猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定某猪场仔猪死亡的主要病原菌,分析该病原菌的耐药性,本试验对病死猪进行剖检,并从肺脏、脾脏中分离到一株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果表明该株分离菌为革兰氏阳性链状球菌,生化试验结果与链球菌的生化试验结果大致相符;细菌的16S r RNA基因序列经Blast同源性比较,与猪链球菌(Gen Bank CP007497.1)同源性为99%;药敏试验结果表明该株分离菌对氟喹诺酮类、β-内酰胺类多种药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时药物治疗提供参考依据。     

西藏牦牛腹泻性大肠杆菌的分离鉴定

为探讨西藏那曲市申扎县牦牛腹泻的原因，本试验无菌采集11份腹泻牦牛粪便样品进行细菌分离培养、染色镜检，对检测菌株的16Sr RNA基因进行扩增、测序，序列上传至Gen Bank进行比对，并使用DNAStar进行同源性分析，构建遗传进化树。分离结果表明，11份样品中共分离出5株菌株，在MAC培养基上菌落呈粉红色，革兰氏染色镜检后发现所有菌株均为阴性且两端钝圆的直杆菌；16Sr RNA基因同源性分析结果显示，5株分离株16Sr RNA序列同源性在90%以上，与大肠杆菌参考序列的同源性达到95.2%以上；遗传进化树显示，XZ-1、XZ-5分离株与大肠杆菌AT125株、PAK/SA4株亲缘关系较近，XZ-2、XZ-3和XZ-4分离株与大肠杆菌RM13322株亲缘关系较近，经以上鉴定可知分离菌为大肠杆菌。     

生猪伤口和猪场空气中葡萄球菌的鉴定及药敏试验

从患病猪伤口以及空气中各分离到1株葡萄球菌并进行了16S rRNA部分基因的PCR扩增、序列测定以及两株细菌的药物敏感性试验。试验结果表明,从伤口中分离的葡萄球菌具有溶血性,空气中分离的葡萄球菌不具备溶血性;伤口中葡萄球菌16S RNA部分基因与GeneBank收录的溶血性葡萄球菌(AP006716.1)16S RNA基因相应部分序列同源性为99%,空气中葡萄球菌与GeneBank收录的葡萄球菌(AB188210.1)16S RNA基因相应部分序列同源性为99%。药物敏感性比较试验表明,两种葡萄球菌敏感性基本相同,均对头孢类药物敏感,对红霉素、卡拉霉素不敏感。     

新疆奶牛副结核分枝杆菌的分离鉴定

为进一步确定新疆某规模化牛场疑似奶牛副结核病病原,本研究从PCR检测阳性牛粪便样本中共分离获得4株细菌,对其进行菌落形态观察、抗酸染色镜检以及16S r RNA、IS900特异性基因及亚型分型基因的扩增、序列测定与分析。结果显示,所分离的4株细菌为抗酸染色阳性菌,对其IS900基因及亚型分型基因检测均为阳性,它们的16S r RNA、IS900基因及亚型分型基因之间同源性为100%,与Gen Bank中登录的副结核分支杆菌序列同源性在99%以上,从而确定所分离的4株菌株均为Ⅱ型(牛型)副结核分枝杆菌。     

一株猪葡萄球菌的分离鉴定

从患有渗出性皮炎的仔猪分离到1株革兰阳性球菌,生化试验、形态学观察进行初步鉴定,然后进行16 S rRNA基因片段的扩增和测序,将测序结果与GenBank上的已知序列进行同源性比较,结果与猪葡萄球菌的核酸序列同源性达到99.6%,综合可见该分离菌株为猪葡萄球菌,并将其命名为GDSH1。     

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

为了确定引起青岛市某猪场发病的主要病原菌,本试验对该猪场送检的病死猪进行剖检,从肺脏中分离得到一株细菌,随后进行分离菌的形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果显示该株分离菌为革兰氏阴性杆菌;生化试验结果表明该株菌分解氨基酸、不分解糖类,与支气管败血波氏杆菌的生化试验结果大致相同;16S r RNA基因序列与支气管败血波氏杆菌(Gen Bank序列号:AP014582.1)同源性为100%;药敏试验结果表明该株分离菌对部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时如何用药治疗提供参考依据。     

猪渗出性皮炎病原的分离鉴定

从疑似渗出性皮炎的哺乳仔猪体内分离到一株细菌,经革兰染色镜检以及TH-16S细菌生化鉴定系统和葡萄球菌16S rRNA、gap基因通用引物鉴定.结果表明,该菌株为葡萄球菌,gap基因的核苷酸同源性为99%.动物试验发现,试验小鼠出现躁动、被毛竖立、精神沉郁,18 h死亡,说明该菌株对小鼠具有致病力.     

猪葡萄球菌分离鉴定及药敏试验

为查明猪场仔猪渗出性皮炎的致病菌及确定其有效治疗药物,对病料进行细菌分离鉴定和药敏试验。从肺脏、心脏及病变皮肤等部位分离细菌后进行纯化,通过镜检、生化反应、细菌鉴定仪鉴定确定该致病菌为猪葡萄球菌;药敏试验结果表明,该菌对青霉素类、林可酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类药物均耐药,对头孢类药物较敏感,建议用作仔猪渗出性皮炎的治疗。     

猪葡萄球菌437-2株的分离鉴定及生物学特性

从发生渗出性皮炎的仔猪体内分离到1株细菌,根据其形态特征和生化特性,结合16S rRNA核苷酸序列分析,确定为猪葡萄球菌,并命名为437-2株。用1×10⁹CFU/mL剂量的该菌株经皮下感染小鼠、仔猪,均能引起注射部位皮肤脱毛、破溃、有炎性渗出物、结痂等病变,病理学观察可见表皮局部上皮细胞消失、皮下小血管充血和炎症细胞浸润。应用PCR方法检测分离株携带的表皮脱落毒素相关基因并测序,结果显示该菌株携带表皮脱落毒素ExhD和ShetA基因。药敏试验结果显示该菌株对多种抗生素呈现不同程度的耐药,但对痢菌净、氟苯尼考、头孢曲松钠、阿米卡星敏感。上述结果为猪葡萄球菌引起的仔猪渗出性皮炎的病原学、发病机理及诊断靶标筛选等方面的研究提供了参考。     

鸡蛋污染致病菌分离及鉴定

为了研究污染鸡蛋的致病菌,试验采用微生物分离纯化在鸡蛋表面得到4株菌,用形态学观察和生理生化初步判定为芽孢杆菌和葡萄球菌,再结合16Sr RNA分子方法对4株菌进行分类分析,先用PCR对目的菌进行基因扩增,经克隆及质粒测序,再登录NCBI中Gen Bank数据库进行相似性分析。结果表明:1号菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus GXBC-1,2号和3号菌为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus NC7401,4号菌为金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus。这些菌是食源性致病菌,致病性强,传染率高,对食品安全风险大。     

闽西地区猪丹毒杆菌的分离及生物特性鉴定

为确诊福建省龙岩市范围内4个养猪场疑似猪丹毒病例,从病猪脏器中分离、纯化细菌,并进行生物特性鉴定。根据其培养特性、形态特征、生化试验及PCR鉴定,确定为猪丹毒杆菌。16S r RNA基因测序结果表明,4株分离株16S r RNA序列全部相同,与Gen Bank中NR_074878_Fujisawa、NR_040871_DSM_14972、NR_113036_JCM_8533、NR_04083-7_ATCC 19414同源性为98.7%。药敏试验结果显示,4株分离株对阿莫西林、头孢噻呋、替米考星高度敏感;对庆大霉素、恩诺沙星产生耐药;对林可霉素、泰妙菌素、氟苯尼考、土霉素敏感性存在差异,其中LY-WP株对林可霉素耐受,LY-CT株对土霉素耐受。     

猪链球菌的分离、16S rRNA鉴定及药敏试验

从湖南某猪场病猪组织中分离出6株细菌,通过培养形态、菌落特征、细菌染色特性、镜检、16S rRNA基因扩增及序列BLAST分析等系统鉴定,确定为猪链球菌,6株分离菌的16S rRNA基因序列与收录菌株同源性为99%以上。药物敏感性试验结果表明,分离细菌对头孢喹肟、先锋霉素、青霉素药物高度敏感。     

仔猪黄痢病原菌的分子生物学鉴定及多重耐药基因检测

旨在确定引起安徽地区猪场仔猪黄痢发生的病原菌种类,并从分子水平上揭示其多重耐药机制。利用麦康凯培养基对从仔猪黄痢病死猪肝脏样本中初步分离到的9株细菌进行选择性培养;提取分离菌株的基因组DNA,利用PCR法扩增其16SrDNA序列并进行测序;将测序结果提呈至NCBI数据库,与GenBank中已发表的序列进行BLAST比对,对分离菌株进行种水平鉴定;采用纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;利用PCR法检测分离菌株携带多重耐药基因AcrA的情况。结果表明,9株分离菌在麦康凯琼脂培养上均呈中等大小的玫瑰红色菌落,符合大肠杆菌的菌落特征;9株分离菌的16SrDNA序列与GenBank中公布的大肠杆菌16SrDNA序列的相似性均在99.0%以上,提示分离菌株均为大肠杆菌;9株分离菌对12种抗菌药物呈现不同程度的耐药性,对阿米卡星、大观霉素和氯霉素的耐药性较强;9株分离菌的AcrA基因携带率为100%。综上提示,多重耐药性大肠杆菌是引起该地区猪场仔猪黄痢发生的致病菌,在临床治疗中应引起足够重视。     

一例仔猪渗出性皮炎的诊治

为了对重庆某发病猪场仔猪所患疾病进行诊治,试验采用细菌分离纯化、镜检及PCR鉴定,结合临床症状和病理剖检进行诊断,并根据药敏试验结果进行针对治疗。结果表明:该猪场仔猪所感染的病原为含有EXHA毒素的猪葡萄球菌,其对恩诺沙星与头孢吡肟高敏,经过2周的治疗,该猪场仔猪渗出性皮炎治愈率达到了63.89%。     

1株猪葡萄球菌强毒株的分离鉴定及致病性试验

为确定广东省增城某猪场产房仔猪暴发渗出性皮炎的致病菌,从病猪心脏、肺脏、病变皮肤分离并纯化细菌,经形态学观察,镜检,生化特性及gap基因的序列分析,确定为猪葡萄球菌,命名为ZC-4株。药敏试验结果显示该菌株对头孢拉定、头孢唑啉、新生霉素高度敏感,对头孢噻肟、万古霉素、庆大霉素中度敏感,对青霉素、阿莫西林、磺胺类药物、链霉素、恩诺沙星等均耐药。对分离株毒素基因进行检测,结果显示,分离株携带ExhA毒素基因,测序结果表明,其编码区全长为822bp,编码274个氨基酸;氨基酸序列与丹麦分离株ExhA基因(AF515453)的同源性最高,为99.6%;遗传进化分析显示,分离株所携带的毒素基因与参考菌株猪葡萄球菌ExhA毒素基因聚类紧密,位于一个小的分支内。分离株致病性试验结果显示,分离株接种25日龄健康断奶仔猪后24h,病猪耳根、四肢内侧、背部、腹部、臀部、尾根等部位出现蜕皮并露出有液体渗出的鲜红创面,继而皮肤形成一层厚厚的结痂,说明该菌株具有较强的致病性。本试验为猪葡萄球菌疫苗的研制及致病机制研究提供了理论依据。     

生猪脓包化脓隐秘杆菌的分离鉴定与防控分析

为了解猪场生猪体内外脓包形成的原因,文章从3个规模猪场采取了不同部位脓包的脓汁样品,并进行细菌分离与16Sr RNA基因的测序分析。结果,从4个保育猪颈部皮下脓包、1个生猪肿大的耳朵、1头保育猪肝脏和脾脏发脓灶分离到大量纯的化脓隐秘杆菌,从1个保育猪颈部脓包分离到化脓隐秘杆菌的同时还分离到了葡萄球菌。通过猪场情况调查结合细菌分离结果,发现生猪体内外脓包的形成,主要是由于化脓隐秘杆菌感染引起,但饲养管理不佳,猪场内环境卫生差可能是生猪体内外脓包形成的重要促进因素。     

猪鼻支原体的分子鉴定及进化分析

本研究对青藏高原地区青海猪鼻支原体分离株(Mhr-QH1)进行了Mhr-p37基因的克隆鉴定及测序分析,并利用Mhr-16S rRNA基因与Gen Bank中相关菌株基因进行了基因同源性比较和遗传进化分析。Mhr-p37基因和16S基因PCR扩增测序结果显示,获得核苷酸序列长度分别为346bp和1500bp,Mhr-QH1-p37基因核苷酸序列与中国株、法国株和美国株的同源性达到100%;同样16S rRNA基因与巴西分离株的16S rRNA基因同源性也为100%,与日本、瑞典和美国分离株的同源性为99%。进化树分析发现:Mhr-QH1分离株与巴西株聚为组成一个微小分支,与美国株和巴西株共聚为同一个大支上,并与其他Mycoplasma spp.种系进化距离较远。因此,本研究对青海猪鼻支原体菌株的Mhr-p37基因序列和蛋白氨基酸序列分析,及16S rRNA基因系统进化研究的结果,有望为我国猪鼻支原体病的分子流行病学调查提供一定的数据参考,同时提示猪场搞好饲养管理是预防本病的关键。     

昆明某猪场猪皮脓病的病原学诊断

昆明某猪场猪出现以关节及皮肤脓肿、发育迟缓为特征的疾病。为查明病因,本试验采集自各病猪的关节渗出液、脓汁,取病料组织划线于血琼脂平板培养,对形成的溶血性菌落采用高盐培养、革兰染色、触酶试验、凝固酶试验和药敏试验,并使用细菌16S rRNA基因通用引物扩增分离株DNA片段,琼脂糖凝胶电泳胶回收产物,经过TA克隆后测序分析。结果发现,溶血性菌株为革兰阳性的球菌,触酶试验和凝固酶试验均呈阳性,PCR扩增出1 476bp的单一条带,其基因序列与金黄色葡萄球菌DNA同源性达99%。试验结果表明,引起该猪场皮脓病的主要原因是金黄色葡萄球菌感染。     

腹泻仔猪中猪圆环病毒2型的检测及生物信息学分析

为研究仔猪腹泻中猪圆环病毒2型(PCV2)的生物信息,参考Gen Bank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计并合成一对特异性引物,从四川地区猪场送检的腹泻仔猪病料中扩增PCV2全长基因序列,回收PCR产物。将其插入PMD19-T载体,构建了重组质粒,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。将测序结果及推导的氨基酸序列与国内外的不同分离株进行生物信息学分析。结果表明,分离株基因组全长为1 767 bp,分离的三株基因组与Gen Bank上已发表的PCV2分离株之间的核苷酸同源性分别为1#94.7%~89.6%、2#94.7%~89.3%、3#96.4%~86.8%,氨基酸序列同源性为1#97.9%~95.7%、2#97.1%~95.5%、3#98.4%~94.8%,说明四川地区腹泻仔猪病料中PCV2的变异相对保守。     

牛巴贝斯虫lytB基因的克隆与序列分析

为了对牛巴贝斯虫lytB基因进行克隆与序列分析,试验以兰州株牛巴贝斯虫lyt B基因组为模板进行PCR扩增,将扩增得到的特异性产物克隆到p GEM-T Easy载体上,并对其进行PCR检测、酶切鉴定及序列测定分析。结果表明:试验克隆得到的864 bp基因片段与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列同源性为97.8%。说明试验成功克隆出牛巴贝斯虫lyt B基因,与Gen Bank收录的牛巴贝斯虫lyt B核苷酸序列具有高度的同源性。