柚皮素对新型体外肠上皮屏障模型的保护作用

为了探究柚皮素(NAN)对体外肠屏障炎性损伤和功能障碍的影响，本试验采用人肠上皮细胞系Caco-2和原代小鼠肠微血管内皮细胞(MIMVECs)共培养构建新型体外肠上皮屏障模型，使用1μg/mL脂多糖(LPS)诱导肠屏障炎性损伤，通过测定Caco-2细胞跨上皮电阻(TEER)和FITC-葡聚糖渗透量以评估柚皮素对肠屏障损伤的影响；通过分析Caco-2细胞炎性因子、紧密连接蛋白和NF-κB信号通路蛋白表达变化，进一步探究柚皮素保护肠屏障的机制。结果显示，柚皮素可显著抑制LPS诱导的共培养体系中上皮细胞单层TEER值的下降(P<0.05)和FITC-葡聚糖渗透量的升高(P<0.05);此外，柚皮素显著下调LPS诱导的共培养体系中上皮细胞炎性因子TNF-α(P<0.05)和IL-8(P<0.05)的分泌水平，上调紧密连接蛋白ZO-1(P<0.05)、Occludin(P<0.05)的表达，促进NF-κB信号通路蛋白IκB(P<0.05)的表达，抑制IκB(P<0.05)、p65(P<0.05)的磷酸化。结果表明，柚皮素可能通过抑制NF-κB...     

胰高血糖素样肽-2对断奶仔猪肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响

本文旨在研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对离体培养的断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响,探讨GLP-2调节肠道黏膜屏障的可能机制。将断奶仔猪空肠组织块置于含0、1×10-8、1×10-7mol/L的GLP-2的细胞培养液中进行培养,考察不同GLP-2添加水平对断奶仔猪空肠上皮丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路细胞外调节蛋白激酶丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)、p90核糖体S6蛋白激酶(p90RSK)以及紧密连接蛋白ZO-1、Oc-cludin、Claudin-1基因表达的影响,待确定出GLP-2能有效促进紧密连接蛋白相关基因表达的剂量后,再向培养液中添加MEK1/2的特异性阻断剂U0126,考察阻断MAPK经典通路后紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达的变化。结果表明,与对照组相比,将空肠组织块置于含1×10-7和1×10-8mol/L GLP-2的培养液中培养72 h均能显著促进MEK1/2、p90RSK以及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量(P<0.05),除ZO-1的基因之外,上述各蛋白的基因mRNA相对表达量还随着GLP-2浓度的增高而升高(P<0.05);向1×10-7mol/L的GLP-2组添加U0126阻断p90RSK、ERK1/2的基因表达后,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量也显著下降(P<0.05)。由此可知,GLP-2能够促进断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达,而MAPK通路可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。     

蜂胶对细菌脂多糖刺激下奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接蛋白的影响

本试验旨在研究中国蜂胶乙醇提取物(ethanol extract of Chinese propolis,EECP)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接渗透性的影响。EECP中总酚酸和总黄酮含量测定采用福林酚法和硝酸铝法,并建立LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,MAC-T)炎症模型,采用CCK-8法测定EECP对MAC-T相对增殖率的影响,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)评估EECP对LPS诱导的MAC-T细胞炎症相关因子(IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β)相对mRNA转录水平;以及对紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)相对mRNA转录水平进行检测,并进一步利用免疫荧光技术对紧密连接膜蛋白进行定位,确定EECP对LPS诱导MAC-T细胞炎症紧密连接渗透性的影响。结果显示:EECP中总酚酸含量为106.35 mg没食子酸当量(GAE)·g~(-1)、总黄酮含量为320.85 mg芦丁当量(RE)·g~(-1);CCK-8结果显示EECP的安全浓度为0～15μg·mL~(-1),并可有效提高LPS刺激下MAC-T的活力;LPS刺激显著增加了细胞炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1βmRNA的转录量(P0.001);但2.5～15.0μg·mL~(-1) EECP预处理显著降低了IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1βmRNA的转录量;与此类似,LPS刺激显著抑制了紧密连接蛋白基因(occludin、ZO-1)mRNA的转录量(P0.01),而EECP预处理后紧密连接蛋白基因(occludin和ZO-1) mRNA的转录量显著增加(P0.05);免疫荧光染色试验也证实EECP能通过上调紧密连接蛋白(occludin、ZO-1)的表达,缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞屏障功能紊乱。该结果证实,EECP对细菌脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症具有良好的保护作用,这为利用中国蜂胶预防奶牛乳腺炎提供了试验基础。     

β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用

本试验旨在探讨β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用。将40只体重在22~25 g的雄性健康昆明小鼠,随机分为4组,分别为对照组、β-胡萝卜素处理组、脂多糖(LPS)组、保护组,每组10只,对照组饲喂正常鼠粮,β-胡萝卜素组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮,LPS组饲喂正常鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS,保护组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS。结果表明:与对照组相比,LPS的注射能显著降低小鼠血液中IL-2、IL-4含量(P0.05),显著提高小鼠血液中NO含量(P0.05),影响小鼠结肠结构并显著降低结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达(P0.05);而与LPS组相比,保护组的小鼠血液中IL-2、IL-4含量以及结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达显著升高(P0.05),NO含量显著降低(P0.05)。结果显示,β-胡萝卜素可对由LPS应激造成的小鼠肠黏膜损伤具有明显的保护作用,该结果对保护肠屏障功能具有重要意义。     

高锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障和肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响

为研究高剂量氧化锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障的影响并探讨其作用机理,选取54头21日龄断奶仔猪按胎次一致、体质量相近和公母各半方法分为3组,每组3个重复,每个重复6头.哺乳组仔猪继续哺乳至35日龄,基础日粮组饲喂基础日粮(110 mg·kg~(-1)锌),高锌组饲喂基础日粮+3 000 mg·kg~(-1)锌(氧化锌).分别于28和35日龄取样测定血浆D-乳酸、内毒素含量和二胺氧化酶(DAO)活性、肠系膜淋巴结细菌移位率以及结肠内容物大肠杆菌数,并分析回肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达.结果显示:与哺乳组相比,断奶仔猪饲喂基础日粮,28日龄时血浆中D-乳酸、内毒素含量和DAO活性显著升高(P<0.05),至35日龄时,肠黏膜仍维持较高的通透性;添加高锌抑制上述3个指标的升高,进而阻止肠黏膜通透性的增加,达到与哺乳组相同的效果;与哺乳组相比,基础日粮组和高锌组在28和35日龄时均存在肠系膜淋巴结细菌移位现象,但是高锌组低于基础日粮组(P>0.05);28日龄时,基础日粮组结肠内容物大肠杆菌数大于哺乳组(P<0.05),与高锌组比较差异不显著(P>0.05),35日龄时各组间差异不显著(P>0.05);与哺乳组相比,仔猪断奶后饲喂基础日粮使Occludin和ZO-1mRNA丰度以及ZO-1的表达下降(P<0.05),高锌组Occludin和ZO-1 mRNA丰度、ZO-1蛋白表达均显著高于基础日粮组(P<0.05).结论:仔猪断奶后肠黏膜通透性增加,肠上皮细胞紧密连接蛋白表达下降;而添加高剂量氧化锌可抑制细菌在肠道黏膜上的黏附,阻止上皮细胞渗透性增加,能保护肠黏膜屏障功能.     

白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响

本试验旨在研究白藜芦醇(Res)对氧化应激仔猪肠道黏膜结构、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响。选择健康状况良好、胎次相近的28日龄三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪30头,随机分为5组,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0、10、30、90 mg/kg Res,每组6个重复,每个重复1头仔猪。于试验第15天清晨给试验组[敌草快(Diquat)组、Diquat+10 mg/kg Res组、Diquat+30 mg/kg Res组、Diquat+90 mg/kg Res组]仔猪按照10 mg/kg BW的剂量腹腔注射Diquat建立氧化应激模型,对照组只注射相同剂量灭菌生理盐水为参照。试验期21 d。结果表明:与对照组相比,Diquat组绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)显著降低(P<0.05),隐窝深度显著升高(P<0.05);肠黏膜丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.05);肠黏膜白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量显著升高(P<0.05),而肠黏膜白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05);肠黏膜闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)和跨膜蛋白(Claudin)的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05)。与Diquat组相比,Diquat+30 mg/kg Res组和Diquat+90 mg/kg Res组回肠绒毛高度和V/C显著提高(P<0.05);肠黏膜MDA含量显著下降(P<0.05),GSH-Px和SOD活性显著提高(P<0.05),其中以Diquat+90 mg/kg Res组效果最为显著;肠黏膜ZO-1、Occludin和Claudin的mRNA相对表达量均显著提高(P<0.05),且不同Res剂量组间无显著差异(P>0.05);肠黏膜IL-1β、TNF-α和IL-6含量显著降低(P<0.05),同时IL-10含量显著提高(P<0.05)。综上所述,Res可以提高氧化应激仔猪回肠抗氧化酶活性,改善回肠黏膜形态结构,同时抑制肠道炎症的发生,维持肠道健康。     

金荞麦提取物对猪肠道上皮屏障因子和炎症因子的影响

为了解金荞麦提取物对猪肠道上皮屏障因子和炎症因子的影响,试验用60%乙醇提取金荞麦茎叶有效成分,培养猪小肠上皮细胞(IEC),用不同浓度金荞麦茎叶提取物(10、50、100、250μg/mL)处理IEC,48 h后刮取IEC,提取RNA,实时荧光定量RT-PCR测定肠道炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-22、IL-10和肠道屏障相关因子ZO-1、Occludin的表达。结果:金荞麦茎叶提取物为黑色粉末或块状物,提取率为13.1%;不同浓度金荞麦提取物均可下调炎症相关基因的表达并显著升高抗炎因子IL-10的表达,肠道屏障相关因子ZO-1、Occludin的表达升高。结果表明:金荞麦茎叶乙醇提取物浓度为250μg/mL时可显著抑制肠道炎症因子,并强化肠道上皮细胞的紧密连接屏障。     

大豆球蛋白对仔猪小肠上皮细胞Occludin mRNA表达的影响

旨在研究纯化的大豆球蛋白对离体培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC细胞)通透性以及对细胞间紧密连接蛋白Occludin mRNA表达的影响。将不同浓度的大豆球蛋白(0～5.0mg·mL-1)与肠上皮细胞共同培养24h后,检测跨上皮细胞电阻值并用实时荧光定量PCR方法研究Occludin mRNA表达的变化规律。结果表明,与对照组相比,除大豆球蛋白浓度为0.5mg·mL-1时无明显变化,其他各浓度跨上皮细胞电阻值和Occludin mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P<0.001)。由此可知,大豆球蛋白使仔猪小肠上皮细胞通透性增加并使OccludinmRNA表达量下降,进一步明确了大豆球蛋白影响细胞增殖且对肠上皮细胞造成直接损伤,并破坏了肠上皮细胞完整性。     

锌指蛋白A20介导锌缓解鸡肠上皮细胞炎症反应的机制

本研究通过对鸡肠上皮细胞感染锌指蛋白A20基因siRNA病毒和A20基因腺病毒,探究锌与A20基因对缓解脂多糖(LPS)诱导的鸡肠上皮细胞炎症反应的作用。结果表明:LPS可显著上调鸡肠上皮细胞促炎因子白细胞介素(IL)-1β和IL-8的基因表达水平(P<0.05),作用的最佳剂量和时间分别是10 ng/mL和6 h。体外添加25μmol/L锌可显著缓解LPS诱导的鸡肠上皮细胞IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达水平和蛋白产量的提高以及Toll样受体4(TLR4)的转录激活。肠上皮细胞感染A20基因siRNA病毒后,A20的蛋白产量显著下调(P<0.05),IL-1β、IL-8和TNF-α的基因表达水平和蛋白产量显著升高(P<0.05),同时加剧LPS诱导的IL-8、IL-1β基因表达水平和IL-1β、TNF-α蛋白产量的提高(P <0. 05)。相对于对照组,加锌可促进胞浆中A20和核因子-κB(NF-κB) p65的蛋白表达,并下调磷酸化NF-κB p65的蛋白表达;在进行A20基因沉默后,导致胞浆中A20、NF-κB p65蛋白表达下调和磷酸化NF-κB p65、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达上调以及胞核中磷酸化NF-κB p65的蛋白表达升高,而加锌并不能改善。与感染空白腺病毒组相比,肠上皮细胞感染A20腺病毒可极显著提高A20的基因表达水平(P<0.01),并极显著降低IL-1β、IL-8的基因表达水平(P<0.01),且可极显著降低添加LPS导致的IL-1β、IL-8和TLR4基因表达水平的上升(P <0. 01)。锌添加可显著降低IL-1β的基因表达水平,显著提高NF-κB p65的基因表达水平(P<0.05)。综上所述,锌可通过A20-NF-κB p65信号通路缓解LPS诱导的鸡肠上皮细胞炎症反应。     

甲氨蝶呤通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导小鼠肠道损伤

研究旨在探讨甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对小鼠肠上皮更新的影响及其机理。选用体重相近的5～6周龄的昆明小鼠64只,随机分为两组,每组设32个重复,每个重复1只小鼠,连续2 d分别腹腔注射生理盐水和50 mg/kg BW MTX溶液,并于注射后72 h处死小鼠;同时用0.025、0.05、0.10μM和0.20μM MTX处理小鼠结肠癌细胞系CMT-93。结果表明,MTX可显著降低小鼠平均日采食量、日饮水量和日增重(P0.05);显著降低十二指肠、空肠和回肠肠重(P0.05),其中空肠肠重降低幅度最大,达到28.14%;MTX导致小鼠空肠绒毛顶部上皮细胞脱落,绒毛高度显著降低(P0.05),固有层裸露,隐窝增生明显,隐窝深度显著增加(P0.05),绒毛高度/隐窝深度比值显著降低(P0.05);空肠中ZO-1、Occludin、β-catenin和PCNA蛋白质表达显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白质表达显著增加(P0.05);0.025、0.05、0.10μM和0.20μM MTX处理CMT-93细胞24 h即可显著抑制其增殖活性(P0.05),且抑制效果呈剂量依赖性;0.025μM和0.05μM MTX显著降低CMT-93细胞跨膜电阻值(P0.05)和ZO-1、Occludin、β-catenin、PCNA蛋白质表达(P0.05),增加Caspase-3蛋白质表达。结果提示,MTX降低Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制肠上皮细胞增殖,促进其凋亡,破坏肠道屏障功能,诱导肠道结构损伤。     

宫内发育迟缓仔猪小肠形态和屏障功能相关基因的表达特征

为了研究宫内发育迟缓(IUGR)仔猪小肠形态和屏障功能相关基因的表达特征,选取24窝"长白×大白"杂交新生仔猪,每窝选取1头IUGR仔猪和1头正常出生体重(NBW)仔猪,分别于7、21和28日龄屠宰8头IUGR仔猪和8头NBW仔猪,采集小肠样品进行分析。结果表明:1)与NBW仔猪相比,IUGR仔猪7日龄时空肠绒毛高度、21日龄时空肠和回肠绒毛高度显著降低(P<0.05),28日龄时空肠隐窝深度显著提高(P<0.05)。2)与NBW仔猪相比,IUGR仔猪7日龄时空肠黏膜闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白-1(claudin-1)、闭合蛋白(occludin)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-8以及21日龄时空肠黏膜ZO-1和occludin、回肠黏膜ZO-1的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05);28日龄时空肠黏膜肿瘤坏死因子-α和回肠黏膜白细胞介素-1β的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),回肠黏膜IL-4的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)。综上所述,IUGR仔猪的空肠和回肠形态受损,紧密连接蛋白基因表达下调,免疫细胞因子表达异常,进而影响小肠屏障功能。     

β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

本研究通过测定大豆抗原β-Conglycinin酶解肽(52ku)对仔猪空肠上皮细胞(IPEC)通透性及紧密连接蛋白Occludin与ZO-1基因mRNA表达的影响,为探索其对肠道损伤的相关机制提供依据。本试验分别采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1、2mg·mL-1)52ku酶解肽处理IPEC 2、4、6、8、12、24h后,通过测定细胞存活力(MTT值)、跨上皮细胞电阻值(TEER)以及细胞培养液中碱性磷酸酶(AP)的活性,检测52ku酶解肽对细胞膜通透性的影响。并选取0.5mg·mL-1 52ku酶解肽处理IPEC 24h后,用实时荧光定量PCR方法检测Occludin与ZO-1基因mRNA表达量的变化情况。结果表明,52ku酶解肽处理仔猪空肠上皮细胞后,MTT值和TEER呈时间-剂量依赖性降低(P0.05)。24h处理后,AP活性呈显著升高趋势(P0.05)。与对照组相比,52ku酶解肽可使Occludin和ZO-1基因mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P0.05)。总之,52ku酶解肽使仔猪空肠上皮细胞通透性增加,并降低Occludin或ZO-1的mRNA表达。     

右美托咪定对腹腔镜气腹致大鼠肠损伤的影响

旨在探讨右美托咪定对气腹所致肠损伤的保护作用。将18只SD大鼠分为3组(6只/组):假手术组(Sham)、CO₂气腹组(CO₂)、右美托咪定组(DEX)。CO₂组和DEX组在2 kPa(15 mmHg)气腹压力下维持90 min建立气腹模型；DEX组在气腹前30 min腹腔注射50μg/kg右美托咪定；Sham组不通气腹，其余操作同CO₂组。气腹结束6 h收集小肠样本。通过HE染色观察小肠组织病理形态学变化；采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平；化学发光法检测MDA、GSH含量和MPO活性；采用RT-qPCR检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1的mRNA表达；Western blot检测HO-1、Nrf2、IKBα、NF-κB蛋白表达。结果显示：与Sham组相比，CO₂组IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA含量和MPO活力均极显著升高(P<0.01),GSH含量极显著降低(P<0.01),ZO-1、Occludin、...     

Chemerin对奶牛乳腺上皮细胞炎症和内质网应激及自噬的影响

体外培养奶牛乳腺上皮细胞,并用0.1 mg/L重组蛋白Chemerin处理细胞。Western blot检测炎症相关蛋白IL-1β和IL-6、自噬标志蛋白LC3和p62以及内质网应激关键蛋白GRP78和CHOP的表达;细胞免疫荧光染色分析细胞内活性氧(ROS)含量及p62蛋白表达定位情况。结果显示,Chemerin处理奶牛乳腺上皮细胞后,细胞内炎症因子IL-1β和IL-6、内质网应激蛋白GRP78和CHOP相对表达量及细胞ROS含量均显著上调(P0.05)。同时,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达明显上升(P0.01),而自噬底物p62呈显著性降低趋势(P0.01)。结果表明,细胞因子Chemerin可以通过调控相关基因的表达诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症的发生,同时激活内质网应激和自噬反应,其具体机制有待进一步阐明。     

早期断奶对仔猪肠通透性和肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA 表达的影响

本文旨在研究早期断奶仔猪的肠通透性变化并探讨其机制.试验采用32头21日龄断奶仔猪,并于仔猪21、28和35日龄取样测定血浆D-乳酸含量、二胺氧化酶(DAO)活性和尿中乳果糖/甘露醇比率观察肠通透性改变,同时检测肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA表达水平.结果显示:与断奶前相比,28日龄时血浆D-乳酸含量、DAO活性和乳果糖/甘露醇比差异达到显著水平(P<0.05),且至35日龄时,肠道仍然维持这种较高的通透性;仔猪断奶后Occludin mRNA相对表达量下降明显,与断奶前相比差异显著(P<0.05),35日龄时,表达量有所恢复,但仍然低于断奶前表达水平.试验结果提示,早期断奶后仔猪肠道的通透性增加,肠屏障功能破坏,可能归因于肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin mRNA表达下降.     

解淀粉芽孢杆菌SC06与肠毒性大肠杆菌K88对IPEC-1细胞转运载体、紧密连接、凋亡和免疫相关基因表达的影响

本试验以IPEC-1细胞为材料,探究解淀粉芽孢杆菌SC06(以下简称SC06)与肠毒性大肠杆菌K88(以下简称K88)对肠上皮屏障功能相关基因表达的影响。将IPEC-1细胞分为4个组并作不同处理:CK组为空白对照,不作处理; SC06组和SC06+K88组用含有108CFU/mL SC06的DM EM/F12培养基先预处理6 h,之后K88组和SC06+K88组加入含有108CFU/mL K88的DM EM/F12培养基处理3 h;乳酸脱氢酶(LDH)活性测定另设以含1%Trinton X-100的DM EM/F12培养基处理的Trinton组为阳性对照。各组细胞均培养9 h。结果表明:1)与CK组相比,K88和SC06单独处理均显著降低了葡萄糖转运载体2 (GLUT2)和小肽转运载体1(PepT1)基因的相对表达量(P<0.05),SC06单独处理显著增加了丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运载体2(ASCT2)和兴奋性氨基酸转运载体1(EAAC1)基因的相对表达量(P<0.05);与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了K88诱导的LDH活性和EAAC1基因相对表达量的增加(P<0.05)。2)与CK组相比,K88单独处理显著上调了闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)基因的表达(P <0.05),显著下调了密封蛋白(claudin)-3、claudin-4和黏蛋白-1(MUC1)基因的表达(P <0.05); SC06单独处理显著上调了ZO-1、claudin-4基因的表达(P <0.05); K88和SC06单独处理均显著促进了天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、凋亡相关因子(Fas)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因的表达(P<0.05),显著抑制了天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达(P<0.05),且K88单独处理还显著降低了天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著阻止了由K88诱导的ZO-1、caspase-3和Bcl-2基因相对表达量的增加(P<0.05)及claudin-3、claudin-4、MUC1、caspase-9和Bax基因相对表达量的降低(P <0.05)。3)与CK组相比,K88单独处理显著上调了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及转化生长因子β(TGF-β)基因的表达(P<0.05),并显著上调了核转录因子-κB-p50(NF-κB-p50)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、髓样分化因子88(MyD88)、核苷酸结合寡聚域1(NOD-1)及Toll样受体-4(TLR4)基因的表达(P <0. 05); SC06单独处理显著降低了IL-6、NOD1与Toll样受体-6(TLR6)基因的表达(P<0.05),显著上调了TG F-β和MyD88基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了由K88导致的MyD88、NOD-1及TLR4基因相对表达量的增加(P<0.05)。综上所述,K88诱导IPEC-1细胞发生炎症反应,破坏肠上皮细胞的完整性,SC06在一定程度上有缓解作用。     

辣木叶总黄酮对小鼠溃疡性结肠炎防治作用的研究

【目的】以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠为模型,探究辣木叶总黄酮(MOLF)对UC的防治作用。【方法】将50只BALB/c小鼠随机分为5组:对照组、DSS组(模型组)和MOLF-L(25 mg/kg)、MOLF-M(50 mg/kg)、MOLF-H(100 mg/kg)处理组,每组10只。小鼠通过饮用4% DSS诱导UC模型,各MOLF处理组灌胃相应剂量药物0.2 mL,对照组和DSS组灌以等体积的生理盐水,每天1次,连续7 d。每天记录各组疾病活动指数(DAI),在末次给药的次日经眼眶静脉丛采血,分离血清测定白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和内毒素(LPS)含量;小鼠脱颈处死后取结肠组织进行HE染色观察组织形态、PAS染色观察组织杯状细胞数量变化;实时荧光定量PCR法检测结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-10、HMGB1 mRNA表达水平;免疫荧光法检测肠黏膜闭锁连接蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)表达情况;Western blotting分析凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、Bcl-2、Bax的表达水平。【结果】UC小鼠造模成功,DSS组小鼠体内LPS、炎性因子含量、cleaved-caspase 3和Bax蛋白表达量与对照组相比差异极显著(P＜0.01);不同剂量MOLF均可以改善UC小鼠体内炎症状况,尤以MOLF-H组效果最佳:与DSS组相比,DAI评分以及血清中LPS含量极显著降低(P＜0.01),小鼠血清和结肠组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、HMGB1含量和mRNA表达量均极显著降低(P＜0.01),抗炎因子IL-10的表达量极显著升高(P＜0.01),且cleaved-caspase 3和Bax的表达量极显著上调,Bcl-2的表达量极显著下调(P＜0.01)。此外,MOLF可以改善结肠黏膜水肿、炎性细胞浸润情况,维持杯状细胞数量及其形态,增加ZO-1和Occludin蛋白表达量,且这些作用具有剂量依赖性。【结论】MOLF对DSS诱导的UC具有显著的防治作用,这可能与其抑制炎症并维护肠黏膜屏障的完整性有关。     

抗生素诱导肠道菌群失调对肠黏膜屏障和肝脏功能的动态影响

为了观察不同程度肠道菌群失调模型中肠黏膜屏障和肝脏功能的动态变化,采用头孢曲松钠复制小鼠肠道菌群失调模型,分别于造模处理的第3天、第6天、第10天取小鼠盲肠内容物进行16S rDNA基因测定,苏木精-伊红(HE)染色观察回肠组织病理变化,透射电镜观察回肠组织紧密连接情况,免疫组织化学法观察回肠组织闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的阳性表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肠组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,同时检测肝脏功能指标,包括肝组织匀浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性及肝组织病理变化。结果显示:与正常组相比,头孢曲松钠处理3、6或10 d后,模型组小鼠肠道中除金黄杆菌属、普氏菌属、假单胞菌属的相对丰度逐步上升外,芽孢杆菌属、Lo-tus、葡萄球菌属的相对丰度逐步下降。模型组小鼠回肠组织中ZO-1阳性表达和肠上皮细胞间的紧密连接随着头孢曲松钠处理时间的延长逐渐下降。与正常组相比,模型组肠组织匀浆中TNF-α、IL-1β含量在菌群失调初期(头孢曲松钠处理3、6 d时)无显著变化(P0.05),菌群持续失调(头孢曲松钠处理10 d时)后其含量极显著上升(P0.01);同时,菌群持续失调会累及肝脏,表现为模型组肝组织匀浆中ALT、AST活性较正常组极显著上升(P0.01),肝细胞肿胀,肝索结构紊乱。以上结果提示,长时间的肠道菌群失调会导致肠道稳态被破坏,表现为肠黏膜屏障的破坏加重,肠道中炎症因子的含量逐渐上升,同时肝脏功能受到影响。     

胰高血糖素样肽-2对脂多糖应激的IPEC-J2细胞形态和紧密连接相关基因表达的影响

本研究旨在考察胰高血糖素样肽-2(Glucagons-like peptide-2,GLP-2)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对仔猪空肠上皮细胞及其紧密连接(Tight Junctions,TJ)相关蛋白基因表达的影响,并探讨GLP-2调控仔猪肠道TJ蛋白基因表达可能的作用机理。试验一设对照、GLP-2、LPS、LPS+GLP-2共4个组,考查各处理对IPEC-J2细胞形态和紧密连接关键蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1基因表达的影响。结果:添加100nmol·L-1 GLP-2能显著改善IPEC-J2细胞形态,显著提高Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表达(P0.01);100μg·mL-1 LPS处理能显著破坏细胞形态、降低IPEC-J2细胞紧密连接蛋白mRNA的表达(P0.01);在添加LPS基础上添加100nmol·L-1 GLP-2能有效维护细胞形态,显著增加IPEC-J2细胞TJ相关蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表达(P0.01),增加量分别为46.3%、65.1%和30.3%。试验二考察了添加PI3K特异性抑制剂Wortmannin(Wort)和LY294002(LY)阻断PI3K-Akt-mTOR信号转导途径后Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表达量的变化,试验共设对照、GLP-2、GLP-2+Wort、GLP-2+LY等4个组。结果:添加抑制剂Wort后可显著降低IPEC-J2细胞Akt、mTOR、Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表达(P0.01),降低量分别为46.9%、50.5%,38.1%、49.6%和18.9%;添加LY后上述mRNA的表达量分别显著降低了67.2%、70.8%,49.6%、60.9%和25.8%(P0.01)。以上结果表明:添加GLP-2能够有效抑制LPS应激对IPEC-J2细胞形态和TJ相关基因表达的损伤,PI3K-Akt-mTOR信号转导途径可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。     

白屈菜碱对H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H₂O₂构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H₂O₂造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因...