用RT—PCR方法检测猪瘟与猪蓝耳病混合感染

福建省某规模化猪场暴发一种以保育猪精神沉郁、体温升高、腹泻、消瘦等为主要特征的传染性疾病。利用RT—PCR和PCR分别对采集的病料进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒检测,结果猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒为阳性,其他病毒均为阴性。对病料进行细菌分离鉴定,结果为阴性。根据诊断结果紧急接种疫苗,提高疫病综合防控等措施,疫情最终得到有效控制。     

猪高致病性蓝耳病、圆环病毒病和链球菌病混合感染的诊断

为了对黑龙江省某猪场发生的猪病确诊,首先采用了流行病学调查、临床检查和病理解剖初步怀疑是猪圆环病毒病和链球菌病混合感染,然后无菌取病猪脾脏、淋巴结进行细菌分离,分离纯化后的细菌经革兰氏染色、生化实验和动物实验,鉴定为猪链球菌;提取脾脏和淋巴结DNA、RNA经PCR检测出猪圆环病毒和猪高致病性蓝耳病毒的核酸阳性条带。说明了该病猪确系猪圆环病毒、猪高致病性蓝耳病毒和猪链球菌的混合感染。药敏试验结果表明,该分离菌对青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素不敏感,对头孢咪唑、环丙沙星、氟哌酸高度敏感。并结合猪场的发病情况和试验结果提出了防疫方案和治疗措施,为猪场防治猪圆环病毒病、猪高致病性蓝耳病与链球菌混合感染提供了参考。     

一起育肥猪急性死亡病例的诊治

本文采用RT—PCR方法从某规模化养殖场育肥猪急性死亡病例病料中检测猪瘟病毒（CFSV）、蓝耳病病毒（PRRSV）、圆环病毒（PCV）、乙脑病毒（JEV）、伪狂犬病毒（PRV）,并进行细菌的分离,采用16s RNA对所分离的致病菌进行鉴定,鉴定结果为病猪为猪瘟病毒、蓝耳病病毒混合感染同时继发猪丹毒杆菌感染,药敏试验结果显示分离的致病菌对青霉素。头孢噻肟和先锋霉素V高度敏感。根据结果制定出相应的防治措施,经过处理后,病情得到良好的控制。     

一例猪链球菌与蓝耳病病毒混合感染的实验室诊断

安达市某猪场仔猪大批发病,病猪出现精神萎靡、呼吸困难、采食量下降、体温升高。为对该场病猪进行确诊,运用临床诊断和病理解剖等手段,初步诊断是猪链球菌和蓝耳病病毒的混合感染,病猪感染本病早产和死胎率达30%、死亡率可达80%。通过细菌学和PCR技术对放线杆菌、链球菌、猪瘟病毒、猪圆环病毒及蓝耳病病毒进行检测。发现血液琼脂培养基中出现针尖大小菌落,镜检为革兰氏阳性球菌,PCR检测蓝耳病病毒与链球菌为阳性,最终确诊为链球菌和蓝耳病病毒混合感染。通过对分离细菌进行药敏试验,结果显示,硫酸头孢喹肟、土霉素高度敏感。     

猪蓝耳病毒、猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染的实验室诊断及血清抗体检测

为了确定山东省莱西市某猪场送检病猪的发病原因,并调查猪群主要疫病抗体水平以便为猪场疫病防控提供科学参考依据,试验采集送检病猪病料,综合运用临床观察、病理剖检、细菌分离鉴定和病毒核酸检测等技术进行确诊;并对分离菌进行药敏试验;使用ELISA检测试剂盒对猪群的猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)4种主要病原进行检测,分析抗体水平。结果表明:送检病料经TSA培养基分离培养可见针尖状菌落,革兰氏染色镜检为阴性杆菌,生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌;该分离细菌对大观霉素高度敏感,对头孢噻肟极度敏感;猪群中PRRSV和PCV-2为阳性,未检测出其他病毒;同场猪群的猪瘟抗体水平偏低需加强免疫,猪蓝耳病抗体水平不稳定,存在野毒感染风险。说明送检病例为PRRSV、PCV-2和副猪嗜血杆菌的混合感染,同场猪群需注意加强猪瘟免疫和猪蓝耳病抗体监测。     

一例猪圆环病毒2型和大肠杆菌、溶血葡萄球菌混合感染的诊断

山东德州某猪场发生猪高热、呼吸系统疾病甚至死亡的疫情。采集病料提取病变组织总DNA或RNA进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒的PCR或RT-PCR检测。PCR扩增出353 bp的猪圆环病毒2型特异性条带。同时进行细菌分离培养、生化鉴定等试验,诊断为猪圆环病毒2型和大肠杆菌、溶血葡萄球菌混合感染。     

多杀性巴氏杆菌和猪圆环病毒混合感染的诊断

大庆市某猪场发生以高热稽留、呼吸困难以及食欲废绝等为临床症状,部分仔猪甚至死亡的疫情。无菌采集病料,提取病变组织DNA或RNA进行猪瘟病毒、圆环病毒的PCR或RT-PCR检测,同时进行细菌分离培养等试验。PCR扩增出700 bp的猪圆环病毒特异性条带。诊断为多杀性巴氏杆菌和猪圆环病毒混合感染。     

一起暴发猪蓝耳病继发猪瘟和猪圆环病毒病的诊治报告

猪蓝耳病(繁殖与呼吸综合征)、猪瘟及圆环病毒病一直是对猪场造成严重损失的疾病,近期在山东某猪场爆发三者混合感染的情况,对猪场造成了巨大的损失,无菌采取病料3份,进行PCR检测诊断,结果显示:猪瘟、猪蓝耳病的3份病料的PCR结果均为阳性,猪伪狂犬病均为阴性,猪圆环病毒病的检测只有1份显示阳性,其他2份为阴性。     

猪瘟、猪蓝耳病毒和沙门氏菌混合感染的实验室诊断

2017年8月,黑龙江省大庆市某猪场暴发传染病,传染率高,死亡率高,病程为2~5 d,临床症状主要表现为发病仔猪食欲不振、体表高温发热、皮肤发绀、仔猪腹泻、气喘等症状。无菌采取病猪肠段、肺脏等病料提取其DNA和RNA,进行PCR(聚合酶链式反应)检测,同时分离纯化细菌进行革兰氏染色镜检、药敏试验和生化鉴定等。PCR扩增出的结果为猪蓝耳病毒、猪瘟和沙门氏菌的混合感染。药敏试验结果显示链霉素、庆大霉素、恩诺沙星对分离细菌高度敏感。     

仔猪蓝耳病病毒、圆环病毒和链球菌混合感染的诊断

为诊断黑龙江省某猪场暴发的猪病,采用流行病学调查、临床检查和病理剖检以及实验室检测技术,通过PCR检测、革兰氏染色、生化试验等方法对无菌采集的病料进行检测。PCR检测结果显示猪圆环病毒和蓝耳病病毒为核酸阳性条带,革兰氏染色和生化试验结果为链球菌,最终证明该群病猪为圆环病毒、蓝耳病病毒和链球菌混合感染。本文提出了一些预防保护措施,也为猪圆环病毒病和蓝耳病的防治提供了参考。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染病例的病原学诊断

为确诊贵州省都匀市某养殖场的猪死亡病因,采集病死猪病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型核酸检测,细菌分离鉴定及药物敏感试验。结果:猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测和猪圆环病毒2型PCR检测核酸均为阳性,其余病毒核酸检测均为阴性。细菌分离培养表明存在细菌感染,分子生物学鉴定为奇异变形杆菌;分离菌对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素、盐酸大观霉素+盐酸林可霉素、氟苯尼考较敏感,对多种药物产生耐药。结论:确诊病例为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、奇异变形杆菌混合感染。     

青海省农业区主要猪病的流行病学调查

采用ELISA检测方法和流行病学调查方法，于2004～2005年对青海省互助、湟中、大通、乐都、民和、西宁6县（市）的142个规模养猪场和部分养殖户进行了猪瘟、猪生殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型感染、伪狂犬病等流行状况的调查。结果显示，猪瘟、猪生殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型感染、伪狂犬病在青海省农业区普遍存在，6县（市）之间血清抗体阳性率无明显差异；母猪繁殖障碍覆盖了所有种猪场，后备母猪不发情率约为8．2％，产死胎、木乃伊、弱仔的母猪占繁殖母猪的21％左右；猪瘟仍然是引起当地猪死亡的主要原因。     

猪圆环病毒免疫学研究进展

猪圆环病毒(PCV)在世界范围内广泛存在,可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合征(PDNS)和猪呼吸系统疾病症候群,给养猪业造成重大经济损失.已有研究表明,PCV-2感染和免疫刺激作用在PMWS发生中起关键作用,母源抗体对PMWS发生有被动保护作用,通过对初产母猪和经产母猪进行PCV-2免疫,增加母源性免疫和降低病毒血症的措施可以减少PMWS对仔猪死亡的影响.PCV-2疫苗现在已经在商业上应用,疫苗对PCV-2复制和PCVD的诱导增强作用似乎依赖于疫苗佐剂的类型和疫苗的接种时间.因此,基于有效的试验,在发生过PMWS感染的猪群,应该根据PCV-2感染的时间有目的地制定免疫接种方案,以控制或者减少PMWS的发生.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断与防制

目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分离鉴定、药敏试验、PCR和RT-PCR等实验室检测最终确诊为高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病的混合感染,在此基础上提出和实施了该病的防控方案。     

2011年新疆部分猪场主要疫病调查及免疫抗体评估

对本实验室2011年受理检测的92个规模化和散养猪场猪瘟、口蹄疫等血清学监测和流行病学调查信息分析,结果表明,猪瘟平均免疫抗体合格率为76.86%,口蹄疫免疫抗体合格率为60.82%,猪伪狂犬病免疫抗体合格率为51.75%,猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体合格率为55.52%。结合临床诊断及实验室检测,部分猪场存在胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、链球菌、副猪嗜血杆菌等感染,胸膜肺炎放线杆菌抗体阳性率为48.10%,猪圆环病毒抗体阳性率为53.21%,链球菌抗体阳性率为48.89%,副猪嗜血杆菌抗体阳性率为25.58%。     

Confirmation of the occurrence of the chewing louse Bovicola (Lepikentron) breviceps (Insecta: Phthiraptera: Trichodectidae) on alpacas (Lama pacos) in New Zealand

Abstract

AIM: To investigate the cause of classical swine fever (CSF) virus-seropositive animals in a nucleus pig-breeding herd in New Zealand, where porcine circovirus-associated disease had been diagnosed.

CASE HISTORY AND CLINICAL FINDINGS: An exotic disease investigation was undertaken to exclude CSF and porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) on a nucleus pig-breeding herd comprising approximately 300 breeding sows, 1,000 weaners, and 650 grower pigs. The herd was experiencing poor reproductive performance in sows, and breeding records showed a declining farrowing rate attributable to a single manager. The growing pigs (10–15 weeks old) were experiencing respiratory disease and wasting, and the mortality rate by pen varied between 9 and 20%. Post-mortem changes in affected grower pigs were consistent with circovirus-associated diseases.

DIAGNOSTIC TESTING: Serological screening using an IDEXX-ELISA gave negative results for PRRS virus antibodies, but two grower pigs and one sow tested positive for CSF virus antibodies. These three seropositive animals remained positive to CSF virus, using three commercial ELISA test kits, over 27 weeks. A newly developed virus neutralisation test (VNT), using a New Zealand isolate of border disease (BD) virus, demonstrated that the seropositive pig sera had higher antibody titres to BD virus than to bovine viral diarrhoea (BVD) virus and CSF virus.

PCR performed on tonsil, kidney, ileum and spleen gave negative results for CSF virus, and histopathology on lymph nodes, intestine, lung, kidney, liver and brain showed no evidence of the disease. Virus isolation performed on a number of samples was negative.

CLINICAL RELEVANCE: The seropositive samples for CSF virus found in this investigation were likely to be a cross reaction to a pestivirus other than CSF virus. The finding of a possible endemic pestivirus capable of being transmitted between sheep and pigs on this farm may explain findings from previous serological survey work in New Zealand, and supports experience elsewhere, where BD virus was found to be the predominant ruminant pestivirus infecting pigs. The results show that pestivirus cross reactivity can result in unexpectedly high titres, and that testing with a full set of (local) pestiviruses is necessary to reach the correct conclusion. The investigation has direct relevance where pig herds with a low seroprevalence are encountered during surveillance for CSF.     

猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）等相关疾病的主要病原,主要危害仔猪,引起猪的免疫抑制,造成继发感染。文章对1例病猪通过流行病学调查、临床症状、病理变化、实验室检验,确诊为猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌混合感染,从而进行药物的治疗与预防探索,为该病的诊断和防治提供借鉴和参考。     

猪圆环病毒病的特点

在最近几年中,养猪业遇到了越来越多的疾病,药物使用量显著增加,也使养殖场主、养殖户和兽医师感到非常的困惑。目前已经证实,猪圆环病毒病(Porcine Circovirus diaease,PCVD)在世界上广泛存在。可以引起断奶仔猪助多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎-肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)和猪呼吸系统疾病症候群,给养猪业造成了巨大的经济损失。同时这一疾病常常与其他病毒或细菌性疾病发生混合感染,给猪病的防控带来了极大的困难。本文就猪圆环病毒病的某些特点作一简要论述。     

猪口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病疫苗最佳免疫方法研究

为探索生猪重大疫病的科学免疫方法,确定最佳免疫程序,笔者设计并开展了口蹄疫（FMD）合成肽苗（或灭活苗）、猪瘟（HC）脾淋苗、高致病性蓝耳病弱毒疫苗（或灭活苗）的不同组合注射、单独注射、不同疫苗类型注射的试验研究.结果表明：3种疫苗不同组合注射或单独注射,以及使用不同类型疫苗注射,其免疫副反应均无明显差异;平均免疫抗体效价及群体合格率各组间存有差异;采用猪口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病3种疫苗同时分点注射,以及仔猪首免口蹄疫、猪蓝耳苗,再免疫口蹄疫、猪瘟苗的免疫效果最佳.     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。