鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究

为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。     

鸡IL-1β、IL-2、IFN-γ和MGF对表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒免疫效力的影响

将10日龄的SPF鸡和15、28日龄的商品鸡分别随机分组,同时免疫不同剂量的rFPV-HN（表达NDV HN基因重组鸡痘病毒）和表达不同细胞因子（IL-1β、IL-2、IFN-γ、MGF）的重组鸡痘病毒（rFPVs）。在免疫后不同时间,通过检测血液中抗NDV的HN蛋白抗体、脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞的变化及攻毒保护率等指标。结果表明：IL-1β或IFN-γ在免疫后期能促进抗HN间接ELISA抗体的滴度上升,而且产生抗体的整齐度好;IL-1β或IL-2可以显著增加脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞含量;IL-1β、IL-2或IFN-γ同样可以提高商品鸡攻毒后的存活率。IL-2和IFN-γ在增加脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞的数量及攻毒保护方面表现出一定的协同增强作用。     

中草药制剂对鸡免疫器官发育及脾脏中免疫因子表达的动态影响

试验旨在探究复方中草药制剂对黄羽肉鸡育雏期间免疫器官指数及脾脏中IL-2、IL-4、IFN-γ因子表达的动态影响。选取1日龄健康黄羽肉鸡450只,随机分成3个处理组(对照组、抗生素组和中草药组),每个处理5个重复,每个重复30只。分别在21、35、49日龄测定鸡免疫器官指数和脾脏细胞中IL-4、IL-2、IFN-γ的动态表达量。结果显示:中草药组的免疫器官指数显著高于对照组(P<0.05),血清中免疫球蛋白IgG含量与对照组相比显著增加(P<0.05);中草药制剂组黄羽肉鸡脾脏中的IL-4 mRNA表达量在35日龄显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),IL-2和IFN-γmRNA表达量在试验期呈增加趋势,其表达量在49日龄时中草药组显著高于对照组和抗生素组(P<0.05),说明复方中草药有提高免疫细胞因子mRNA表达量的作用。试验结果表明,基础日粮中添加复方中草药对黄羽肉鸡免疫器官发育和细胞免疫水平有不同程度的促进作用。     

鸡鼻黏膜及其淋巴组织发育的组织学观察

为了观察不同日龄鸡鼻黏膜及其淋巴组织(NALT)的形态结构,从而了解其不同时期的免疫状态。选择不同日龄的鸡胚和雏鸡,每个时期取3只鸡胚或雏鸡的鼻组织制成冰冻切片,片厚5μm,然后进行H.E.染色。结果发现,胚胎18日龄即可辨认鼻腺结构;出壳后1日龄时,鼻内黏膜形态结构发生变化,表面形成假复层柱状纤毛上皮;7日龄时,鼻泪管口处首先出现淋巴集合体(NALT);21日龄时,鼻后孔处呼吸黏膜中也形成了发达的NALT,且初次发现淋巴小结,此外在鼻甲黏膜中也形成明显的NALT;35日龄时,鼻黏膜厚度显著增加,几乎达到成熟水平,鼻腺管周围也出现NALT,而且在鼻腺管上皮下存在大量弥散性淋巴细胞。表明鸡鼻黏膜以及NALT的组织结构随着日龄增长逐渐发育成熟,并在35日龄时基本达到成熟水平。     

鸡免疫器官中Th1和Th2型细胞因子mRNA转录水平的比较

为了研究鸡免疫器官中细胞因子的基础转录水平,本试验采用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,检测56日龄鸡免疫器官中Th1类细胞因子及Th2类细胞因子的m RNA相对表达量并进行比较。结果显示,4种细胞因子在盲肠扁桃体中的表达水平均高于腔上囊。脾脏中细胞因子表达水平总体上较同为外周免疫器官的盲肠扁桃体低。胸腺、脾脏与腔上囊中IFN-γ与IL-4的表达呈负相关性。研究表明,盲肠扁桃体作为可直接参与免疫反应的外周免疫器官,其免疫活性可能较中枢免疫器官腔上囊更高。IFN-γ与IL-4作为最具代表性的Th1与Th2类细胞因子,其表达表现为相互抑制。     

重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

通过研究重组白细胞介素-2（IL-2）对口蹄疫病毒（FMDV）多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为 FMDV 表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性 Balb／c 小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪 IL-2的重组腺病毒（rAd5poIL-2）和串联表达 FMDV 多表位基因的重组腺病毒（rAd5EGS）,第2、3和4组分别注射 rAd5EGS、灭活疫苗和 PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过 ELISA 检测血清中特异性 IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型 IgG1、IgG2a 及细胞因子 IL-4和 IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT 法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2和rAd5EGS 既能增强 rAd5EGS 诱导小鼠特异性 IgG、IgG1和 IgG2a 的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2后能增强 rAd5EGS 诱导小鼠 IL-4和 IFN-γ的分泌,且其诱导 IL-4和 IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组 IL-2能有效增强FMDV 多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为 FMDV 表位疫苗的候选佐剂。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP1对猪体免疫抑制作用

为了研究高致病性PRRSVNSP1蛋白的免疫作用,本研究将高致病性PRRSVNSP1重组腺病毒（rAd—NSP1）接种体外培养的猪肺泡细胞（PAM）,用实时荧光定量PCR和ELISA方法分别检测IFN-γ和IL-10水平,结果为rAd—NSP1接种PAM细胞72h后可显著降低细胞上清中IFN-γ的水平,而IL-10的含量显著提高。将rAd—NSP1接种无PRRSV感染的30日龄商品仔猪,分别检测其外周血液淋巴细胞增殖作用和IFN-γ与IL-10的水平,结果显示,NSP1可显著减低淋巴细胞增殖和IFN-7的表达,同时诱导产生较强的IL-10反应。采用无PRRSV感染的30日龄商品仔猪免疫猪瘟疫苗后1周接种rAd—NSP1,结果猪瘟抗体的水平明显低于wtAd组（P〈0．05）,证明高致病性PRRSVNSP1蛋白具有免疫抑制作用。     

不结球白菜提取物对肉鸡脾脏IL-2、IL-4及IFN-γ mRNA表达的影响

本研究旨在探讨不结球白菜提取物(NCCE)对肉鸡脾脏细胞因子mRNA表达水平的影响。选取1日龄健康AA肉鸡180只,随机分为6个处理,每个处理3个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,处理组分别在基础日粮中添加100、300、500、700、900 mg/kg NCCE,试验期为42 d。采用实时荧光定量PCR检测NCCE对肉鸡脾脏组织中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)及γ-干扰素(IFN-γ)mRNA的相对表达量。结果表明,与对照组相比,300、500、700、900 mg/kg处理组显著提高了鸡脾脏IL-2、IL-4 mRNA表达水平(P0.05);500、700、900 mg/kg处理组显著提高了IFN-γmRNA表达水平(P0.05);与700 mg/kg处理组相比,500 mg/kg处理组IL-2、IL-4及IFN-γmRNA表达量具有增加的趋势(P0.05)。NCCE能够诱导肉鸡脾脏IL-2、IL-4及IFN-γmRNA的表达,基础日粮中添加500 mg/kg效果最好。     

黄芪多糖对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响

探讨黄芪多糖(APS)对犬脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达的影响。10μg/mL APS作用于ConA或LPS刺激的犬脾淋巴细胞,RT-PCR方法检测相关细胞因子mRNA表达。结果表明,APS对IL-2、IFN-γ和TNF-αmRNA表达有显著增强作用,促进IL-2和IFN-γmRNA表达的效果显著优于ConA,而对IL-4 mRNA表达没有明显影响;在上述相关细胞因子mRNA表达抑制时,APS能使其表达显著提高。结论:APS通过对犬脾脏T淋巴细胞Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达的整体调节来促进细胞免疫。     

混饮低剂量ChlFN-α对肉鸡细胞免疫功能及细胞因子水平的影响

本实验研究低剂量鸡α-干扰素(ChtFN-α)对内鸡细胞免疫及细胞因子水平的影响.15日龄肉鸡连续混饮0.1 IU/mL、1 IU/mL和10 IU/mL剂量的ChIFN-α,分别在混饮后14 d和21 d翼静脉采取血样,采用中性红.结晶紫联合测定白细胞总数,经典方法进行白细胞分类计数,MTT比色分析法测定淋巴细胞转化能力,LDH释放法测定NK细胞的杀伤活性,双夹心ELISA法测定血清中IFN-γ、IL-4、IL-12水平.结果显示肉鸡连续混饮ChIFN-α后,能显著提高白细胞总数、淋巴细胞百分比和血清中IFN-γ水平,对IL-4、IL-12的浓度水平影响不显著,但提高IFN-γ/IL-4的比例,对淋巴细胞增殖和NK细胞的杀伤活性影响不明显.试验表明,混饮低剂量ChlFN-α后可调节肉鸡的细胞免疫功能及细胞因子水平,增强肉鸡的抗病能力.     

地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子mRNA表达影响

探讨地锦草总黄酮对小鼠免疫功能及细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA表达影响。将小鼠随机分成4组：地锦草总黄酮高剂量组（H组）、中剂量组（M组）、低剂量组（L组）和纯水对照组（C组）,连续灌胃9 d后,检测其单核巨噬细胞吞噬功能、2%绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应、肝脏指数和脾脏指数,并用逆转录酶-聚合酶链式反应的方法检测脾脏IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平。结果显示,地锦草总黄酮3个剂量组脾脏指数、廓清指数（K）、吞噬指数（α）、24 h足跖增厚值均显著高于C组;M组和H组肝指数显著高于C组（P〈0.01）;3个剂量组均能提高IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA的表达水平,与C组相比,H组最显著。试验结果表明,地锦草总黄酮能有效提高机体的免疫功能及IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-αmRNA表达。     

鸡发生传染性腺胃炎后IL-2及IFN-γ的动态变化

鸡传染性腺胃炎是一种病因复杂的传染性疾病,为揭示鸡传染性腺胃炎的发病和免疫机理,采用双抗体夹心ELISA法对来源于山东省某肉鸡场21日龄患病鸡进行白细胞介素2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)水平检测。结果表明:患病鸡IL-2、IFN-γ的含量较健康鸡明显降低,说明细胞因子IL-2和IFN-γ参与了鸡传染性腺胃炎的病理损伤过程,其含量的高低对于判断病情可能具有重要的参考价值,并且其产生过多或不足对于机体的病理生理学也具有重要的意义。     

刺五加多糖对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响

研究刺五加多糖(ASPS)对鸡淋巴细胞体外增殖及细胞因子mRNA表达水平的影响。将不同浓度的ASPS添加到体外分离培养的血液淋巴细胞中，采用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖变化，以实时荧光定量PCR方法检测淋巴细胞细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-αmRNA表达水平。结果显示，ASPS可以单独或协同植物血凝素(PHA)或脂多糖(LPS)促进淋巴细胞体外增殖，并且ASPS在质量浓度为200μg/mL时效果最佳。另外，ASPS能够促进淋巴细胞细胞因子mRNA的表达，当200μg/mL的ASPS与淋巴细胞体外共培养至24 h时，IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α的mRNA表达量均最高，而IL-4和IL-10 mRNA的相对表达量则以ASPS质量浓度为400μg/mL和培养时间48 h条件下最高，说明IL-4和IL-10 mRNA的表达滞后，而且呈剂量依赖性。结果表明，ASPS能够提高鸡淋巴细胞的体外增殖功能，促进Th1和Th2细胞因子分泌，这为进一步揭示刺五加多糖的免疫调节机制奠定了基础。     

嗜酸乳杆菌胞外多糖对TGEV感染ST细胞分泌IFN-γ IL-6 IL-8的影响

为研究抗病毒嗜酸乳杆菌菌株的细胞机制,利用嗜酸乳杆菌胞外多糖(EPS)作用于猪睾丸细胞(ST),以MTT法检测其是否抑制猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染,并观察IFN-γ、IL-6、IL-8的mRNA表达水平。本试验分为4组,分别是正常细胞对照组(Control组)、TGEV感染组(TGEV组)、EPS预处理感染TGEV组(EPS+TGEV)组和胞外多糖组(EPS组),在2、4、6、12、24 h时采集细胞样品,通过荧光定量PCR方法检测不同时间点各组细胞中IFN-γ、IL-6、IL-8mRNA的表达量。结果发现,EPS具有抑制TGEV感染ST细胞的效应;EPS组、TGEV组和EPS+TGEV组IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达量较Control组比都相对增加,三种细胞因子随着时间的延长,均呈现出先快速增加后减少回归到正常水平的趋势。EPS+TGEV组在感染2 h时IL-8 mRNA表达量达到最大值,4 h时IL-6、IFN-γmRNA表达量达到最大值,且均出现了叠加效应,相比正常细胞对照组差异极显著(P0.001)。结果表明,EPS对TGEV感染ST细胞有一定的抑制作用,提高了抗TGEV感染初期IFN-γ、IL-6、IL-8 mRNA表达水平。     

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒（MDV）感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18（rChIL-18）的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。     

淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为研究淫羊藿多糖脂质体(EPSL)增强免疫的作用机理,采用MTT法和实时荧光定量PCR法测定了EPSL对鸡外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响,以淫羊藿多糖(EPS)作为对照.结果表明,EPSL在体外可以显著促进淋巴细胞的增殖,其中在31.250和3.906 μg·mL-1时,无论是单独作用还是协同PHA作用效果都显著优于EPS;EPSL可提高淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA的表达,其中在62.500和31.250 μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,EPSL在62.500 μg·mL-1时的作用最强,在31.250 μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关.EPS经过脂质体包封后其提高淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的作用明显增强.     

基因A型鸭甲肝病毒弱毒株免疫雏鸭的8种细胞因子mRNA变化分析

为研究基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)MY弱毒株对雏鸭细胞因子表达的影响,阐明细胞因子在DHAV-A弱毒疫苗免疫中的作用,利用荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测DHAV-A MY弱毒株接种1日龄SPF雏鸭后0.25、0.5、1、2、3和5d共6个时间点肝、脾和脑组织中IFN-α、IFN-β、IFN-γ,以及IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α共8种细胞因子的mRNA转录水平,并结合各时间点DHAV-A的荷载量进行分析。结果表明:肝和脑组织中2d时间点以及脾组织中3d时间点病毒荷载量达到最高;三种组织中,8种细胞因子的转录水平均随着病毒荷载量的增加而升高,且在各组织病毒荷载量最高时间点,8种细胞因子的转录水平均极显著升高(P0.01),结果证明DHAV-A MY弱毒株可刺激雏鸭抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α以及炎性细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8mRNA的转录,本研究丰富了DHAV-A MY弱毒株的免疫机制。     

抗鸭传染性浆膜炎中药组方对鸭免疫功能的研究

在成功筛选出防治鸭传染性浆膜炎效果较好的中药组方P基础上,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测21日龄雏鸭外周血淋巴细胞（PBMC）IFN-γ和IL-6 mRNA的表达水平,研究该组方对鸭只免疫器官的影响。结果表明,P1组（预防组）鸭脾脏指数和胸腺指数显著或极显著高于y组（阳性对照组）与K组（健康对照组）（P〈0.05;P〈0.01）,P2组（治疗组）鸭脾脏指数和胸腺指数极显著高于K组（P〈0.01）;P1组极显著提高鸭外周血淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达量（P〈0.01）;P2组显著提高IFN-γ mRNA的表达量（P〈0.05）;P1组、P2组IL-6 mRNA的表达量有升高的趋势（P〈0.1）。说明组方P能促进机体免疫器官的发育和分泌IFN-γ及IL-6,提高机体抗病力和免疫调节能力。     

新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞中免疫相关细胞因子表达的检测

分别采用新城疫强毒株F48E9与新城疫弱毒株La Sota感染10日龄鸡胚制作的鸡胚成纤维细胞,感染后24 h提取鸡胚成纤维细胞的总RNA,通过RT-PCR技术结合凝胶成像系统扫描检测21种免疫相关细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达量.实验结果表明,在鸡胚成纤维细胞中,无论是否感染新城疫病毒,IL-2、IL-3、IL-4、IL-21不能检测到其相应条带.通过统计学分析,IFN-β、IFN-γ、IL-9、IL-12-P35、IL-12-P40在病毒感染组与对照组间呈现出显著的差异,而强毒感染组与弱毒感染组的比较中,仅IFNγ、IL-9表现出显著差异.     

禽呼肠孤病毒感染鸡胚成纤维细胞后IL-17、IL-18和IFN-γ mRNA转录水平的动态变化

为了分析禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)S1133株感染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)后,对其细胞因子IL-17、IL-18和IFN-γmRNA转录水平的影响,探讨禽呼肠孤病毒感染机制和宿主之间的作用关系。本试验将ARV-S1133感染CEF细胞后,运用荧光定量PCR技术,测定和分析ARV结构蛋白σC和CEF细胞的IL-17、IL-18及IFN-γ的mRNA动态转录水平。结果表明,ARV-S1133感染CEF细胞10h后病毒结构蛋白σC mRNA的相对表达量开始迅速上升,在48h达到最高峰(13 162.73倍);ARV-S1133感染后引起CEF细胞中的IL-17、IL-18和IFN-γmRNA表达量发生变化,IL-17和IFN-γmRNA转录水平在感染早期迅速上调,感染后6h达到第一个峰值,分别上调8.77倍和11.17倍,随后下降,在感染36、48、60h后大幅度上升,且在48h达到峰值,表达量分别为97.19倍和111.58倍。IL-18mRNA转录水平在整个感染过程中表达量较低,在感染6h后微量上调(1.39倍),在感染中后期,其表达量呈下调趋势,感染48h时,IL-18mRNA表达量最低,与对照组相比下调0.19倍;5个不同滴度的ARV病毒感染CEF细胞24h后,3个细胞因子mRNA的表达量与病毒滴度线性相关,IL-17和IFN-γmRNA转录水平与病毒滴度正相关,IL-18mRNA转录水平与病毒滴度负相关。结果表明,ARV感染后可诱导CEF分泌IL-17、IL-18、IFN-γ的mRNA转录水平上调,说明IL-17、IL-18、IFN-γ可能与禽呼肠孤病毒的复制和致病机制相关。