链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连结法定位肝脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),又名呕吐毒素,是目前全球谷物污染最严重的真菌毒素之一。在所有的易感动物中,以猪最为敏感。本研究选用10头健康阉公猪,随机分为2组,染毒组和对照组,染毒组经乳静脉注射DON,注射剂量为75μg/kg体重,对照组经乳静脉注射生理盐水。注射完成后开始计时30 min后放血宰杀,迅速取肝脏,采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接结(streptavidin-perosidase,SP)法定位肝组织中的DON。SP法定位结果显示,在染毒组肝门管区小叶间静脉的血管壁有DON的分布。本研究采用SP法定位DON在猪体内消化器官组织的分布情况,为毒素的残留研究提供依据。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对动物肝脏组织损伤的研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)污染饲料严重危害动物生产。肝脏是DON毒性作用的主要靶器官。目前对DON引起肝脏的病理研究缺少充分系统的综述。故本文从动物肝脏组织结构特点,DON引起肝脏的组织损伤及肝损伤的半定量评价体系及DON对肝脏组织损伤研究进展等方面进行综述。为DON引起肝脏的病理研究提供参考。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对动物肝脏毒性作用的分子机制研究进展

动物肝脏是脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)代谢和毒性的主要靶器官。本文就近10年关于DON对肝脏的氧化应激、对肝脏的炎症和对肝脏细胞凋亡影响等方面的研究进展,结合新近关于DON干扰核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1 (Nrf2/HO-1)和核因子-κB(NF-κB)参与氧化应激、炎症和细胞凋亡调节等研究进行分子机制阐述,期望可以推进DON对肝脏毒性作用的分子机制的深入研究,为畜禽生产中DON毒素的精准防控提供理论依据。     

琼胶寡糖缓解呕吐毒素诱导小鼠肝脏损伤的作用效果与机制北大核心CSCD

本研究旨在探究琼胶寡糖缓解呕吐毒素(DON)诱导小鼠肝脏损伤的作用效果与机制。选取32只7周龄、初始体重为(20.04±0.80)g的无特定病原体(SPF)级C57BL/6J雌性小鼠,随机分为4个组,每组8个重复,每个重复1只小鼠。对照组(CON组)和呕吐毒素组(DON组)小鼠每天灌胃200μL无菌生理盐水,琼胶寡糖组(AO组)和琼胶寡糖+呕吐毒素组(AO+DON组)小鼠每天灌胃200μL(200 mg/kg BW)琼胶寡糖,连续处理21 d;随后,DON组和AO+DON组小鼠每天灌胃100μL(4.8 mg/kg BW)DON,CON组和AO组小鼠每天灌胃100μL无菌生理盐水,连续处理7 d。试验期28 d。结果表明:1)与CON组和AO组相比,DON组和AO+DON组小鼠肝脏指数显著增加(P<0.05)。2)与CON组相比,DON组血清和肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著增加(P<0.05),肝脏白细胞介素-6(IL-6)和丙二醛(MDA)含量显著增加(P<0.05),总抗氧化能力(T-AOC)及过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物岐化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著减少(P<0.05)。与DON组相比,AO+DON组血清和肝脏IL-1β和TNF-α含量显著减少(P<0.05),肝脏IL-6和MDA含量显著减少(P<0.05),T-AOC及CAT、T-SOD和GSH-Px活性显著增加(P<0.05)。3)肝脏组织病理结果表明DON组肝细胞出明显的炎性浸润,排列呈现不规则结节撞,有特征性放射纤维状,然而AO+DON组肝脏呈现明显改善。F4/80免疫荧光染色结果表明与CON组相比,DON组肝脏巨噬细胞浸润显著增加(P<0.05);与DON组相比,AO+DON组肝脏巨噬细胞浸润显著降低(P<0.05)。4)与CON组相比,AO组肝脏谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量显著降低(P<0.05),而DON组肝脏AST、ALT活性和TG、TC含量显著增加(P<0.05)。与DON组相比,AO+DON组肝脏AST、ALT活性和TC含量显著降低(P<0.05)。5)与CON组相比,DON组肝脏IL-1β、TNF-α、IL-6、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。与DON组相比,AO+DON组肝脏IL-1β、TNF-α、IL-6、NLRP3、Caspase-3、LC3B的mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05)。综上所述,琼胶寡糖能够通过改善小鼠肝脏抗炎、抗氧化功能,调节免疫细胞因子分泌,抑制肝脏组织病理学损伤和炎性浸润,缓解DON诱导的小鼠肝脏损伤。     

褐藻寡糖对呕吐毒素诱导小鼠肝脏损伤的影响北大核心CSCD

本试验旨在探究褐藻寡糖(AOS)对呕吐毒素(DON)诱导小鼠肝脏损伤的影响。选取32只7周龄雌性C57BL/6J小鼠,适应1周后,随机分为4个组:基础饲粮组(CON组)、褐藻寡糖组(AOS组)、呕吐毒素组(DON组)、褐藻寡糖+呕吐毒素组(AOS+DON组),每组8只小鼠。试验共28 d,分为DON处理前和处理后;前21 d,AOS组和AOS+DON组小鼠每天灌胃200μL(200 mg/kg BW)AOS,CON组和DON组小鼠每天灌胃等体积无菌生理盐水;后7 d,DON组和AOS+DON组小鼠每天灌胃100μL(4.8 mg/kg BW)DON,CON和DON组小鼠每天灌胃等体积无菌生理盐水。结果表明:1)与CON组相比,AOS组的10和11周龄体重显著增加(P<0.05)。与CON组相比,DON组的12周龄体重显著降低(P<0.05),肝脏指数显著增加(P<0.05);与DON组相比,AOS+DON组的12周龄体重显著增加(P<0.05),肝脏指数显著降低(P<0.05)。2)与CON组相比,DON组的血清和肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著增加(P<0.05),血清白细胞介素-8(IL-8)含量显著增加(P<0.05);与DON组相比,AOS+DON组的血清和肝脏IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著降低(P<0.05),血清IL-8含量显著降低(P<0.05)。3)与CON组相比,DON组的肝脏丙二醛(MDA)含量显著增加(P<0.05),肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著降低(P<0.05);与DON组相比,AOS+DON组的肝脏MDA含量显著降低(P<0.05),肝脏T-SOD活性显著增加(P<0.05)。4)肝脏组织病理学分析结果表明,DON组肝细胞出现明显的点状坏死,且变形、肿胀,存在炎症浸润、脂质沉积,有特征性放射纤维状,添加AOS可明显改善上述病理损伤症状。F4/80免疫荧光染色结果表明,与CON组相比,DON组的肝脏巨噬细胞含量显著增加(P<0.05);与DON组相比,AOS+DON组的肝脏巨噬细胞含量显著降低(P<0.05)。5)与CON组相比,DON组的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量均显著增加(P<0.05);与DON组相比,AOS+DON组的血清AST、ALT、LDH活性和TG、TC含量均显著降低(P<0.05)。综上所述,AOS可改善肝脏指数和病理组织结构,降低血清和肝脏中炎症细胞因子的含量,进而缓解DON诱导的小鼠肝脏损伤。     

利用单克隆免疫亲和柱——高效液相色谱法检测小麦中DON毒素的研究

研究了单克隆免疫亲和柱--高效液相色谱法测定小麦中DON毒素的方法.样品通过聚乙二醇-水提取,提取液用DON毒素单克隆免疫亲和柱净化,SymmetryC18色谱柱分离,紫外检测器检测和外标法定量.该方法对添加不同含量DON毒素的平均回收率为86.11%-95.24%,变异系数(CV)为0.88%-2.59%,最低检出限为0.1 ms/kg,可用于小麦样品中DON毒素的检测.     

免疫组织化学法与间接免疫荧光法对REV抗原定位的比较

本研究分别用免疫组织化学(IHC)法、间接免疫荧光(IFA)法对肿瘤病鸡不同脏器中的禽网状内皮增生病病毒(REV)进行了检测,旨在为两种REV抗原定位方法的应用提供实验依据.采用REV SD1005分离株人工接种1日龄海兰褐鸡,分别采取28日龄肿瘤病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃的新鲜切面在洁净盖玻片上触片,同时制备其病理组织连续切片,分别用IHC法、IFA法对触片和切片进行REV检测.结果显示,两种用于抗原定位的染色方法检测结果完全一致,均可对病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃等组织中存在的REV进行定位,依据染色后的阳性细胞感染率可判断REV的组织嗜性.本研究表明,IHC法与IFA法均可用于检测不同脏器中的REV,并具有良好的特异性、低背景和简便快速的特点.但相对于IFA法,IHC法更经济实用并且实验材料易于保存,因此可以在REV抗原定位研究中推广应用.     

不同脱霉产品对西门塔尔肉牛生长性能、免疫性能及组织霉菌毒素残留的影响

［目的］探究不同脱霉产品对西门塔尔肉牛生长性能、免疫性能及组织霉菌毒素残留的影响。［方法］试验对60头353kg左右西门塔尔肉牛饲喂不同脱霉剂后的生长情况、血清生化指标和抗氧化指标、肌肉组织和肝脏中AFB1、ZON、DON残留含量结果进行分析。［结果］日粮中添加1g/kg解毒包处理料重比较对照组和脱霉剂组分别降低了4.34%（P<0.05）和4.10 %（P<0.05）;解毒包组ALT、AST、GR、GST、ADA酶活较对照组和脱霉剂组均有不同程度下降,总抗氧化能力（T-AOC）、活性蛋白酶（SOD）、过氧化物分解酶（GSH-PX）较对照组和脱霉寄组有不同程度提高,血清中丙二醛（MDA）解毒包组较对照组和脱霉剂组降低了16.7%（P＜0.05)和11.8%（P＜0.05);解毒包组肌肉中的AFB1、ZON、DON残留量比对照组分别下降了 63.04% 、10.55%和 16.64%,肝脏中的AFB1、ZON、DON残留量比对照组分别下降了9.26%、7.94%和34.04%。［结论］日粮中添加1g/kg解毒包在一定程度上改善了肉牛的生长性能,降低了料重比,提高机体的抗氧化能力并改善肝脏健康状况,同时降低了霉菌毒素在肌肉和肝脏中的残留。     

急性热应激条件下肉鸡组织器官中HSP70表达定位

通过观察热应激条件下肉鸡各组织中的HSP70阳性表达部位分布特点,探讨HSP70对不同组织器官的保护作用。分别在肉鸡40日龄时(选择体重差异不显著健康鸡)进行急性热应激处理,温度处理如下33℃±0.5℃、35℃±0.5℃、38℃±0.5℃各30min,修复2h分别取各处理组鸡只的法式囊、胸腺、心脏、肝脏作HSP70的免疫组织化学染色。各组织的HSP70表达时间及强度为(由强到弱):肝脏、心脏、胸腺、法氏囊。结果表明HSP70具有同源性,抗兔、抗鼠的HSP抗体可以抗肉鸡的抗原。HSP70在各组织器官中的表达定位有时间差异,不同的细胞具有不同的反应性,反应面积由大到小:肝脏、心脏、法氏囊、胸腺。HSP70的定位:肝脏、心脏定位在细胞质中。法式囊、胸腺定位在细胞质与细胞核中。     

湖羊消化系统各组织中Lrh-1表达定位分析

肝受体类似物-1(Lrh-1)是动物胚胎发育、分化、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡以及类固醇激素生成等方面重要的调节因子。本研究采用免疫组化方法对湖羊消化系统各组织进行Lrh-1蛋白表达定位检测。结果表明:Lrh-1免疫阳性细胞在湖羊皱胃、肝脏、小肠及大肠组织中均有分布,特别是在具有分泌功能的皱胃胃腺细胞、肝脏细胞、小肠和大肠肠腺细胞中有大量分布。说明Lrh-1是参与湖羊胃肠消化系统各组织分泌功能的重要因子。     

呕吐毒素对动物肠道结构与功能影响研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对食物和饲料的污染已成为全球化的问题,人们也逐渐开始重视饲料污染物DON对动物机体造成的影响。随着科学的不断发展,DON神秘的面纱已被逐渐揭开。近年来的研究证实了随饲料经消化道进入动物机体的DON,在通过改变肠道组织形态学,影响肠道功能的同时,也可通过改变肠道营养物质运输载体、紧密链接蛋白、mRNA转录以及某些炎性物质等的表达,影响肠道营养吸收作用、屏障功能、免疫功能以及渗透作用等,最终导致动物机体产生营养不良、腹泻、呕吐和肠道炎症等不良反应。研究还表明,不同情况下DON对不同的动物肠道可以产生不同的影响。     

家禽饲料中主要霉菌毒素含量与家禽肉、内脏、鸡蛋霉菌毒素含量的相关性分析

试验旨在研究家禽饲料中的主要霉菌毒素与家禽肉、内脏和鸡蛋霉菌毒素含量的相关性。本试验对山东省各地市分别取有代表性的16个肉鸡养殖场(每场采集饲料1份和3只肉鸡的胸肉、腿肉、心脏、肝脏)和14个蛋鸡养殖场(每场采集4枚鸡蛋和1份饲料)进行霉菌毒素检测。结果表明：肉鸡配合饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤酶烯酮(ZEN)和脱氧血腐镰刀菌烯醇(DON)的检出率分别为93.75%、100%和87.5%,1份AFB1超标饲料中含量为15.02μg/kg时,肉鸡肝脏中AFB1毒素残留量仅为0.012μg/kg。肉鸡饲料中ZEN为502、558、672.5μg/kg时,肝脏ZEN含量分别为0.25、0.354、0.405μg/kg,在其他组织中未发现ZEN毒素残留。肉鸡饲料AFB1、ZEN和DON不超标,肌肉和脏器中没有检出AFB1、ZEN和DON。蛋鸡配合饲料AFB1、ZEN和DON的检出率分别为100%、100%和93.75%,且含量均低于限量标准,3种毒素在鸡蛋中均未检出。饲料中AFB1、ZEN和DON含量低于限量标准时,在肌肉、脏器和鸡蛋中未能检出。饲料中AFB1、ZEN含量高于限量标...     

原位PCR检测雏鹅体内鹅细小病毒方法的建立及其应用

通过建立能对石蜡切片中鹅细小病毒(GPV)核酸进行定位的原位PCR方法,为GPV在鹅体内的定位、致病机理研究等提供有效的试验手段.根据GPV的VP3基因序列设计PCR引物和寡核苷酸探针,以GPV感染鹅肝脏和空肠组织石蜡标本制作切片,经蛋白酶K消化、原位PCR扩增和碱性磷酸酶标记的寡核苷酸探针原位杂交,建立了检测石蜡标本中GPV的间接原位PCR方法并应用于自然感染GPV高免血清紧急免疫后鹅肝脏和空肠组织临床病料检测.结果显示间接原位PCR对人工感染GPV死亡鹅肝脏和空肠的石蜡标本检测结果为阳性,而鹅病毒性肝炎、鹅多杀性巴氏杆菌病、鹅沙门菌病和鹅大肠杆菌病死亡鹅肝脏的石蜡标本检测结果为阴性;间接原位PCR对自然感染GPV高免血清紧急免疫后第6天的鹅肝脏和空肠组织检测20个样本中,空肠组织有8个呈阳性,肝脏组织有4个阳性结果均为阳性,阳性细胞有空肠上皮细胞、肝窦上皮细胞等.     

兔肝脏和肠道中戊型肝炎病毒抗原的检测及组织病理学观察

为探讨兔体内戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,本试验从河北某屠宰场采集了136例兔肝脏样品和101例肠道样品。采用免疫组织化学染色方法对上述样品中的HEV抗原进行了检测,同时应用H.E.染色和Mallory三色染色法对其病理形态学变化进行了观察。研究结果显示,136例肝脏中HEV抗原免疫组织化学阳性样品共有96例,阳性率为70.59%,101例肠道中HEV抗原免疫组织化学阳性样品共有79例,阳性率为78.22%。组织病理学观察可见肝脏和肠道均有明显的炎症变化。本研究结果表明,兔群中存在较高的HEV感染率。     

犬肝脏中戊型肝炎病毒抗原的检测及组织病理学观察

为探讨宠物犬戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,试验采集了21例宠物犬肝脏,采用免疫组织化学染色方法对上述肝脏组织中的HEV-Ag进行了检测,同时应用H.E染色和Mallory三染色法对其病理形态学变化进行了观察。结果表明在21例宠物犬肝脏中均检出了HEV抗原。组织病理学观察可见肝脏有明显的炎症变化。提示宠物犬感染HEV程度很高,并且是人感染HEV潜在传染源,具有重要的公共卫生意义。     

多药耐药相关蛋白2在健康和大肠杆菌感染SD大鼠肝脏和肠组织中的定位及mRNA表达水平

本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白2(MRP2)在健康和感染大肠杆菌的SD大鼠肝脏、十二指肠、空肠、回肠和结肠中的分布特点和mRNA表达水平.选用健康成年SD大鼠20只,随机分成健康对照组和大肠杆菌感染组,采用免疫组织化学和荧光定量PCR的方法检测了MRP2在大鼠肝脏和肠组织中的定位与表达.结果显示:MRP2在健康和感染大鼠不同组织中均有分布,主要见于肝脏的胆管面(肝脏毛细胆管的细胞膜)、肝脏门静脉区和各肠段的肠黏膜层,但蛋白表达水平不同.健康组大鼠MRP2在肝脏毛细胆管的细胞膜分布比门静脉区附近广泛,在肝脏毛细胆管的细胞膜和门 静脉区表达均为强阳性;在十二指肠和空肠的表达为强阳性,在回肠和结肠表达为阳性;与健康组相比,MRP2在感染组大鼠的蛋白表达水平均较弱,主要表现为十二指肠和空肠为阳性,回肠和结肠中为弱阳性,肝细胞的胆管面为阳性,肝脏门静脉区附近呈弱阳性.MRP2的mRNA在健康和大肠杆菌感染大鼠的肝脏和肠组织中均有表达,但表达水平也存在差异.与健康组大鼠相比,MRP2 mRNA表达量在大肠杆菌感染组大鼠肝脏和小肠中显著下调(P＜0.05).SD大鼠感染大肠杆菌后可引起肝脏、小肠组织中MRP2在mRNA和蛋白水平的表达下调.     

一株毕赤酵母菌MC-1降解呕吐毒素、生物学特性及初步应用

呕吐毒素（DON）是危害动物健康的霉菌毒素之一，本研究旨在分离出能够降解DON的益生菌，以期应用于动物饲料中降解DON。本研究从普洱茶叶中分离出一株益生菌，经16S rDNA基因序列比对确定该菌株为毕赤酵母菌MC-1菌株；其在含有DON(1 mg/L)发酵液中DON降解率为59.21%。此外研究了毕赤酵母菌MC-1生物学特性，活性成分定位和应用试验。结果表明：毕赤酵母菌MC-1具有耐盐、耐酸、耐胆盐及在模拟消化液中存活的特性；其发酵上清液（DON 1 mg/L） DON降解率为54.76%，该菌株与（DON 1 mg/kg）豆粕共同发酵48 h后DON降解率为46.79%。综上，毕赤酵母菌MC-1能够用于动物发酵饲料中降解DON。     

不同剂量脱氧雪腐镰刀菌烯醇对蛋鸡肝脏组织形态学的影响

为了研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(doxynivalenol,DON)对蛋鸡肝脏组织形态学的影响,随机选取26周龄海兰蛋鸡120只,分为6组,每组20只鸡,试验组按体重分别灌胃1、5、10、20和50 mg/kg DON,对照组灌胃0.2 mL等量的生理盐水,试验持续6周;试验结束,分离蛋鸡肝脏,称重后做组织病理切片。结果显示:1 mg/kg组可见小叶间静脉周围炎性细胞浸润,1区肝细胞空泡化变性;5 mg/kg组可见中央静脉周围出现大量炎性细胞浸润;10 mg/kg组肝脏指数显著升高(P0.01),伴随汇管区出现大量炎性细胞浸润,炎症病灶外围形成纤维化,小叶间静脉扩张;20 mg/kg时,肝血窦腔淤血增大,汇管周围出现局灶性溶解性坏死;50 mg/kg组肝脏指数较对照组显著降低(P0.05),伴随汇管周围出现大量局灶性溶解性坏死,有空洞形成。由此可见,DON导致蛋鸡肝脏损伤具有剂量依赖性,低剂量呈现炎性细胞浸润,高剂量出现坏死及空洞,其中10和50 mg/kg组肝脏组织形态变化还伴随肝脏指数的升高或降低。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪血清及小肠黏膜免疫功能的影响

旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪血清及肠道黏膜免疫功能的影响。选择30头21日龄临床检查健康的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,体质量(6.87±0.41)kg,随机分为3组,对照组饲喂基础日粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂含1,2 mg/kg的DON日粮,试验期为60 d。试验结束时,所有仔猪经前腔静脉采血,分离血清,用于检测免疫因子含量;同时每组随机选择5头仔猪进行屠宰,收集免疫器官及各段小肠,用于检测免疫器官指数及小肠组织中免疫球蛋白的表达水平。结果显示:与对照组相比,DON处理组仔猪血清中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、补体3(C3)及补体4(C4)含量均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);试验组仔猪脾脏指数较对照组显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);小肠各段肠黏膜中免疫球蛋白表达水平均随DON含量的增加而显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。结果表明,在本试验条件下,DON可降低断奶仔猪的体液免疫及肠道黏膜免疫水平,改变仔猪的免疫功能。     

Ghrelin阳性细胞在食蟹猴消化系统中的分布定位

目的:研究ghrelin阳性细胞在食蟹猴消化系统中的分布定位。方法:采用免疫组化SABC法检测ghrelin免疫阳性细胞在食蟹猴消化系统中的分布部位、含量及细胞形态。结果:ghrelin免疫阳性细胞分布于食蟹猴的胃、十二指肠、空肠前段、空肠中段以及胰腺中,而在口腔黏膜、食管、空肠后端至直肠、肝脏中均无表达。结论:食蟹猴内ghrelin阳性细胞的分布与人和其他动物的分布基本相似,ghrelin在进化上具有保守性,物种间存在差异性。