重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测

本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。     

猪链球菌2型广西分离株的生物学特性鉴定

猪链球菌2型是一种人兽共患病原菌,主要引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症和突然死亡等。在我国许多地方发病率呈不断上升趋势。各年龄段的猪都可感染此病,但多发于3～12周龄的猪,尤其是断奶仔猪易感染此病。猪链球菌2型不但对猪有致病性,而且可引起人的感染并致死。我国江苏省、四川省部分地区暴发2型猪链球菌病导致人员感染致死。本试验对从发病猪中分离到的链球菌株进行了形态、培养特性和使用猪链球2型、1型抗血清进行凝集试验,结果证明4株细菌为荚膜2型猪链球菌。PCR方法检测其5种毒力因子和对仔猪、家兔、小鼠的致病性试验。现将鉴定和试验结果报告如下。     

昆明地区猪源链球菌分离株血清群检测及致病病型分析

从昆明地区可疑病料中分离出12株猪源致病性链球菌,对其进行了血清群鉴定。结果表明分离菌株中以兰氏D群为主,其次为C群。其中D群4株(33.3%),C群3株(25%),A群1株(8.3%),E群1株(占8.3%),未能定群3株(25%)。分离株cg1为猪链球菌2型。通过对临床病例血清型检测显示,猪链球菌病在昆明地区广泛存在,尤以寒冷季节多发,主要病型包括败血型、脑膜炎型和关节炎型。     

猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌,药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同,但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5%。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型,确认26株为猪链球菌,其中1株为1型,16株为2型,4株为7型,没有9型,另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100%致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf^＋mrp^＋sly^＋2型猪链球菌,1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。     

屠宰场猪链球菌分离菌株分型及其致病性和耐药性分析

为了解吉林省猪链球菌的流行情况,从屠宰场采集的猪咽拭子和鼻拭子样品中分离鉴定猪链球菌,并进行菌株血清型、基因型和毒力表型的鉴定,以及致病性和耐药性的分析。结果表明,从100份样品中共分离鉴定猪链球菌104株,其中29株鉴定为血清2型、9型和1型等几种常见的致病性血清型,其他75株不属于常见的致病性血清型。血清2型的菌株中,2株经鉴定为ST1基因型和mrp+epf+sly+毒力型,并经动物试验鉴定为强毒菌株;其他菌株均为ST28基因型和mrp+epf-sly-毒力型,具有中等毒力。血清9型的菌株,均为mrp-epf-sly-毒力型,动物试验鉴定均为强毒菌株。根据Kirby-Bauer纸片扩散法的药敏试验结果,98%的猪链球菌分离株对四环素耐药;对大环内酯类、克林霉素和链霉素的耐药率都在50%以上;对β-内酰胺类、氯霉素和喹诺酮类抗生素的耐药率小于20%。总体分析,从屠宰场分离的猪链球菌强毒菌株所占的比例并不高,但是菌株多重耐药的情况非常严重。     

广西部分地区猪链球菌的分离鉴定及小鼠致病性研究

对来自广西边境地区部分发病猪场及屠宰场的370份猪组织进行细菌分离鉴定,共分离到16株链球菌,对这16株链球菌进行了形态学观察、PCR鉴定及小鼠致病性试验。结果表明,其形态、染色、生化特性均符合猪链球菌的特点,通过GDH鉴定与测序,证实这16株菌株均为猪链球菌,分别命名为GX1~GX16。通过特异性引物PCR分型（35个血清型）,其中有1株为1型,1株为2型,1株为5型,1株为29型,5株为8型,7株未分出型。用这16株猪链球菌对昆明小鼠和BALB/c小鼠进行动物致病性试验,结果发现,菌株GX10对昆明小鼠和BALB/c小鼠致死率均为100%;菌株GX11对BALB/c小鼠致死率为80%;其他菌株对昆明小鼠和BALB/c小鼠均无致病性。菌株GX10、GX11对BALB/c小鼠的LD₅₀分别为4.5×10⁵和3.6×10⁹ CFU。本试验结果表明,广西边境地区存在致病性猪链球菌8型。BALB/c小鼠对猪链球菌的敏感性高于昆明小鼠,更适合作为猪链球菌致病性研究的动物模型。     

东北地区猪群链球菌分离鉴定及流行病学调查分析

为了解猪链球菌在东北地区正常猪群中的流行情况,对黑龙江、吉林、辽宁省等地无菌采集的2 204份鼻拭子接入含有1‰抗生素的链球菌液体选择培养基中,37℃静止培养24 h,挑取细菌培养物涂片,革兰氏染色后镜检,将镜检为革兰氏阳性的链球菌利用PCR方法进行猪链球菌种的鉴定,在此基础上再利用PCR方法进行猪链球菌1、2、7、9血清型的分型鉴定.结果显示,黑龙江、吉林、辽宁3省猪群链球菌的携带率分别为29%、27%、34%,东北地区分离得到猪链球菌共155株,其中1型猪链球菌7株,2型猪链球菌39株,7型猪链球菌4株,9型猪链球菌11株,其他型猪链球菌94株.     

2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

检测了4株猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.zooepidem icus,SEZ)对猪、兔的致病性。SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏,前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+,后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株,作为对照,其毒力因子的表现型为MRP+EF*SLY+;SEZ-CY和SEZ-CN株均分离自发病猪并经鉴定。SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2~3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108cfu;对兔(2~3只/组)的最小致死量分别为100~1 000、1 000、100和105cfu;SS2-D株108cfu对猪不致死,对兔的最小致死量为108cfu,而SS2-006444对猪、兔无致病性。显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致,可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2~4只/组),并致死,SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10 m in即可检出细菌,此后2~4 h为无菌血症阶段,之后重新出现。     

猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

昆明市某猪场的仔猪群中发生一起以败血症为主要特征的急性传染病。从该猪场可疑病料中分离出1株猪源致病性链球菌,开展了形态学、培养特性、生化特性、血清学鉴定等试验对其进行了鉴定,并进行了猪链球菌的动物致病性试验和药敏试验,结果表明:此分离菌株为猪链球菌2型;对小鼠有很强的致病性;头孢噻呋、阿莫西林、头孢他啶、氧氟沙星、氨苄青霉素等对分离菌株高敏。     

猪链球菌4型分离株生物学特性研究

为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。     

某奶牛场临床型乳房炎的病原分离及鉴定

从某奶牛场患乳房炎的奶牛乳汁中共分离到 13株细菌 ,经培养特性、菌落形态和生化特性等鉴定表明 ,13个分离菌株中 ,无乳链球菌最为多见 ,占 10株 ;金黄色葡萄球菌 2株及大肠杆菌 1株。将 3种细菌经人工感染小白鼠 ,都具有一定的致病力。药敏试验结果表明 ,氨苄青霉素及丁胺卡那对上述细菌具有较好的抑制作用     

鸡大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位苗交叉保护的初步研究

含Ⅰ型菌毛的３ 个不同血清型（Ｏ１ 、Ｏ７８ 及Ｏ８８） 的菌株， 大容量培养后提取菌毛制备３ 种单价菌毛油乳苗。用１ 日龄雏鸡分别免疫３ 种单价菌毛油乳剂苗， 每雏免疫量为１２５ μｇ ， 隔离饲养至２ 周龄经气囊攻毒， 并评价疫苗的免疫原性。结果未免疫鸡出现８７－５ ％ ～１００ ％ 的死亡率， 免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率仅１２－５ ％ ， 用异源菌株攻毒出现３７－５％ ～６２－５ ％ 的死亡率。免疫鸡攻毒后未死亡者， 经扑杀观察， 可见在气囊、心包及肝脏的病变非常轻微， 且攻毒后比非免疫鸡能更有效地清除攻入气囊的大肠杆菌     

检测K88~+肠毒素性大肠杆菌PCR方法的建立

以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠伤寒沙门氏杆菌 ,链球菌 ,金黄色葡萄球菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该检测方法的敏感度可达 1 0个细菌。用此方法对 1 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,结果有 2株阳性 ;与血清学检测的结果一致。结果表明此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床K88+ 肠毒素性大肠杆菌病的快速诊断和流行病学调查     

PCR技术在鼠金黄色葡萄球菌检测中的初步研究

根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性。结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。因此 ,研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测     

反刍家畜饲用微生物添加剂的研究与应用

选用贵州省畜牧兽医科学研究所分离鉴定和引购的无毒芽胞杆菌、酵母菌、乳酸菌、粪链球菌等多株益生菌 ,进行培养发酵、配方、生产工艺、主要技术指标等研究 ,研制成反刍家畜饲用微生物添加剂。用 0 2 %～ 0 4%的反刍家畜微生物添加剂对肉牛、山羊补饲精料进行 2 4h发酵处理后饲喂 ,饲养试验表明 ,试验组牛和羊比对照组可分别提高增重 1 4 5 %和 1 2 3 %。     

草粮轮作与农田生态平衡——兼论 Ladino 白三叶的生态经济效益

利用无性繁殖法定植Ｌａｄｉｎｏ白三叶（Ｔｒｉｆｏｉｕｍｒｅｐｅｎｓ）和雅安逸生白三叶（Ｔ．ｒｅｐｅｎｓ），地上部生物量前者比后者表现出极显著差异；地下部生物量和贮氮量表现为显著差异。后作玉米产量，Ｌａｄｉｎｏ白三叶地为６．２９ｔ／ｈａ大于雅安逸生白三叶地（６．１５ｔ／ｈａ）；农田生态系统里前者表现为正氮平衡，后者表现为负氮平衡，前者土壤固相、液相和气相比为１∶０．５∶０．２５明显优于后者；前者Ｃ／Ｎ比适中，后者Ｃ／Ｎ过窄，其抗性雅安逸生白三叶低于Ｌａｄｉｎｏ白三叶。三种种子直播的豆科牧草的生态经济特性表现为南苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏｈｉｓｐｅｄａ）大于苕子（Ｖｉｃｉａｃｏｒａｃｃａ），紫云英（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｓｉｎｉｃｕｓ）则介于两者之间。草粮轮作周期证明，Ｌａｄｉｎｏ白三叶和南苜蓿以及苕子是无性繁殖和有性繁殖的最佳材料，值得广泛推广利用。     

单诺沙星对人工诱发鸡大肠肝菌病的药效试验

根据试管 2倍稀释法测定的单诺沙星及氯霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度 ,对实验性大肠杆菌病鸡进行内服给药 (每隔 12h给药 1次 ,连续 3d)治疗试验。结果表明 ,单诺沙星及氯霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度分别是 0 0 5及 1 6mg/L。单诺沙星以 5mg/kg、氯霉素以40mg/kg的剂量给鸡内服后 ,对大肠杆菌病的治愈率分别为 87 5%及 55 0 %。     

牛羊4种寄生虫病联合诊断技术的研究与应用

疫区牛羊同时寄生有捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫等多种寄生虫。目前血清学诊断方法对这 4种寄生虫病的检测需 2～ 4次操作。将捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫抗原分别以 0 1 5 ,0 0 4 ,0 0 6和 0 1 3μg/ μL的最佳浓度依次定点在同一硝酸纤维素膜条上 ,制成 4种寄生虫病联合诊断膜。用黄牛IgG ,水牛IgG和山羊IgG联合免疫兔 ,获得了高效价兔抗黄牛、水牛和山羊 (简称兔抗牛羊 )IgG抗血清。应用兔抗牛羊IgG抗血清连接酶标SPA ,建立了 1份血纸能同时用于检测牛、羊捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病抗体技术。经浙江、湖北、四川、安徽等省应用 ,该项技术具有省工、省时、经济、实用等优点。适宜于牛、羊捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病流行区的普查或监测     

4型菌毛、毒素及蛋白酶在动物源气单胞菌的检测

将来源于鱼、猪、犬等９种动物的１８株气单胞菌分离株通过ＡＤ（氨苄青霉素－糊精）培养基纯化。另以大肠杆菌束状菌毛相关（ｂｆｐ－ｒｅｌａｔｅｄ）基因的ＰＣＲ引物对ＥＢ１（ＧＡＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＣ）—ＥＢ２（ＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＴＡＴ）扩增,用ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记,构建核酸探针,作斑点杂交试验,用以检测上述气单胞菌菌株的４型菌毛,同时以溶血试验检测其毒素,用脱脂奶溶蛋白圈试验检测其蛋白酶。结果显示,在１８个菌株中,４型菌毛、毒素和蛋白酶均为阳性者为１０株（５５．６％）;３项指标均无肯定的阳性结果者４株,两者合计共１４株,占检测总数约８０％（１４／１８）,提示这３种毒力因子存在较高的相关性。所有鱼源株（５株）三项指标皆为阳性;４株猪分离株三项指标均为阳性者占一半;其它动物分离株检测结果无明显规律性     

左旋咪唑对鸡细胞免疫和体液免疫功能的作用

系统研究了左旋咪唑对鸡细胞免疫和体液免疫功能的作用。结果表明左旋咪唑可影响正常鸡的免疫功能 :左旋咪唑可显著促进鸡外周血T淋巴细胞增殖 ,但对B淋巴细胞无明显影响 :2 5～ 1 0mg/kg左旋咪唑可使CD+4/CD+8淋巴细胞比值明显升高 ;左旋咪唑可使鸡体内抗颗粒性、胸腺依赖性抗原SRBC抗体滴度 ,抗可溶性、胸腺依赖性抗原BSA抗体滴度和抗非胸腺依赖性抗原BA抗体滴度均明显升高 ;2 5～ 1 0mg/kg左旋咪唑可使鸡血清总补体活性明显升高。左旋咪唑影响正常鸡回忆性免疫应答反应 :左旋咪唑 ( 1 0mg/kg)可使二次免疫鸡抗SRBC抗体滴度和抗BA抗体滴度回忆性免疫应答反应明显升高 ;但使鸡对抗BSA抗体滴度回忆性免疫应答反应明显降低。