甘油为抗冻剂超低温冷冻保存大黄鱼精子的DNA损伤

以甘油(Gly)为抗冻剂、0.5 mL麦细管为冻存管,两步降温法超低温冷冻保存大黄鱼精子,用单细胞凝胶电泳(SCGE)法检测冻精核的DNA损伤。结果表明:以Cortland液为稀释溶液,5%~20%Gly为抗冻剂,超低温冷冻保存大黄鱼精子的效果较佳,冻精活力与鲜精活力无显著差异;Gly浓度为10%,冻精的激活率和运动时间分别达89.93%和8.91min;25%、30%Gly组冻精活力显著下降;SCGE检测显示,Gly浓度5%~20%时,冻精核DNA损伤与鲜精无显著差异,Gly浓度25%及30%时,冻精核DNA损伤与鲜精差异显著;鲜精与冻精的DNA损伤主要表现为轻度和中度损伤,重度损伤比率较低,完全损伤只存在于25%Gly及30%Gly组的冻精中,且比例低。     

版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究

在版纳微型猪近交系（BMI）公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组（P<0.05）;Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液（P<0.05）;在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃ 6 s和50℃ 6 s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃ 30 s（P<0.05）。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃ 6 s或50℃ 6 s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。     

不同抗冻剂对鸡精液冷冻保存效果的影响

本试验精液来自罗曼种公鸡,以6种抗冻剂组合:10%乙二醇(Ethylene Glycol,EG)+5%二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)(胞内抗冻剂组合)、5%EG+10%DMSO(胞内抗冻剂组合)、5%甘油+4%蔗糖(胞内外抗冻剂混合组合)、10%甘油+4%蔗糖(胞内外抗冻剂混合组合)、5%蔗糖+10%聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)(胞外抗冻剂组合)和10%蔗糖+5%PEG(胞外抗冻剂组合)以及基础液配成A1、A2、A3、A4、A5和A6六种冷冻稀释液,进行冷冻保存。结果表明,6种稀释液平均精子冻后活率依次为0.600±0.183、0.600±0.082、0.400±0.083、0.370±0.171、0.100±0.000和0.225±0.150。A1、A2、A3、A4的冻后活率极显著高于A5、A6(P 0.01);其余各组合之间均差异不显著(P 0.05)。     

精液超低温冷冻对羊繁殖率的影响

冷冻造成精子的结构和功能变化是导致繁殖率低的根本原因。笔者通过对比试验,检测精液冷冻后对羊繁殖率的影响。用假阴道法采集3只~4只公羊精液,用Tris稀释液作为冷冻保存液,用TALP作为解冻液,比较精液冷冻前后活力;对同期发情处理的羊只进行鲜精和冻精人工授精,比较两者在受胎率上的变化。结果表明,冷冻前后精子活力分别为74.43%和46.25%,受胎率分别为83.33%和47.06%,说明超低温冷冻通过影响精子内部结构,显著降低了精子活力和受胎率。     

不同缓冲液添加大豆蛋白冷冻奶牛精子试验效果研究

本文为解决奶牛冻精稀释液添加卵黄易污染、易将异源动物体内微生物传染给输精母畜等弊端,进行了两个方面的试验研究:(1)选择含蛋白量高的大豆粉溶液添加Tris缓冲液制成蛋白Tris稀释液,添加磷酸盐缓冲液制成蛋白PBS稀释液,及传统使用的卵黄Tris稀释液,分别冷冻奶牛鲜精,观察解冻后活力;(2)观察蛋白Tris稀释液、蛋白PBS稀释液与卵黄Tris稀释液超低温冷冻奶牛精子解冻后在4℃环境中存活时间。结果表明,蛋白Tris稀释液、蛋白PBS稀释液与卵黄Tris稀释液超低温冷冻的奶牛,细管冻精质量都能符合国家标准,但冷冻效果最佳的是蛋白Tris稀释液。在冷藏4℃下,蛋白Tris稀释液、卵黄Tris稀释液第5天精子活力仍能达到国家标准,蛋白Tris稀释液显微镜下的观察视野要比卵黄Tris稀释液清晰,不易滋长细菌。因此,添加大豆粉溶液制成的蛋白Tris稀释液冷冻奶牛精子的效果最佳,试验证明,植物源稀释液可以替代动物源稀释液。     

鸭精液冷冻保存试验研究

以笼养金定鸭为材料,对鸭精液冷冻保存稀释液、防冻剂进行筛选,并研究了最佳平衡时间和解冻温度,同时还对公鸭精子在抗冻性方面的差异进行了初步探讨.结果发现:以10%二甲基亚砜做防冻剂,精子冻后活力最高,达0.7以上,经小群输精、孵化测定,受精率达65%.平衡时间10 min、解冻温度40C时,鸭精子冻后活力最好.公鸭在精子抗冻性方面存在极显著差异(P＜0.01),因此要在抗冻性方面对公鸭进行选择.     

鸭精液的冷冻保存试验

以笼养金定鸭为试验材料,对鸭精液冷冻保存稀释液、防冻剂进行筛选,并研究了最佳平衡时间和解冻温度,同时对公鸭精子在抗冻性方面的差异进行了初步探讨.结果发现:以10%二甲基亚砜作防冻剂,精子冻后活力最高,达0.7以上,经小群输精、孵化测定,受精率达65%.平衡时间10min、解冻温度40℃时,鸭精子冻后活力最好.公鸭在精子抗冻性方面存在极显著差异(P＜0.01).因此,应在抗冻性方面对公鸭加强选择.     

藏獒冷冻精液保存液配方筛选试验

为了提高藏獒的繁殖力,建立完善的藏獒人工授精体系和保存优秀藏獒精子,本研究对8只藏獒进行了采精和精液的超低温冷冻保存试验,并对藏獒的精液超低温冷冻保存液进行了系统的筛选。结果表明,渗透压450 mOsm/L的配方Ⅴ（葡萄糖1.98 g、蔗糖3.42 g、柠檬酸钠0.59 g、谷氨酸钠0.75 g、三羟甲基氨基甲烷1.21 g、VB6 10 mL、VB12 10 mL、卵黄20 mL和甘油8 mL）对藏獒精液冷冻保存的效果最佳,解冻后精子的活力为0.58,畸形率为17.2%,满足输精和进行超低温冷冻保存精子的要求。     

LDL对绵羊精子冷冻保存效果的研究

绵羊冷冻精液的受精率低于自然交配,其原因之一可能是在冷冻过程中精子质膜损伤严重造成的.该研究以内蒙古细毛羊为试验动物.在稀释液中以低密度脂蛋白(LDL)代替卵黄.分析了冷冻过程中对精子活率、顶体完整率和质膜完整率的影响.筛选出了最优的LDL稀释液配方,以提高绵羊精液质量,减少精子的损伤,为提高绵羊精子冷冻保存后的受精率提供理论依据.     

鸭精液冷冻保存实验

以笼养金定鸭为材料,对鸭精液冷冻保存稀释液、防冻剂进行筛选,并研究了最佳平衡时间和解冻温度,同时本实验还对公鸭精子在抗冻性方面的差异进行了初步的探讨。结果发现,10%二甲基亚砜冻后活力最高,达0.7以上,经小群输精、孵化测定,受精率达65%。平衡时间10min、解冻温度40℃时,鸭精子冻后活力最好。公鸭在精子抗冻性方面存在极显著差异(P<0.01),因此要在抗冻性方面对公鸭进行选择。     

YY超雄黄颡鱼精子保存液和激活液的筛选及在生产上的应用

分别以精子活力和受精率为标准,对5种精子保存液在不同稀释倍数下保存超雄黄颡鱼精子的效果及不同浓度Na Cl激活液的应用效果进行了比较研究。结果表明,B保存液效果最好,精子活力和寿命保持时间最长,8倍稀释液在4℃条件下,96 h内可保持80%以上的活力;低浓度Na Cl溶液能延长精子的寿命,在0.3%Na Cl溶液中激活精子活力最强。本实验筛选的超雄黄颡鱼精子保存液和激活液在全雄黄颡鱼生产中具有良好的推广应用价值。     

海带多糖对猪精液冷冻效果影响的研究

为了寻找一种可较好地保护精子的天然抗冻剂,通过在猪精液的冷冻基础液中添加不同浓度的海带多糖,研究冷冻后猪精子的活率及线粒体活性、精子质膜和顶体的完整性等各项参数指标,探讨不同浓度的海带多糖对猪精液冷冻保存效果。     

猪精子冷冻损伤与保护剂的研究进展

猪精液冷冻保存技术主要是利用液氮(-196℃)作为冷源,在超低温的环境下使精子生理代谢完全暂停,实现长期保存的目的。猪精子在低温环境主要损伤是细胞内结冰晶造成的机械损伤、游离的活性氧造成的化学损伤,对这两种损伤机制研究是国内外科研工作者们的研究热点。文章主要简述猪精液冷冻技术发展简况,精子在冷冻过程中受损伤机制和现阶段应用几种保护剂。     

添加BAM15对英纯血马精液低温及冷冻保存的影响

为研究在马精液稀释液中添加BAM15(一种新型线粒体解耦联剂)对英纯血马精液低温及冷冻保存效果的影响,并探讨低温及冷冻保存马精液时添加BAM15的最适浓度,选取6匹英纯血种公马作为试验动物,以新疆畜牧科学院研发的FZS马鲜精稀释液及冷冻保护液作为基础稀释液(对照组),添加不同浓度BAM15(0、0.05、0.15、0.45、1.50μmol/L)配制低温保存及冷冻保存稀释液,将浓缩处理后的马精液分别置于上述稀释液中进行低温保存及冷冻保存。检测低温保存0、24、48及72 h四个时间段和冻融后的精子运动参数,评价不同浓度的BAM15对马精液低温及冷冻保存效果的影响。结果表明:随着保存时间的延长,在马精液稀释液中添加1.50μmol/L的BAM15对英纯血马的精液低温保存具有最好的效果,可以显著增加精子活力;但在冷冻保存中,添加BAM15与对照组之间相比无明显差异。     

陕北白绒山羊精液冷冻稀释液配方优化

为筛选陕北白绒山羊精液冷冻保存稀释液中最适的甘油及卵黄浓度,试验以三羟甲基氨基甲烷(Tris)6.057 0 g,蔗糖5.134 6 g,果糖1.500 0 g,柠檬酸钠3.318 6 g,青霉素10万IU,双蒸水200 m L配制成基础液,采用双因素正交试验研究不同浓度甘油、卵黄对精液冷冻保存的影响;采用一步稀释法冷冻保存陕北白绒山羊精液,复苏后检测活率、畸形率等确定精液冷冻稀释液最佳配方。结果表明:最佳冷冻稀释液配方为基础液80.5%+甘油6%+卵黄13.5%,精液冷冻、复苏后精子活率达到(37.2±0.5)%,精子畸形率为(11.2±0.5)%,质膜完整率为(64.2±0.5)%,均优于其他组,冷冻效果达到最佳,是保存山羊精液的冷冻稀释液最佳配方。     

卵黄对精子保护作用的机制

在过去的60年里,冷冻精液稀释液的配方发生了很大的变化,但是其中的抗冻剂却始终是卵黄、奶及甘油.由于卵黄在保存、降温、冷冻过程中对精子的保护作用机制仍是不解之谜,因而目前尚无一种有效的可避免污染的化合物来替代他们.     

不同精液冷冻程序对杏花鸡精液冷冻效果的影响

本试验选择BPSE(Blesville Poultry Semen Extender)作为精液稀释液,以二甲基乙酰胺(dimethylacetamide,DMA)和乙二醇(ethylene,EG)2种试剂作为抗冻剂,分别以不同的质量浓度进行组合,对杏花鸡精液冷冻保存的平衡时间、冷冻方式和解冻温度以及时间等影响精液冷冻效果的关键因素进行了研究。结果如下:(1)质量浓度分别为4%DMA和6%EG的抗冻剂对精液保护效果较好,精子冻后活力分别为0.466和0.464,两者之间差异不显著;(2)选择质量浓度为6%EG为抗冻剂,平衡8 min后的精子活力最高,为0.542;(3)在(2)的基础上,选用颗粒冷冻和细管冷冻2种方式冷冻,分别在水浴锅里以40℃、55℃、70℃3个温度解冻。结果表明,用颗粒冷冻在55℃水浴锅里解冻的精子活力最高,为0.482;(4)采用颗粒冷冻和细管冷冻2种方式对新鲜精液冷冻解冻后与新鲜精液一起进行人工授精,捡蛋入孵后统计受精率,细管冷冻、颗粒冷冻以及鲜精的受精率为0、0和92.52%。结论:在本试验中,以6%EG为抗冻剂,在5℃下平衡8 min,用颗粒冷冻的方法在55℃恒温水浴箱内解冻可以使解冻后的精子达到最大的存活率;授精试验效果不佳,表明该程序虽然可以使精子存活,但是对精子有损害作用。     

不同稀释液对藏獒精液保存效果的影响

比较了8种稀释液在藏獒精液冷冻保存和低、常温保存(5 ℃,10 ℃,15 ℃,20 ℃)的效果.结果表明:2号和8号稀释液在冷冻保存时效果最好,精子活力和顶体完整率分别达到0.40和49%,与对照组相比差异显著(P<0.05).在藏獒的低温、常温保存试验中,所有稀释液在15 ℃时保存时间最长,综合考虑,7号液保存效果最好;在15℃时精子平均存活时间为103 h,显著高于对照组和其它稀释液(P<0.05).     

冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂对梅花鹿冻融精子质量的影响

【目的】 探究在冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂代替10%卵黄对梅花鹿精液冷冻保存效果的影响,为梅花鹿人工授精体系的完善提供参考。【方法】 采用电刺激法采集梅花鹿精液,以精液冷冻稀释液中分别添加1%、2%、3%、4%和5%大豆卵磷脂代替10%卵黄作为试验组,添加20%卵黄作为对照组,分别进行各组精液冷冻保存。5 d后,进行精液解冻,检测解冻后各组精子的活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、存活时间,筛选合适浓度的大豆卵磷脂。选取4~5岁健康雌性梅花鹿,肌肉注射300 IU孕马血清促性腺激素（PMSG）和0.4 mg氯前列醇钠进行同期发情处理,发情后第20 h用20%卵黄组与筛选出的大豆卵磷脂组冻精进行人工输精,输精后30 d使用B超检测仪检测妊娠情况,统计妊娠率。【结果】 与对照组相比,1%大豆卵磷脂组冻融后的精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率及线粒体活性均显著提高（P<0.05）;随着稀释液中大豆卵磷脂浓度的增加,其冻融后精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率以及线粒体活性呈下降趋势,精子存活时间也随浓度的增加而减少。1%大豆卵磷脂组冻融精子人工授精梅花鹿的妊娠率为61.11%,高于对照组、2%和3%大豆卵磷脂组,但差异均不显著（P>0.05）。【结论】 在梅花鹿精子冷冻稀释液中添加1%大豆卵磷脂替代10%卵黄,能有效提高梅花鹿冻融精子的质量,为进一步筛选新型梅花鹿精液冷冻稀释液提供理论基础。     

野生盘羊与巴什拜羊杂交F1代精液冷冻保存技术研究

为了充分利用野生动物资源,本试验首次对野生盘羊与巴什拜羊杂交F1代公羊精液低温和冷冻保存方法进行了研究。结果:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存F1代羊精液,其中采用葡萄糖-蔗糖-柠檬酸钠-卵黄稀释液(III液)低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄稀释液(II液)(72 h,0.30)、葡萄糖-乳糖-卵黄稀释液(IV液)(48 h,0.35)和葡萄糖-乳糖-卵黄稀释液(I液)(18 h,0.42);采用4种不同冷冻稀释液制作杂交F1代公羊细管冻精,用III液冷冻保存后解冻效果最佳,解冻后精子活率为(48.6±0.4)%,畸形率为(11.20±2.02)%、顶体完整率为(58.4±3.68)%。