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正上海兽医所发现p53基因的作用近日,中国农业科学院上海兽医研究猪呼吸道传染病创新团队研究发现,肿瘤抑制因子p53具有抵抗单增李斯特菌感染的作用。该项研究通过比较单增李斯特菌对p53基因敲除小鼠和正常小鼠的致病性,发现p53基因敲除小鼠的死亡率和病理变化程度均显著高于正常对照组小鼠。细胞感染试验进一步证实了p53可以抑制单增李斯特菌在细胞内的感染     

p53基因与肿瘤形成

肿瘤抑制基因的研究已经成为继癌基因之后肿瘤遗传学、分子生物学领域的前沿和热点,尤其是抑癌基因p53越来越被人们重视。研究表明正常的p53,又称野生型p53,在细胞损伤后的修复过程中发挥重要作用。正常p53的功能像"分子警察"一样监视着基因组DNA的完整性。在细胞发生DNA损伤时,p53蛋白能使细胞分裂终止在G1/S期,以使细胞有足够的时间修复损伤,恢复正常状态。若不能修复,野生型p53还能启动细胞的凋亡过程从而引发细胞的程序性死亡,阻止具有癌变倾向的突变细胞产生。而突变型p53基因会导致肿瘤的发生,大多数肿瘤与p53的突变有关。文章着重阐述了p53的表达与突变、p53的稳定调节及p53的转录调控等。     

Tet-On系统调控p53稳定表达的H1299细胞系的建立与应用

应用Tet-on系统和H1299细胞,建立了p53诱导表达的H1299细胞系p53-Tet H1299,p53表达受强力霉素(doxycycline,Dox)调控,存在一定的剂量依赖性。诱导表达的p53蛋白有很好的核定位能力和转录活性,能显著上调p21、TLR3、Bax等多种p53转录激活的下游靶基因表达,同时还可显著抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的复制,说明p53-Tet H1299可作为研究p53抗病毒作用的细胞模型。p53诱导表达细胞系的建立为进一步研究p53抗病毒作用机制、转录调控基因的筛选及其他生物学功能研究提供了很好的研究工具。     

上海兽医所发现p53基因具有抵抗细菌感染作用

正近日,从中国农业科学院上海兽医研究所获悉,猪呼吸道传染病创新团队研究发现肿瘤抑制因子p53具有抵抗单增李斯特菌感染作用,并阐明了其调控宿主免疫反应帮助宿主逃避细菌感染的作用机制。肿瘤抑制因子p53参与机体的先天性免疫和获得性免疫应答,从而发挥抗病毒感染作用。此项研究成果阐明p53通过转录调控宿主的先天性免疫反应发挥抗单增李斯特菌感染的作用机制,开辟了p53抗细菌感     

p53基因及其在家禽肿瘤性疾病应用研究进展

抑癌基因p53作为一种转录因子,通过调控其靶基因在应激反应中启动的不同生物学过程,包括细胞凋亡、细胞周期阻滞或衰老等,发挥其在肿瘤抑制中的作用。近年人类医学对p53基因进行研究的较多,但是动物医学文献中有关p53基因的研究报道相对较少。论文就国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、应用、检测等方面的研究进展以及在禽病中的表达和应用进行综述,为家禽肿瘤性疾病的诊治提供参考。     

p53调控Nfkbiz基因表达的研究

核因子-κB（NF-κB）在炎症反应中起着关键的促进作用,并且受其他多种因素的调节。Nfkbiz基因编码的IκB？蛋白是IκB家族成员之一,在炎症反应中起着调节NF-κB的作用。本研究采用荧光实时定量PCR分析Nfkbiz基因的表达情况,发现在p53特定刺激源作用下Nfkbiz基因mRNA丰度显著降低。分析Nfkbiz基因序列,发现其基因中存在可能的p53反应元件,通过构建荧光素酶报告质粒及双荧光素酶报告试验和染色质免疫共沉淀试验,证明Nfkbiz基因中含有p53反应元件并且受p53蛋白调节。以上结果初步证明Nfkbiz是受p53蛋白负向调控的靶基因。     

去乙酰化酶SIRT1及其对细胞凋亡调控的研究进展

细胞凋亡在机体生理功能中起着重要作用,是机体清除体内损伤、衰老及具有潜在威胁性细胞的一种基本方式。沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 2 homolog 1,SIRT1)作为哺乳动物Sirtuin家族的一员,自发现以来作为重要的调控因子被广泛研究;最近研究报道SIRT1调控一系列转录因子如p53、FOXO家族和NF-κB,在细胞凋亡中起关键的作用。作者主要阐述了SIRT1的分子生物学特性、表达调控及SIRT1与细胞凋亡的关系。     

鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控的分子机制

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53的表达水平和活性均显著升高。p53过表达可以抑制IBDV的复制,并激活鸡体抗病毒天然免疫基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的表达水平上调;抑制p53的表达则得到相反的结果;表明p53可以激活鸡体的抗病毒天然免疫反应发挥抗IBDV感染作用。利用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现,gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR;荧光定量RT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-2127可以使p53的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-2127过表达可以使鸡体的抗病毒天然免疫基因表达降低,IBDV复制水平升高。本研究表明:gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR调控p53的表达从而影响其下游抗病毒天然免疫基因的表达来发挥抗IBDV感染的作用。     

p63基因及其与肿瘤的关系研究进展

p63基因是肿瘤抑制基因p53家族的成员之一,与p53基因有高度的同源性。基因结构复杂,有两个不同的启动子和多种内含子剪接方式,能编码多种亚型的蛋白质,而这些p63蛋白在不同的组织不同的发育阶段发挥着不同的生物学作用。文章就p63基因的结构、功能及其与肿瘤的关系作一综述。     

鸡源p53单克隆抗体的制备和鉴定

转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p53蛋白。经SDS-PAGE分离,收集p53蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用免疫印记、间接免疫荧光和酶联免疫吸附法筛选阳性细胞株。共获得6株稳定分泌鸡p53蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、3C4、4D4、4F6、4F7和4H2,均为Ig G亚类,并鉴定了1D7的特异性。本研究成功实现了鸡源p53蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,为研究p53在鸡体内的生物学作用奠定了基础。     

p53和TGF-β在细胞生长调控中的相互作用及其与疾病的研究进展

肿瘤抑制因子p53是第一个被发现的肿瘤抑制因子蛋白家族成员,该蛋白家族能感知许多细胞信号以调节细胞增殖、凋亡和分化。TGF-β是机体内重要的生理生化调节因子,在机体细胞生长分化、胚胎发育、创伤修复等方面发挥重要作用。p53与TGF-β信号转导密切相关。作者对近年p53与其依赖的TGF-β在细胞生长调控方面的相互联系研究进展作一简要综述。     

磷酸酶Wip1基因敲除表型及机制研究进展

野生型p53诱导的磷酸酶1(Wild-type p53-induced phosphatase1,Wip1)是PP2C(The type 2Cfamily of protein phosphatases)磷酸酶家族中的一员。在DNA损伤修复中起重要作用,并作为原癌基因受到越来越多的关注。Wip1敲除小鼠虽然能够存活,但寿命缩短,并出现多系统异常,包括生殖系统、免疫体系、内分泌系统、神经系统等,具体表现:雄性生殖器官萎缩及雄性不育、对病原体敏感、T细胞和B细胞功能受损、胰岛素抵抗、体重增长受限、脂肪量减少、焦虑和抑郁样行为增加等。相关机制研究发现,Wip1通过去磷酸化不同蛋白底物而在多种生理和病理过程中发挥重要作用。本文旨在对小鼠Wip1基因缺失所致表型及其初步的分子机制进行综述,为进一步研究Wip1的生物学功能以及哺乳动物体内生理和病理过程的发生机制提供参考。     

检测p53基因诊断犬乳腺恶性肿瘤的初步研究

研究犬乳腺恶性肿瘤p53基因在体内的表达,探讨其与犬乳腺肿瘤恶性程度的相关性。根据GenBank中犬p53基因序列以及文献报道的高度保守区域,设计1对引物,同时以GAPDH基因序列作为内参,将临床采集的犬乳腺肿瘤组织进行p53基因PCR检测,分析p53基因的表达量变化趋势。结果表明,良性肿瘤组织p53基因的表达量极小;恶性肿瘤组织中的表达量随着其恶化程度明显增高。由此可推断,检测p53基因的表达量可作为诊断犬乳腺肿瘤、判断肿瘤恶化程度及预后的一个重要指标。     

蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理研究

【目的】探索蜂毒肽抗HSV-1病毒作用的机理。【方法】体外实验测定蜂毒肽对HSV-1病毒的杀死作用,病毒吸附、合成和释放的抑制作用,考察蜂毒肽对p21 WAF1/CIP1和p53蛋白表达的调节作用。【结论】研究结果表明,蜂毒肽没有直接杀死HSV-1病毒的作用,但是对HSV-1病毒的吸附、合成和释放均有明显的抑制作用,蜂毒肽调节可用p21 WAF1/CIP1和p53蛋白表达,调节细胞周期,保护细胞DNA免受HSV-1的损伤。     

不同长度的聚肌胞对SPF鸡固有免疫增强作用的研究

聚肌胞(poly I:C,p IC)作为强干扰素诱生剂,在人类医学上被用作抗病毒和抗肿瘤药物。已有的研究表明,聚合长度不同的p IC对哺乳动物细胞的免疫增强作用不同。为明确p IC的聚合长度是否会影响其对鸡的固有免疫增强作用,本研究将低分子量p IC(0.3 kb~1 kb)和高分子量p IC(6 kb~8 kb)分别肌肉注射1月龄的SPF鸡,各设置2个p IC浓度梯度。在p IC作用后的6 h、12 h、24 h和36 h,分别采集EDTA抗凝血,分离外周血淋巴细胞(PBL),通过荧光定量PCR方法检测PBL固有免疫信号通路相关基因的转录水平变化。结果表明,低和高分子量范围的p IC刺激SPF鸡后均可以迅速激活鸡体固有免疫应答,引起TLR3、MDA5、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6和IL-17等免疫相关基因转录水平的上调。该结果与哺乳动物模型的研究报道截然不同,而与本实验室以多种鸡源细胞为模型的研究结果相似。10μg/kg(质量/体质量)的p IC即可以引起PBL固有免疫相关基因转录水平上调,而且大部分基因在p IC刺激后6 h即达到转录峰值,表明p IC作为鸡用免疫增强剂的高效性。总之,本研究表明短链和长链p IC均可用作鸡免疫增强剂。     

流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对MDM2和p53蛋白的影响

采用Hoechst 33258染色和流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western-blot方法研究了MDM2和p53等蛋白表达的情况.结果表明,100 TCID50/0.1 mL剂量病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,死亡细胞比例随感染进程逐渐增加.在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,MDM2蛋白表达下降,p53和p-p53表达上升,其下游p21蛋白也被激活.可见,p53及其下游p21蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,同时通过下调MDM2蛋白表达促进了p53蛋白诱导的细胞凋亡.     

鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎后期高死亡率与肌肉组织中bcl-2和p53表达量的关系

为研究鸡、鹌鹑和杂交种胚胎后期高死亡率与肌肉组织中bcl-2和p53表达量的关系,运用实时荧光定量PCR技术检测鸡、鹌鹑和杂交种胚胎后期肌肉组织中细胞凋亡因子bcl-2和p53的相对表达量.结果显示bcl-2和p53在杂交种中的相对表达量更接近于其父本鸡的表达量,表明杂交种胚胎后期出现高死亡率与肌肉组织中bcl-2和p53的表达量无关.     

硒对氟所致鸡睾丸组织p53 mRNA表达的影响

为了探讨硒颉颃氟致公鸡生殖毒性的效应,以公鸡为试验动物,在日粮中添加一定浓度的氟及硒与氟,检测公鸡氟中毒时睾丸组织p53 mRNA表达情况及硒颉颃效应,应用半定量RT-PCR法检测鸡睾丸组织内p53 mRNA表达水平,结果表明氟能增加睾丸组织内p53 mRNA的表达水平,进而诱导生殖细胞凋亡,硒能颉颃氟所致的睾丸组织p53 mRNA表达量的增加,从而减轻氟所致生殖细胞的凋亡.     

人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.     

玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢组织p53和NF-κB的表达

10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5mg/kg玉米赤霉烯酮(ZEA)玉米油溶液,分别于攻毒后3,6,12,24,48,72,96 h剖杀取卵巢组织,检测不同时间卵巢组织中p53和NF-κB的表达.病理组织学观察发现卵巢组织出现不同程度损伤,卵泡颗粒细胞凋亡.免疫组化结果表明试验组与对照组卵巢组织中均有p53和NF-κB的表达,并且随着时间的推进呈现动态变化.试验组p53在3,6,12h时表达量上调,12 h后表达量逐渐下降,各试验组与对照组相比较均差异显著(P＜0.05).NF-κB在3h表达量最高,而后表达量开始降低,各试验组与对照组相比较差异均显著(P＜0.05).大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡,且p53和NF-κB在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡发生过程中起着一定作用.