PrP106-126对星形胶质细胞层黏连蛋白和纤黏连蛋白表达的影响

星形胶质细胞增生是朊病毒病早期的主要病理学特征.PrP106-126 (prion protein peptide 106-126)具神经毒性,导致星形胶质细胞增生.层黏连蛋白(laminin,LN)和纤黏连蛋白(fibronectin,FN)是星形胶质细胞胞外基质的主要成分.利用PrP106-126和PrP106-126制备的小胶质条件培养基(condi-tioned medium from microglia,MiCM)分别作用于体外培养的星形胶质细胞,应用RT-PCR和Westernblot技术探讨PrP106-126对星形胶质细胞的增殖及其胞内LN、FN表达的影响.试验分为5个处理(空白对照、Scr对照、PrP106-126、MiCM、MiCMPrP106-126).结果表明,PrP106-126可促进星形胶质细胞增殖、LN和FN的表达,但促增殖和FN表达作用有赖于活化小胶质细胞细胞因子的共同参与.     

PrP106-126诱导的N2a细胞神经毒性中神经营养因子受体p75NTR的表达变化研究

神经元死亡是朊病毒病的主要病理学特征。朊蛋白多肽PrP106-126能够对神经细胞表现神经毒性,引起细胞凋亡。细胞表面蛋白神经营养因子受体p75^NTR的胞外区域可以与PrP106-126结合并产生促凋亡作用。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用荧光定量RT-PCR和Western Blot技术,以及DNA Ladder和AnnexinV-FITC/PI双重染色流式细胞凋亡检测技术对p75^NTR介导的PrP106-126神经毒性分子机制进行了研究。结果发现在PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡过程中,p75^NTR的mRNA转录水平和蛋白表达水平均显著升高,以p75^NTR多克隆抗体sc-6189阻断PrP 106-126与p75^NTR的相互作用后,减弱了PrP106-126诱导的N2a细胞凋亡效果。该研究揭示了PrP106-126诱导的N2a细胞毒性中p75^NTR受体的表达变化,为解释朊病毒病的发病机制提供了重要数据。     

PrP106-126对大脑皮质神经元和星形胶质细胞朊蛋白基因表达的影响

采用实时荧光定量RT-PCR的方法,对PrP106-126处理的大脑皮质神经元和星形胶质细胞模型进行了朊蛋白基因表达相对定量的研究。大脑皮质神经元经PrP106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达量明显下降。PrP106-126处理的星形胶质细胞与对照组和SCR处理组相比,朊蛋白基因的表达量显著升高。该试验结果为深入了解TSEs的分子致病机制和正常朊蛋白的功能提供了基础数据。     

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

本文旨在构建有效抑制朊蛋白（Prion protein，PrP）表达的重组质粒，并以此为工具控制PrP表达，从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段（shPrP），退火后与表达载体pG-super（Hairpin siRNA expressing vector）定向连接，构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定，测序正确后，脂质体法转染C6细胞，采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平，以验证pG-super-shPrP的抑制效率；结果表明：重组质粒pG-super-shPrP构建成功，且显著降低C6细胞PrP mRNA表达（P〈0．05），抑制效率为34．2％。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞，并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平，探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制，结果表明PrP促进细胞SOD的活性（P〈0．01），但对细胞SOD的表达量无影响，即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上，利用此质粒，在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。     

PrP106-126毒性多肽影响小胶质细胞IL-1β、TNF-α的mRNA表达量变化的研究

体外合成的人PrP106-126毒性多肽具有PrP~(Sc)类似的特性,如富含β折叠,具有部分蛋白酶抗性,可以在脑组织内沉积形成淀粉样斑块等等.因此PrP106-126可作为替代PrP~(Sc)研究TSE发病机制的理想模型.PrP106-126对神经元的损伤作用可能主要通过两种途径:一方面它可与神经元表面的相关受体相结合通过信号转导途径直接对神经元造成损伤,另一方面它可激活小胶质细胞产生炎性介质或NO等毒性物质间接引起神经元凋亡.激活的小胶质细胞主要产生IL-1β、TNF-α两种炎性介质,这两种细胞因子的持续产生可致使神经元凋亡.本研究旨在对PrP106-126多肽作用小胶质细胞过程中,IL-1β、TNF-α的mRNA表达量随时间变化的规律,为阐明TSE发病过程中,小胶质细胞促进神经元凋亡的作用机制提供基础数据,并为一定程度上抑制小胶质细胞激活,减轻其对神经元的损伤作用奠定理论基础.     

BAT3过表达缓解由PrP106-126毒性多肽诱导的神经元凋亡

拟检测BAT3蛋白过表达对由PrP106-126毒性多肽引起的神经元凋亡现象的影响。首先通过免疫荧光、CCK8细胞活性检测试剂盒和免疫印迹检测带FITC标签的PrP106-126-FITC毒性多肽的生物学毒性。分别用PrP106-126-FITC和PrP106-126神经毒性多肽处理原代神经元和Neuro2a细胞,通过免疫荧光技术和免疫印迹方法分别检测受刺激后的原代神经元和Neuro2a细胞中BAT3表达的变化情况。通过脂质体转染方法将已经构建好的pcDNA-3.1-HA-BAT3质粒转染进入原代神经元,用CCK8检测细胞活性;以同样方式将质粒转染进入小鼠神经瘤细胞系Neuro2a,用TUNEL凋亡检测试剂盒分析经BAT3转染或对照组的N2a细胞的凋亡水平;Western blot检测PrP106-126神经毒性多肽处理前后,胞质内细胞色素C和Bcl-2的变化,进一步了解BAT3在神经元凋亡中发挥作用的机制。结果显示,PrP106-126-FITC和PrP106-126神经毒性多肽具有相似的神经毒性。受到多肽刺激之后,无论在原代神经元还是传代细胞系Neuro2a中,BAT3都发生核输出现象,BAT3从细胞核转移进入细胞质。BAT3的过表达使受到PrP106-126毒性多肽刺激的神经元的细胞活性有所提高,Neuro2a的细胞凋亡现象减轻,同时抑制了由PrP106-126毒性多肽引起的细胞色素C的过度释放并且维持细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的稳定。BAT3蛋白的表达缓解PrP106-126毒性多肽对神经细胞造成的凋亡现象,为进一步阐释该蛋白质对朊病毒引起的神经元损失的治疗作用机制提供了依据。     

PrP106-126诱导的小鼠成神经瘤N2a细胞NF-κB激活及神经毒性研究

PrP106-126诱导的神经毒性机制仍不清楚。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用WesternBlot方法首次发现PrP106-126导致核转录因子NF-κB的亚单位p65蛋白转移到细胞核内,激活了NF-κB细胞信号分子。转核抑制剂NF-κB SN50预处理细胞减弱了PrP106-126诱导的NF-κB激活程度;并且DNA Ladder凋亡检测及Annexin V-FITC和PI双染流式细胞凋亡检测发现,NF-κB SN50能够抑制p65蛋白转核,在一定程度上也抑制了PrP106-126对N2a细胞的神经毒性效果。结果表明NF-κB信号分子参与了PrP106-126的神经毒性,且NF-κB信号分子的激活对N2a细胞具有促凋亡作用。PrP106-126激活N2a细胞NF-κB信号分子以及NF-κB促凋亡功能的体外研究对于阐明朊病毒病致病机理具有重要意义。     

甘氨酰谷氨酰胺二肽对黄羽肉鸡肝脏脂肪代谢的影响及其机制的研究

选择360只1日龄优质黄羽肉鸡，随机分为4组，分别饮用凉开水配制的浓度为0、0．01、0．05和0．10mg／L的甘氨酰谷氨酰胺（Gly—Gin）二肽溶液，连续饮用41d。用甘油三酯试剂盒测定肝脏总甘油三酯的含量。采用相对定量RT—PCR的方法来检测ACC（acetyl—CoAcarboxylase）和PPAR0a（peroxisomeproliferator—activatedreceptorsa）mRNA的表达水平。试验结果表明：①Glv—Gln二肽能够呈现剂量依赖性的降低肝脏4CCmRNA的表达水平，0．10mg／LGly—Gin二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。②Glv—Gln二肽能够显著上调只附R仅基因mRNA的表达水平，其中0．05mg／LGly—Gln二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。③Gly—Gln二肽具有提高肝脏甘油三酯含量的趋势，但差异不显著（P〉0．05）。以上结果提示，Glv—Gln二肽能够通过降低肝脏甘油三酯的合成，促进代谢，从而减少脂肪沉积水平。     

牛白细胞介素18成熟蛋白cDNA基因的克隆和表达

应用RT—PCR技术分别从脂多糖（LPS）活化的牛脾脏细胞和肺泡巨噬细胞中克隆到编码牛白细胞介素（bIL）18成熟蛋白的cDNA基因，其大小为480bp。将bIL-18克隆到pET32a（＋）质粒中，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析．得到了分子量为38ku的融合蛋白，该蛋白经纯化并复性后，具有诱导MDBK分泌IFN-γ的活性，并且可以刺激ConA活化的外周血单核细胞（PBMC）增殖。使用半定量RT—PCR对其mRNA的体内表达进行了测定，发现不论是否加入刺激剂，牛巨噬细胞都可以持续的表达IL-18 mRNA，但是被LPS活化的PBMC只有微弱表达，肝和脾细胞经LPS活化后也可以检测到IL-18 mRNA的表达，其水平明显高于PBMC，在不同细胞中表达的差异可能反映了其产生成熟IL-18的能力。     

半胱胺盐酸盐对仔猪胃黏膜细胞H+-K+-ATPase活性和生长抑素表达的影响

将分离的仔猪胃粘膜细胞分为4组，在含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液中培养24h后，分别在新鲜的基础培养液中添加0（对照组）、0．001（低水平组）、0．01（中水平组）和0．1（高水平组）g／L的半胱胺盐酸盐，继续培养20h后收集细胞。测定细胞H^＋-K^＋-ATPase活性，同时用相对定量RT—PCR法测定细胞H^＋-K^＋-ATPase和生长抑素（SS）mRNA的相对丰度。结果表明：（1）低水平的半胱胺盐酸盐对H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性没有影响（P〉0．05），但中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了H^＋-K^＋-ATPase的表达和活性（P〈0．05），其中H^＋-K^＋-ATPase mRNA的相对丰度分别提高了36％和44％，H^＋-K^＋-ATPase活性分别提高了57％和53％。（2）低水平半胱胺盐酸盐对SSmRNA的表达没有影响（P〉0．05），中、高水平的半胱胺盐酸盐显著提高了SSmRNA的相对丰度（P〈0．05），提高幅度均为52％。以上结果提示半胱胺盐酸盐可增强体外培养的仔猪胃黏膜细胞H^＋-K^＋-ATPase的表达及活性，而这一作用可能由SS所介导。     

急性热应激对泰和乌骨鸡胸肌酪氨酸酶表达和黑色素含量的影响

试验旨在研究急性热应激对泰和乌骨鸡胸肌酪氨酸酶基因表达及黑色素含量的影响。选取144只42日龄泰和鸟骨鸡．随机分为2组：即常温对照组和急性热应激组,每组4个重复．每个重复18只鸡。结果表明,急性热应激极显著地提高了热应激12h时泰和乌骨鸡胸肌酪氨酸酶mRNA的表达（P〈0．01）,并具有提高其热应激24h时的表达量的趋势（P〉0．05）,对其恢复常温后24h、6d、20d的表达量无显著影响（P〉0．05）;急性热应激极显著地降低了热应激24h时泰和乌骨鸡胸肌黑色素的含量（P〈0．01）。并具有降低其热应激12h时黑色素含量的趋势（P〉0．05）,极显著地提高了其恢复常温后24h时胸肌黑色素的含量（P〈0．01）,对其恢复常温后6d、20d的黑色素含量无显著影响（P〉0．05）。     

海南黑山羊MSTN基因的表达差异与发育性变化研究

采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测了MSTN基因在2、3、4月龄和12月龄海南黑山羊腿肌、腰肌和背肌组织中mRNA表达发育性变换规律,为揭示MsTN基因的生物学功能及其对肉质的表达调控机理提供参考依据。结果表明,在海南黑山羊的四个生长阶段,MSTN基因均在背肌里的表达量最高,腿肌里的表达量较低,表达模式为：背肌〉腰肌〉腿肌;腿肌和腰肌在2月龄时,表达量较低,3月龄时极显著升高（P〈0．01）,4月龄时又极显著下降（P〈0．01）,12月龄时又极显著升高（P〈0．01）;表达模式为：12月龄〉3月龄〉4月龄〉2月龄;背肌在2月龄时表达量也较低,3月龄时极显著升高（P〈0．01）,达到最高水平,4月龄时又极显著下降（P〈0．01）,12月龄时有所上升,但差异不显著（P〉0．05）,表达模式为：3月龄〉12月龄〉4月龄〉2月龄。     

蛋用鸡连续饲喂低蛋白低有效磷饲粮的安全性和添加植酸酶效果的评价

对蛋用鸡连续饲喂低蛋白低有效磷饲粮的安全性及添加植酸酶的效果进行了探讨。结果表明,2～36周龄蛋用鸡在2～8、9～15、16～18和19～36周龄连续饲喂粗蛋白为17．0％、13．5％、13．0％、15．0％和有效磷为0．35％、0．3％、0．3％、0．3％的低蛋白中磷饲粮,除蛋重降低外,其他生产性能指标与粗蛋白为19．0％、15．0％、14．5％、16．5％和有效磷为0．45％、0．4％、0．4％、0．4％的高蛋白高磷饲粮无显著差异,并使8、15、36周龄鸡的氮、磷排泄量分别减少9．50％（P〈0．01）、18．81％（P〈0．01）、13．42（P〈0．05）和15．93％（P〈0．01）、16．18％（P〈O．01）、19．21％（P〈0．01）。连续饲喂粗蛋白为17．0％、13．5％、13．0％、15．0％和有效磷为0．25％、0．2％、0．2％、0．2％的低蛋白低磷饲粮,可显著降低2～18周龄生长鸡平均日增重和饲料利用率,但添加300IU／kg植酸酶后可达到高蛋白高磷的饲养效果,并使8、15、36周龄鸡的总磷和粗蛋白表观利用率分别提高12．55％（P〉0．05）、7．24％（P〉0．05）、32．66％（P〈0．01）和26．23％（P〉0．05）、15．70％（P〈0．01）、7．77％（P〈0．05）,而氮、磷排泄分别减少17．70％（P〈0．01）、25．19％（P〈0．01）、17．63（P〈0．05）和37．41％（P〈0．01）、36．71％（P〈0．01）、43．17％（P〈0．01）。     

子宫内膜炎患牛子宫内膜PGR和ESR-1 mRNA的表达特征

为探讨卵巢激素及其子宫内膜受体在奶牛子宫内膜炎中的作用,以产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛为研究对象,通过ELISA法检测子宫内膜中PGF2a,血清中孕酮和雌二醇浓度,SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测子宫内膜PGR和ESR-1mRNA的表达。结果显示,病牛子宫内膜PGF2α水平为（6.503±0.122）μg/L,血清孕酮为（0.816±0.281）μg/L,血清雌二醇为（35.462±2.523）μg/L,而对照组分别为（14.408±0.285）,（0.543±0.142）,（37.6±1.317）μg/L;子宫内膜炎患牛组PGF2a水平极显著低于对照组（P〈0.01）,孕酮含量显著高于对照组（P〈0.05）,PGF2a与孕酮水平呈显著负相关（r=0.893）,雌二醇含量组间差异不显著。PGR基因的mRNA水平极显著高于对照组（P〈0.01）,而ESR-1基因的mRNA水平低于对照组,且差异极显著（P〈0.01）。上述结果表明,孕酮浓度显著升高及PGR mRNA高表达,可能抑制子宫收缩;ESR-1mRNA低表达使子宫新陈代谢减慢,子宫内膜合成PGF2a功能下降,这些改变有可能促进了产后子宫内膜炎的发生发展。     

海南黑山羊CAST基因的时空表达分析

采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测了CAST基因在1、2、3、4月龄和12月龄海南黑山羊骨骼肌、心肌、肝脏和脂肪组织中mRNA表达差异和发育规律,为揭示CAST基因的生物学功能及其对肉质的表达调控机理提供参考依据.结果表明,CAST基因在未成年羊的骨骼肌中mRNA表达量极显著高于其他组织（P＜0.01）,且在2月龄时达到最高水平;成年后在心肌、肝脏和脂肪中的表达量极显著升高（P＜0.01）,在骨骼肌中的表达量次之,但在脂肪中的表达量始终相对较低;该基因在3、4月龄各组织中的mRNA表达量相对较低,且四种组织在3、4月龄间表达差异不显著（P＞0.05）.     

瘦素受体表达量在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用

瘦素受体（leptin receptor,LEPR）在机体的体质量平衡、造血、生殖、血管生成和免疫过程中发挥着重要作用。为进一步了解LEPR基因在苏钟猪脂肪沉积调控中的作用机制,本研究利用Real-time PCR方法和Western-blot方法分析该基因在12头苏钟猪中5个脂肪易沉积组织（心脏、肝脏、肾脏、背膘和眼肌）RNA和蛋白水平的表达谱信息。结果表明：LEPR的mRNA在这5种组织中均有表达,其在各组织中的mRNA表达丰度表现为：背膘〉眼肌〉心脏〉肝脏〉肾脏,其中在背膘的表达量极显著高于其他几种组织（P〈0.01）;LEPR蛋白在这5种组织中也均有表达,其中在心脏中的表达量最高,显著高于其他组织（P〈0.01）,且在公猪组织的表达量显著高于母猪组织（P〈0.05）;另外,LEPR第18外显子在苏钟猪群中检测到3个高突变率的SNPs。LEPR对苏钟猪的背膘、肌肉、心脏、肾脏、肝脏等组织的脂肪沉积有重要影响,是苏钟猪肉质改良育种中潜在的重要候选基因。     

线性模型对影响奶牛产奶性能的主要相关因素分析

利用一般线性模型研究各种因素对奶牛产奶性能的影响。牛场、胎次和产犊季节对奶牛产奶量影响差异极显著(P0.01),随着奶牛胎次的增加,奶牛产奶量增加;夏季产犊的奶牛产奶量最低,冬季产犊的最高;体细胞计数对奶牛产奶量没有显著性影响(P0.05),但随着体细胞数的增加,产奶量下降。牛场、胎次和体细胞计数对乳脂率有极显著的影响(P0.01),第三牛场平均乳脂率为4.38%,显著高于其他三个牛场;随着胎次的增加,乳脂率有下降趋势;随体细胞数增加,乳脂率升高;产犊季节对奶牛乳脂率没有显著影响(P0.05)。牛场、产犊季节和体细胞数对乳蛋白率的影响极显著(P0.01),体细胞数增加,乳蛋白率升高;夏季和秋季产犊的奶牛乳蛋白率较高,春季和冬季较低;胎次对乳蛋白率没有显著影响(P0.05)。表型相关分析表明:SCC与产奶量呈显著负相关(r=-0.158,P0.05),SCS与产奶量相关性接近显著水平(r=-0.140,P=0.055)。SCC/SCS与乳脂率、乳蛋白率呈正相关,但未达到显著性水平(P0.05)。     

紫外线照射对鹌鹑产蛋性能影响的初步研究

为了解紫外线照射对鹌鹑产蛋性能的影响,将66只40日龄的蛋鹌鹑随机分成3组,每组22只,以功率为15 W的中波紫外灯为紫外线光源,试验Ⅰ组和Ⅱ组每天分别给予2 h（2.8μW·h/cm^2）和4 h（5.6μW·h/cm^2）的连续紫外线照射,对照组不进行紫外线照射,试验期为11周。对各组鹌鹑部分产蛋性能指标的分析结果表明：试验Ⅰ组和Ⅱ组的日产蛋数分别较对照组增加9.38%和8.80%（P〈0.01）,日产蛋率分别提高5.85和5.49个百分点（P〈0.01）,日产蛋量分别提高18.94%（P〈0.05）和9.28%（P〉0.05）;但各组鹌鹑在料蛋比、平均蛋重、长径长、短径长和蛋壳厚度等指标上则未呈现显著差异（P〉0.05）。     

复方中药对猪肉中4种鲜味氨基酸含量的影响

研究应用已确定效果的复方中药,采用不同剂型、不同剂量饲喂猪,再用高效液相色谱仪对猪肉中4种鲜味氨基酸进行测定比较。结果显示,丙氨酸含量：对照组低于颗粒剂高剂量组与超微粉低剂量组,差异均极显著（P〈0.01）,颗粒剂高剂量组与超微粉低剂量组无显著差异（P〉0.05）。天门冬氨酸含量：对照组低于颗粒剂高剂量组（P〈0.01）与超微粉低剂量组（P〈0.05）,颗粒剂高剂量组高于超微粉低剂量组（P〈0.05）。谷氨酸含量：对照组与颗粒剂高剂量组和超微粉低剂量组无显著差异（P〉0.05）。甘氨酸含量：对照组低于超微粉低剂量组（P〈0.01）和颗粒剂高剂量组（P〈0.05）,超微粉低剂量组与颗粒剂高剂量组无显著差异（P〉0.05）。