔拭子和病死牛肺脏分离的病原菌进行分离鉴定并对其进行致病性检测,进一步采用微量肉汤稀释法和平皿二倍稀释法对病原菌进行药物敏感性检测,最后应用脉冲场凝胶电泳分型。结果表明,在1头健康牛鼻腔拭子和2头因患牛呼吸系统疾病而发生死亡的患牛肺脏共分离获得3株牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌,3株分离菌具有同一基因型,分离菌均对环丙沙星、恩诺沙星、磺胺氯氰钠、新诺明、克林霉素、替米考星等耐药,仅对四环素、氟苯尼考较敏感。引发该牛场呼吸系统疾病的病原为牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌,分离菌已对临床常用药物呈现不同程度耐药性。     

猫口腔炎的细菌分离鉴定

通过采样拭子采集患口腔炎的猫口腔黏膜、舌头、牙龈分泌物样本,分离到23株菌,经致病性试验证实有3种菌具有致病性。根据形态、生长特性和生化特性,11株被鉴定为葡萄球菌,9株被鉴定为链球菌,3株被鉴定为巴氏杆菌;从5只健康猫样本中分离到大肠杆菌5株。细菌分离结果表明,大肠杆菌为常在非致病菌,葡萄球菌、链球菌及巴氏杆菌为致病菌。药敏试验结果表明,分离的3种致病菌对头孢噻肟高度敏感。因此临床上治疗应首选头孢类抗生素。     

狐狸脑炎型链球菌的分离鉴定与药敏试验

本试验从乳山一特种养殖场神经症状发病狐狸脑膜分离分离到一株致病性细菌,经一系列临床观察、实验室解剖、细菌分离、鉴定、生化试验确诊为肺炎链球菌,经动物实验确定该链球菌有一定的致病性,经药敏试验使用药敏敏感药物治疗,最终控制住病情。由于链球菌是环境常在菌,且有许多不致病,在防控和治疗上常被忽视,特别是链球菌引起瘫痪症状时,常被诊断为缺钙耽误治疗而死亡,本实验室是从神经症状狐狸脑分离到的细菌,有一定的疾病诊断意义和临床指导意义。     

粪链球菌的分离与鉴定

为了研究牛子宫感染的预防措施,试验从天津某牛场牛蓄脓子宫中分离出1株致病菌,进行细菌培养、染色观察、生化试验及细菌耐药性分析和16S rRNA基因序列分析。结果表明:该病原菌为粪链球菌;该菌对青霉素、万古霉素、四环素等耐药,对环丙沙星、氨苄西林、头孢类抗生素等敏感。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,本试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸、耐碱、耐氧、生长温度、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株乳酸菌分别为嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、发酵乳杆菌(L.fermentum)和乳明串珠菌(L.holzapfelii),分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37~40℃均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率分别为80%、67%、53%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;L1抑菌效果最好,抑菌直径为18.3mm和16.4mm。结果表明,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

牛瘤胃液中链球菌的分离与鉴定

在牛瘤胃中,牛链球菌的数量和发酵类型直接影响瘤胃的正常生理活动,同时牛链球菌发酵产生的乳酸和其内存在的各种酶在实际的工业生产中具有重要的价值。本试验从新采集的牛瘤胃液中分离得到菌株,用微量生化反应管和16S rRNA技术分别对菌株的生化及遗传特性进行鉴定,结合革兰氏染色和形态学观察结果判定所分离的菌株即为牛链球菌,为更好地研究和改造该菌奠定了理论和试验基础。     

长春市某奶牛场乳腺炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

奶牛乳腺炎是制约奶牛养殖效益和奶品质的主要疾病之一，为了解当前长春市某大型集约化奶牛场奶牛乳腺炎病原菌流行和耐药情况，本试验对该场奶牛乳腺炎发病情况进行了调查，对采集的119份临床型乳腺炎乳样进行细菌分离鉴定并对分离鉴定的病原菌进行小鼠致病性试验和药敏试验。结果显示：该场奶牛乳腺炎发病率在4%左右，初产牛乳腺炎发病率明显高于经产牛，乳腺炎发病率还与胎次、年龄等因素相关。本试验共分离鉴定出木糖葡萄球菌49株(42.2%)、松鼠葡萄球菌39株(33.6%)、大肠杆菌15株(12.9%)、金黄色葡萄球菌5株(4.3%)、无乳链球菌3株(2.6%)、菠萝泛菌3株(2.6%)、产酸克雷伯菌1株(0.9%)和铜绿假单胞菌1株(0.9%);其中菠萝泛菌、无乳链球菌和铜绿假单胞菌对小鼠具有较强致病性。药敏试验结果显示，分离菌株的耐药性普遍存在，大肠杆菌和铜绿假单胞菌耐药种类最多。除无乳链球菌外，其他菌株均对庆大霉素或阿米卡星敏感，可作为该场奶牛乳腺炎治疗首选药物。本试验通过对该场乳腺炎调查、分离菌鉴定和耐药性分析，为该场乳腺炎的防治提供了参考依据。     

冀东地区奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

通过LMT法、乳汁pH检验法和体细胞直接计数等方法相结合,对冀东地区3个大型奶牛场、8个奶牛养殖户选取的1 021头奶牛进行隐性乳房炎流行病学调查与病菌分离鉴定。结果表明,隐性乳房炎发病率为60.63%(619/1021),乳房炎阳性乳样品中细菌分离率达88.21%(546/619)。从543头隐性乳房炎患牛的阳性乳区乳样中分得细菌共4类14种菌82株,其中葡萄球菌36株,占43.90%;链球菌33株,占40.24%;肠杆菌类8株,占9.76%;棒状杆菌5株,占6.10%。冀东地区奶牛隐性乳房炎主要病原菌为金黄色葡萄球菌和无乳链球菌。     

牛源荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

探明一起牛运输热的病原及生物学特性,本研究采集病死牛心血、肺脏,对其进行细菌分离、生化试验和PCR鉴定,并对分离株进行毒力基因检测、致病性研究。结果显示,该分离菌为革兰氏阴性菌,呈球状或短杆状、两端钝圆、两极浓染。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、木糖等碳水化合物,不发酵脲酶和吲哚,产生少量酸而不产气,符合溶血性曼氏杆菌的生化特性。PCR鉴定为荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,并完成了毒力基因的检测。结果表明,引起该批牛运输热的病原为携带毒力基因的荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,本研究结果为进一步研究溶血性曼氏杆菌的致病机制、防控措施等提供参考。