宜良县鸭疫里默氏杆菌分离株的血清型鉴定及药物敏感性试验

对2008～2010年从云南宜良县鸭传染性浆膜炎病鸭中分离的鸭疫里默氏杆菌的血清型和抗药性进行了调查和分析。在89个鸭场中共分离鉴定出鸭疫里默氏杆菌67株。平板凝集试验结果表明血清1型菌株有61株,占分离株总数的91．04％,是宜良县鸭疫里默氏杆菌的优势血清型。以纸片法测定了所分离菌株对18种常用抗菌药物的敏感性,仅头孢噻吩、氟苯尼考和阿莫西林相对敏感,敏感菌株的比例分别为100％、82．90％和62．69％。此外,多重耐药现象严重。     

不同地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解不同地区鸭疫里氏杆菌病的流行情况,并进一步测定这些地区鸭疫里氏杆菌对常用抗菌药物的敏感性。本试验从广东云浮、广东开平、浙江常山3个地区疑似传染性浆膜炎病鸭中进行了细菌分离,通过鉴别培养、染色镜检、生化试验等对分离菌进行鉴定。采用微量稀释法测定了分离菌株对常用药物的最小抑菌浓度。结果从3个地区共分离鉴定出16株鸭疫里氏杆菌。药敏试验结果表明,3个地区鸭疫里氏杆菌均对头孢类和氟苯尼考高度敏感,对多西环素、大观霉素比较敏感;对恩诺沙星,新霉素等其他受试药物呈不同程度的耐药。本研究为鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药物敏感性测定提供了系统方法,为临床选择合理药物防制鸭传染性浆膜炎提供了理论指导。     

广东省肇庆地区鸭疫里氏杆菌病的调查

在广东省水禽养殖较密集的肇庆地区选择4个鸭疫里氏杆基本国策4 病发病鸭场和1个未发病鸭场，采集病料，进行病原分离，并用玻片凝集试验和琼脂扩散试验检测分离株的血清型。结果表明，该地区流行的鸭疫里氏杆菌（RA）仍以1型为主，但有1株与RA1型抗血清无交叉反应。对RA分离株进行8种抗生素的敏感性试验显示，分离株对丁胺卡那霉素极度敏感，对头孢唑啉、新霉素、头孢氨苄高度敏感，对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、恩诺沙星有不同程度的抗药性。     

苏北及周边地区鸭疫里氏杆菌分离鉴定与药敏试验

2018—2019年对苏北及周边地区多个设点连续采样255份鸭和鹅组织病料。通过细菌培养、染色及种属特异性基因的检测,分离得到30株鸭疫里氏杆菌。用1型、2型阳性血清对其进行血清型鉴定证实,15株为1型,未检出2型,其余15株为未定血清型。采用K-B纸片法对分离菌株进行了药物敏感试验。分离菌株对多黏菌素B耐药,对复方新诺明、克林霉素、庆大霉素、新霉素、氨苄西林有不同程度的耐药性,对阿莫西林中度及高度敏感,对头孢哌酮、环丙沙星、多西环素、氟苯尼考高度敏感。进一步的分析表明,在不同菌株中,利福平的耐药性呈现离散分布,头孢哌酮、环丙沙星、多西环素、氟苯尼考耐药性呈现集中分布,同样属于1型鸭疫里氏杆菌的菌株中,耐药性的差别也较大,提示为不同菌株所引起。结果表明,近期苏北及周边地区鸭疫里氏杆菌的流行呈现多血清型特点,可同时感染雏鸭雏鹅,耐药情况较严重,特别是出现了对多黏菌素的耐药性,值得关注和进一步研究。     

广东省Ⅰ型鸭疫里氏杆菌分离鉴定及PFGE分型研究

本文旨在研究广东地区Ⅰ型鸭疫里氏杆菌流行分布情况及其分子分型特点。2007—2017年,收集广东地区病死鸭、鹅的脑或肝组织等样品,进行菌株的分离、纯化及PCR鉴定等试验;采用玻片凝集的方法对鸭疫里氏杆菌进行Ⅰ型血清型鉴定,并进一步对血清Ⅰ型菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,用BioNumerics 6.0软件进行聚类分析,比较同源性。结果表明:2007—2017年本实验室共分离保存220株鸭疫里氏杆菌,其中有119株为Ⅰ型血清型,占总分离株的54.09%。PFGE分型得到33种不同的PFGE分型图谱(以相似度≥85%为判断标准),可分为19个簇及14个单一型。血清Ⅰ型是广东地区鸭疫里氏杆菌的优势血清型。Ⅰ型鸭疫里氏杆菌分子型别呈现多样化,菌株之间的同源性差异较高,但存在小范围的克隆传播。     

山东鸭疫里氏杆菌血清型鉴定及免疫防制

从山东部分鸭场分离到51株鸭疫里氏杆菌并用凝集试验进行了血清型鉴定,结果表明:山东存在鸭疫里氏杆菌的血清1型、2型、3型、7型、8型及血清未定型,其中血清1型和2型为主要血清型,占分离株的66.8%。将分离到的鸭疫里氏杆菌作成油佐剂多价灭活苗,其免疫效果显著。     

河北故城地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和血清型分析

对河北省故城地区送检的疑似鸭疫里默氏杆菌感染发病的病鸭进行病原菌的分离鉴定,根据培养特性和生化鉴定结果鉴定出13株鸭疫里默氏杆菌,并对分离菌进行了血清型鉴定和药物敏感试验;经玻片凝集试验和琼脂扩散试验得出血清1型5株,血清2型4株,血清6型1株,血清10型1株,还有2株未定型。试验证明血清1、2型是目前故城地区鸭疫里默氏杆菌的主要流行血清型,分离菌株对雏鸭有很强的致病性且耐药谱较广,但对氧氟沙星、盐酸恩诺沙星和氟苯尼考较为敏感。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况和药物敏感性,本研究对广东省、山东省、江苏省等地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病料进行病原分离和鉴定,并测定分离株对抗菌药物的敏感性。结果显示,共鉴定到46株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型、10型和15型菌株依次为9株、25株、1株和1株,未定血清型菌株10株;RA分离株普遍对林可霉素、多粘菌素和诺氟沙星耐药,表明RA分离株对临床常用药出现了不同程度的耐受;易感鸭的动物回归试验能够复制出典型的原始病例,且可从死亡雏鸭中分离到同源菌株。该研究结果为鸭疫里默氏杆菌病疫苗选用和临床用药提供了科学的参考依据。     

鸭疫里氏杆菌南昌分离株的16S rDNA鉴定与药敏分析

为了对从南昌某疑似鸭疫里氏杆菌病的病死雏鸭大脑、肝脏中分离得到的1株菌株进行16S rDNA鉴定,并筛选敏感药物,试验采用染色镜检、PCR扩增、测序与序列比对分析及药敏纸片扩散法等对分离株进行研究。结果表明:经染色镜检,分离菌呈革兰氏染色阴性,菌体为单个或成双排列的小杆菌,无芽孢,将其命名为NC-RA1;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的条带;分离株NC-RA1与鸭疫里氏杆菌16S rDNA基因同源性高达99%;分离株NC-RA1对氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟敏感,对四环素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等药物耐药。说明该分离株为鸭疫里氏杆菌,并且可以用氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟对其进行防治。     

血清5型鸭疫里氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究

1994年1月至2000年10月，从全国25个省、自治区、直辖市的5－90日龄患典型鸭疫里氏杆菌病的种鸭和商品鸭中分离到89株血清5型鸭疫里氏杆菌。对其病原学特性研究结果表明，血清5型鸭疫里氏杆菌病在我国鸭群感染范围极广；分离菌株对雏鸭具有很强的致病性，对小白鼠无致病性；各地分离菌株表现出一致的形态特征和非常相似的生理生化特性；各地分离力株耐药谱很广，但对头孢类药物和利福平高度敏感。用分离菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭具有很好的免疫原性。     

血清9型鸭疫里默氏杆菌在华南地区的分离鉴定

本研究于2009年7月～2010年4月针对广东、广西、福建等养鸭密集地区进行鸭疫里默氏杆菌(RA)流行病学调查,并分离到5个RA分离株。经形态特征、生化特性和血清学鉴定表明,5个分离株与血清9型RA相似。对16S rRNA部分基因进行序列测定,并与GenBank中登录的菌株16S rRNA基因序列进行比对及系统进化分析显示:该5株分离株与报道的RA H-1785、H-2199、H-2565和P-2123的16S rRNA序列相似性较高,同源性达99.1%～99.7%,进一步证实这5个分离株为血清9型RA。     

我国鸭疫里氏杆菌血清型的鉴定

１９９７年１月－１９９８年３月,从北京市２０个商品鸭场自然病死的北京白鸭和河南省与上海市部分鸭场的樱桃谷鸭分离到２７６株鸭疫里氏杆菌,采用凝集试验和琼脂扩散沉淀试验,对其进行了血清型的研究。其中７０株细菌为１型,６４株为２型,其余１４２株怀１,２,型参考菌株的抗血清发生反应。     

血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100％.对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108 cfu、3.25×108 cfu和2.37×106 cfu.选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50 WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100％.     

Minimal inhibitory concentrations of antimicrobial agents against Actinobacillus pleuropneumoniae.

Forty-five isolates of Actinobacillus pleuropneumoniae were tested for susceptibility to 12 antimicrobial agents using a microdilution method for the minimal inhibitory concentration determinations. These results confirmed the high prevalence of A. pleuropneumoniae strains resistant to antibiotics as reported earlier using the disc diffusion method (Kirby-Bauer method). While 36% of the isolates were resistant to the penicillins, 47% were resistant to chloramphenicol and 68% were resistant to tetracycline. Minimal inhibitory concentrations for the resistant isolates were approximately 32 times higher than those for the susceptible isolates to the above antibacterial agents. The isolates were in general weakly susceptible or resistant to spectinomycin, lincomycin, tiamulin and spiramycin whereas most of them were susceptible to gentamicin, trimethoprim and erythromycin. The susceptibility pattern was similar throughout the 1980 to 1984 period. The 14 serotype 5 isolates were more resistant to tetracycline but less resistant to chloramphenicol and the penicillins than the 28 serotype 1 isolates.     

广东省广州市猪禽屠宰场环境沙门氏菌血清分型与耐药性分析

为了解广东省广州市屠宰环节环境中沙门氏菌血清型分布及其耐药性,对广州市大型生猪、家禽屠宰企业环境进行监控,对比分析猪禽屠宰场污染的沙门氏菌主要血清型和耐药谱。采集屠宰场的空气、土壤、污泥样品,以及运输车辆、待宰圈/舍、屠宰车间等环境拭子样品,利用沙门氏菌特异性引物进行PCR扩增和测序鉴定;通过玻片凝集法,对PCR鉴定阳性菌落进行沙门氏菌血清分型;同时,对鉴定出的沙门氏菌进行12种抗生素耐药性分析。结果显示:55个样品池中,沙门氏菌阳性检出率为18.18%;猪禽屠宰场之间沙门氏菌污染率无显著差异(P>0.05),而不同类型样品之间差异显著(P<0.05),其中排污池污泥(75.00%)、土壤(33.33%)和屠宰车间(23.53%)污染率较高;猪屠宰场沙门氏菌优势血清型为鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium),而禽屠宰场为肠炎沙门氏菌(S.enteritis);所有分离菌株对阿莫西林、氨苄西林2种抗生素完全抗药,对亚胺培南完全敏感,对头孢曲松、头孢他啶、头孢噻吩、氨曲南4种抗生素高度敏感。结果表明:猪禽屠宰场环境中,沙门氏菌污染较为严重,污泥、土壤和屠宰车间是沙门氏菌污染扩散的主要环节;猪禽屠宰场污染的沙门氏菌优势血清型并不同,且环境中污染的沙门氏菌都对部分常用抗生素产生了完全抗药。结果提示:应加强猪禽屠宰环节的沙门氏菌污染控制,将污泥、土壤、屠宰车间作为日常消毒的重点;基层应针对猪禽各自的优势血清型菌株,选用高度敏感抗生素进行沙门氏菌病防治。     

Molecular fingerprinting of Riemerella anatipestifer by repetitive sequence PCR.

Riemerella anatipestifer is a gram-negative rod-shaped bacterium associated with epizootic infections in poultry. A total of 35 R. anatipestifer isolates including the type strain ATCC11845T, reference and field strains for 18 different serotypes were characterized by repetitive sequence based-PCR (rep-PCR) with outwardly-directed primers based on the repetitive extragenic palindromic (REP) consensus sequence. This technique was applied by using either extracted genomic DNA or preparation of whole bacterial cells harvested directly from plate cultures. Rep-PCR discriminated the R. anatipestifer isolates into 19 electrophoretic types. DNA fingerprints obtained from rep-PCR of extracted genomic DNA or from preparations of whole cells yielded comparable patterns. Substantial variation was seen among the rep-PCR fingerprints of different serotypes. Moreover, different polymorphisms of the rep-PCR fingerprints were evident among epidemiologically unrelated isolates of the same serotype. These results suggest the presence of repetitive extragenic palindromic-like elements within the genome of R. anatipestifer that can be used in some isolates to discriminate between different strains belonging to the same serotype. Rep-PCR may serve as a useful molecular tool for subtyping R. anatipestifer isolates for epidemiologic investigations. The whole cell procedure offers the advantage of ease of performance requiring only small quantities of cells.     

广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。     

珠三角及邻地鸭疫里默氏杆菌主要生物学特性的研究

为明确珠三角地区鸭疫里默氏杆菌(RA)的药物敏感性、血清型类型及其同源性,本研究对100株鸭源及鹅源RA进行分离与鉴定,并采用琼脂扩散试验进行血清型分类及其对12种药物的敏感性试验;选取10个代表株测定其对7日龄雏鸭的致病性及ompA基因序列,比较相互间的同源性以及其它生物特性的关系。结果表明:分离株的生化特性基本一致,代表株对雏鸭具有强的致病性;所有菌株具有一重以上的耐药性,63株细菌具有双重或多重耐药性,97%的菌株对奥格门丁敏感,其它药物敏感度依次为壮观霉素、青霉素、环丙沙星、氨苄西林、链霉素、诺氟沙星、罗红霉素、磺胺甲噁唑、利福平和卡那霉素;93%的菌株对庆大霉素耐药,表明该地区RA对大部分常用药物产生一重或多重耐药;100株菌株分属于4种血清型,其中83株属于血清1型,属于其它3个血清型的菌株分别有10株、5株和2株,以第4种血清型致病性最强;10个代表株中9株的外膜蛋白基因序列同源性达96%以上,5株为100%,1株与其它株的同源性为90.1%～90.4%,表明10株菌的外膜蛋白基因序列的同源性较高,外膜蛋白基因与血清型和菌株的致病性无直接关系。     

新兴地区鸭疫里默氏杆菌血清3型的分离鉴定

通过对广东省新兴地区某番鸭养殖场疑似鸭疫里默氏杆菌病的病死鸭进行病原分离、生化鉴定及血清学鉴定,确诊该次疫情为鸭疫里默氏杆菌血清3型所引起。     

Serologic types and physiologic characteristics of 46 avian Pasteurella anatipestifer cultures

Forty-six strains of Pasteurella anatipestifer isolated from different avian species were examined to determine their serologic types and physiologic characteristics. Serologic types were determined by a gel-diffusion precipitin test. Antigens from 39 field isolates reacted with antisera prepared from seven P. anatipestifer reference strains representing serotypes 1, 2, 4, 6, and 7. Antigens from five isolates did not react and could not be typed with available reagents. Gel precipitin reactions involving serotype 1 (43.6%) and serotype 2 (25.6%) were the most prevalent. Generally, the physiologic characteristics from 40 tests were typical for P. anatipestifer, and variations were observed among the strains in urease production, hemolysin production, litmus milk reaction, and gelatin liquefaction.