猪流行性腹泻病毒适应Vero细胞培养及以传代细胞毒制备氢氧化铝灭活疫苗免疫效力试验

采用在病毒培养液中加５～１０μｇ／ｍｌ胰酶的培养方法，将猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）ＣＶ＿（７７７）适应于Ｖｅｒｏ细胞，并传４５代．细胞病变规律．经免疫荧光检查阳性，电镜观察可见典型冠状病毒粒子，猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）免疾荧光检查阴性，猪流行性腹泻（ＰＥＤ）血清可抑制细胞病变（ＣＰＥ）．ＰＥＤＶＣＶ＿（７７７）毒株１１、２５、２８、４０及４４代传代毒的毒价分别为１０￣（３．５）、１０￣（５．５）、１０￣（６．５）、１０￣（７．０）和１０￣（７．０）ＴＣＩＤ＿（５０）／０．３ｍｌ。以１１、２１及２２代的毒１０ｍｌ头口服接种未吃初乳仔猪，可使之典型发病，免疫荧光及电镜观察均呈阳性．分别以２５、２８及３１代毒０．５ｍｌ／头、１ｍｌ／头、２ｍｌ／头口服接种３日龄仔猪１８头．除０．５ｍｌ组有１头反应外，均未发病，攻毒试验的总保护率为８７．５％，对照组１００％发病．以２８代毒制备氢氧化铝灭活苗，后海穴位接种，主动免疫组８５．１９％保护，被动免疫组８５％保护，对照组１００％及９２．３％发病．     

猪流行性腹泻弱毒株的培育

用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒，传代毒８３代之后适应仔猪肾原代细胞，自９０年代起进行了５次克隆纯化，克隆是２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上，再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）以８３－７斑５株继续传代并做系列试验，传代毒的毒价为１０＾７．０～１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／０．３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位，克隆后５代（总代次１０４代）     

猪细小病毒生物学特性研究

应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０＾－７．９／ｍｌ和１０＾－６．８／ｍｌ经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ＾３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量     

鸡传染性法氏囊病Vero细胞弱毒疫苗免疫效果的研究

鸡传染性法氏囊病Ｖｅｒｏ细胞弱毒疫苗病毒滴度为１０＾７．３－１０＾８．３ＴＣＩＤ５０／０．０５ｍｌ。疫苗经皮下，肌肉，点眼－滴鼻和口服途径免疫接种雏鸡，均表现出良好的免疫原性。皮下接种１４日龄雏鸡，免疫后８，１４和２１天攻毒，保护数分别为２／６，６／６和５／６，如在３５日龄再加强免疫一次，于二免后７０天和１１５天攻毒，其保护数分别为６／６和５／６。疫苗的最小免疫剂量为１０＾５ＴＣＩＤ５０／只，用１     

对新城疫CS2株与4株疫苗毒株有关性能的比较

对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）中等毒力毒株ＣＳ２株、ＮＤⅠ系、Ｒｏｋｉｎ、Ｋｏｍｅｒｏｖ和低毒力ＬａＳｏｔａ株病毒的脑内致病指数（ＩＣＰＩ）、鸡胚的半数感染量（ＥＩＤ５０）等指标进行了测定,结果是ＩＣＰＩ分别为１．２７～１．５２、１．６６～１．７０、１．４６、１．４３和０．２９～０．５;ＥＩＤ５０分别为１０＾７．５、１０＾７．５≥１０＾８．５、１０＾＾７．９和≥１０＾８．５／０．１ｍｌ。用１０倍剂量的ＣＳ２株病毒注射１月龄和１．５月龄ＳＰＥ雏鸡,均安全无不良反应,测定ＣＳ２株病毒保存期,结果在－２０℃保存６年的鸡胚２代（Ｅ２）、鸡胚６代（Ｅ６）、鸡胚１０代（Ｅ１０）毒的ＥＩＤ５０均≥１０＾７．５／０．１ｍｌ。ＮＤＣＳ２株病毒的各项指标均在中等毒力范围内,对鸡胚的半数感染量仍保持原毒（Ⅰ系）的特性,ＩＣＰＩ比原毒有所下     

用单克隆抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株

应用ＰＲＲＳＶ单克隆抗体,采用直接与间接免疫荧光抗体试验对分离获得的ＰＲＲＳＶ６个毒株进行了鉴定,结果所有分离毒株均能被单克隆抗体（ＳＤＯＷ１７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ）所识别,呈现特异荧光,６个分离毒株均能与仅识别美洲型ＰＲＲＳＶ的单克隆抗体Ｆ反应,结果表明６个分离毒株均属于美洲型ＰＲＲＳＶ。利用微量细胞培养对分离毒株ＴＣＩＤ５０测定结果表明,６个分离毒株的ＴＣＩＤ５０分别为１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．５／０．１ｍｌ、１０－７．７５／０．１ｍｌ、１０－７．２５／０．１ｍｌ、１０－６．２５／０．１ｍｌ。病毒感染细胞的超薄切片电镜观察表明,在感染细胞浆内可见典型的ＰＲＲＳＶ病毒粒子,呈球形或椭圆形,直径约为６０ｎｍ左右,可见囊膜。     

兔轮状病毒致细胞病变株的分离鉴定

用ＭＡ－１０４细胞培养，结合电镜和ＲＮＡ电泳检查，自幼兔腹泻粪便中分离鉴定出一株致细胞病变的兔轮状病毒ＡＤ７．４株，该株传至第４代时，于３６小时开始出现细胞病变效应（ＣＰＥ）；传至第７代时，于２４小时ＣＰＥ达７５％，以上，且病毒滴度为１０＾５．０ＴＣＩＤ５０／０．１ｍｌ。     

双癸甲溴铵洗消剂对常见病毒消毒试验观察

１　材料与方法１１　动物　３～４日龄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ乳鼠,公母各半。１２　双链季铵盐洗消剂　由徐州法尔达日用化工公司赠送,有效成分双癸甲溴铵含量为１０％。１３　ＨＢｓＡｇＫｉｔ　用于常规ＥＩＡ检测ＨＢｓＡｇ,从上海科华生物技术公司购买。１４　病毒　口蹄疫０型乳鼠组织毒（ＦＭＤＶ）,滴度为１０－７ＬＤ５０／ｍｌ;猪水泡病乳鼠组织毒（ＳＶＤＶ）,滴度为１０－８ＬＤ５０／ｍｌ;鸡新城疫Ⅰ系病毒（ＮＣＶⅠ）,ＥＩＤ５０＞１０８３／ｍｌ。上述病毒均由南京农业大学提供。１５　中和剂…     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

猪流行性腹泻病毒适应Vero传代细胞试验

在细胞培养液中加胰酶，使猪流行性腹泻病毒成功地适应于Ｖｅｒｏ传代细胞，第６代开始培养液中不含胰酶，仍可稳定出现易于判定致细胞病变作用，第８代毒价达８．０／０．１ｍｌ。     

绵羊进行性肺炎驴胎皮肤细胞毒株的育成及应用

绵羊进行性性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）在驴胎皮肤细胞（Ｄ细胞）上连续快速传代培养至１１３代，高代次病毒接Ｄ细胞后２４小时可引起璀为，至５－６天时大部分贴壁细胞脱。病毒滴度为１０＾１１．５１ＴＣＩＤ６０／０．１ｍｌ，不同代次的ＯＰＰＤＶ经电镜超薄切片观察，病毒粒子呈球形，直径８０－１２０ｎｍ，分布于细胞外及胞浆空胞中，在胞浆膜上可见到，出芽增的病毒。用ＯＰＰＤＶ生产抗原产量高，其特异性，敏感怀与绵羊胎肺细     

鸡传染性法氏囊病Vero细胞弱毒疫苗免疫效果的研究

鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）Ｖｅｒｏ细胞弱毒疫苗（ＶＣＶ９０１）病毒滴度为１０￣（７．３）～１０￣（８．３）ＴＣＩＤ＿（５０）／０．０５ｍｌ．疫苗经皮下、肌内、点眼－滴鼻和口服途径免疫接种雏鸡，均表现出良好的免疫原性。皮下接种１４日龄雏鸡，免疫后８、１４和２１天攻毒，保护数分别为２／６、６／６５／６，如在３５日龄再加强免疫一次，于二免后７０天和１１５天攻毒．其保护数分别为６／６和５／６．疫苗的最小免疫剂量为１０￣５ＴＣＩＤ＿（５０）／只，用１０、５０和１００培免疫剂量免疫雏鸡，临床表现均安全，不影响雏鸡增重．经易感雏鸡连传５代，疫苗毒力不返强．温苗在－２０℃～－２５℃至少保存一年，在０℃可保存一周，疫苗对鸡无致瘤性．     

火鸡疱疹病毒（HVT）抗血清的制备及检测

制备２批抗火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）血清，无菌检验合格，与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）和Ｒｅｏ无交叉中和反应。蚀斑减少试验结果表明当病毒含量为１０个、５个羽份／０．１ｍｌ时，中和后尚有一些蚀斑存在。病毒含量为３．３羽份／０．１ｍｌ或更低时，中和后未见典型蚀斑存在     

乙型脑炎病毒HW1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的鉴定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学，免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＤ－２１细胞感染滴度≥１０＾６．１５ＴＣＩＤ５０；对８－９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０＾７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的的性，无外源性污染。     

猪流行性腹泻弱毒株的培育

用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒。传代毒８３代之后适应了仔猪肾原代细胞。自９０代起进行了５次克隆纯化,克隆是在２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上,再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）。以８３７斑５株继续传代并做系列试验。传代毒的毒价为１０７．０～１０７．５ＴＣＩＤ５０／０３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位。克隆后５代（总代次１０４代）～２５代的５批次主动免疫试验的总保护率为９５９２％（４７／４９）,对照组８８８％（１６／１８）发病。克隆后１７代～４０代的８批次被动免疫试验的总保护率为９６２％（７６／７９）,对照组１００％（１０／１０）发病。以克隆后２５代（总代次１２５代）进行稳定性试验,经６代次返祖传代毒力未返强,仍是稳定的,已符合弱毒株的标准。在与ＴＧＥ弱毒株组合制备的二联弱毒苗的初步田间试验中取得良好效果。     

^60CO—γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ＾６０ＣＯ－γ射线辐照和高压熏（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后中料营养成分于试验后７天进行分析，辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０．０、０、０、０、。辐射后ＶＢ６、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５     

野牦公牛血液生理指标测定

对青海省大通种牛场饲养的４头野牦公牛的９项血液生理指标进行测定。结果：ＲＢＣ１０．０±０．７４（１０＾１２／Ｌ），Ｈｂ１４４．５±１０．３（ｇ／Ｌ），ＰＣＶ０．４７±０．０３（Ｌ／Ｌ），ＷＢＣ１１．１５±１．０９（１０＾９／Ｌ），ＷＢＣ－ＤＣ（％）嗜酸性白细胞７．５０±３．４０，杆状核嗜中性白细胞０．２５±０．５０，分叶核嗜中性白细胞４４．２５±１３．５７，淋巴细胞４７．２５±１３．４３，单核细胞     

鸡新城疫,支气管炎,法氏囊病三联细胞弱毒的培育及免疫原性研究

根据某些不同类型的病毒能感染同一宿主细胞不同部位，并产生各自特征性病变和独立复制的原理＾⑴，笔者将鸡新城疫（ＮＤ）、支气管炎（ＩＢ）、法氏囊病（ＩＢＤ）三株弱毒以不同的接种剂量、接种比较和接种程序，成功地共同感染鸡全胚细胞（ＣＥ），达到了在同一宿主细胞上同时增殖三株弱毒的目的。三联细胞毒中三株弱毒的半数感染价：新城疫病毒（ＮＤＶ）鸡胚半数感染价（ＥＩＤ５０）为１０＾７．２３／０．１ｍｌ，细数半数感     

新城疫V4株弱毒变种的选育

应用有限稀释法通过ＳＰＦ鸡胚传代，从新城疫Ｖ２弱毒中克隆出一个变各，即２０代以后的继代毒，命名为新城疫Ｖ４克隆２０弱毒株，（ＮＤ－Ｖ４Ｃ２０）。毒以１０＾－１－１０＾１３×０．１ｍｌ接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚尿囊腔１５０小时内，鸡胚极少死亡。每个滴度５个胚有尿液均可凝集鸡红血球。第１０代和第２０代的每个滴度５个胚有的混合尿液以１０＾－６×０．５ｍｌ一次饮水免疫鸡，即能引起ＨＩ抗体反应，也能抵抗新城疫强     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒对吃初乳前的小猪以８￣１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定、达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。