采卵间隔时间对山羊活体采卵效果的影响

目前从离体卵巢采集卵母细胞是体外受精研究所需卵母细胞的主要来源之一.一般是从屠宰场采集母畜的卵巢,抽取卵巢上的卵母细胞.但我国缺乏良种羊的卵巢资源,故所采卵母细胞种质一般较差,而且其系谱不明.而活体采卵技术(Ovum Pick-up OPU)正是解决当前我国体外受精研究中存在的卵母细胞资源缺乏、系谱不明等问题的有效手段.羊的活体采卵主要有三种方法:常规手术法、B型超声波法和腹腔镜法.腹腔镜法活体采卵(Laparoscopic Ovum Pick-up LOPU)操作相对简便,对羊的伤害较小,可重复采卵;而常规手术法对羊的伤害较大,较难重复采卵; B型超声波法活体采卵技术需要大量的练习才能掌握,可见卵泡数和获卵数较少.因此羊的活体采卵在国外应用最为广泛的方法当属LOPU.Snyder和Dukelow在1974年首先将腹腔镜用于绵羊的活体采卵,获得了6枚卵母细胞,然而当时并没有得到充分的发展,随着胚胎体外生产技术的发展,直到近些年在国外才逐渐得到应用.而在国内,这方面的研究甚少,因此本实验开展了山羊LOPU的探索研究.     

羊活体采卵技术研究进展

随着羊胚胎生物技术的发展,尤其是胚胎体外生产、转基因的研究,科研生产中对卵母细胞的需求越来越大。传统的从屠宰场卵巢获得卵母细胞有许多不足,因此,发展活体采卵技术显得迫切。国内有关羊活体采卵的报道较少,文章介绍了羊活体采卵方法的基础分析影响活体采卵效率的各种因素。     

牛活体采集卵母细胞技术的研究

本研究利用自制采卵器对 2 4头健康牛和 2 0头有生殖障碍牛进行活体采集卵巢卵母细胞试验。卵母细胞回收率 4 2 .9% ,共采集卵母细胞 397枚 ,其中可用卵 2 6 6枚 ,占 6 6 .7% ,平均每头母牛获卵母细胞和可用卵母细胞数分别为 9.0 2枚和 6 .0 4枚。采集的卵母细胞经体外受精和体外培养 ,移植受体母牛 ,成功地分娩了我国第一头活体采卵牛犊     

水牛分离精子与不同来源卵母细胞体外受精的效果研究

本研究的目的是探讨水牛分离精子与不同来源(活体采卵或屠宰场卵巢采卵)卵母细胞体外受精的效果。活体采卵是选用20头空怀河流型母水牛(其中摩拉母牛12头,尼里-拉菲母水牛8头)每间隔3 d采卵1次,连续采卵5~6周,活体采集卵母细胞;屠宰场卵巢采卵是收集屠宰场水牛卵巢,用10 mL注射器连接18 G针头吸取水牛卵巢上可视的卵泡来收集卵母细胞。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、然后用分离或未分离精子进行体外受精以及体外培养至囊胚。结果发现:活体采卵组和屠宰场收集的水牛卵母细胞组用分离精子受精分裂率和囊胚率没有差异(P>0.05);分离精子和未分离精子的体外受精分裂率和囊胚率也没有差异(P>0.05)。由此说明,水牛分离精子可以用于体外生产性控胚胎。     

用B型超声波导引活体采集奶水牛的卵母细胞

本试验利用B型超声波导引活体采集42头奶水牛的卵母细胞,每头牛每周采卵2次,共采卵96次,卵母细胞回收率67%,可用卵母细胞数平均为3.1,成熟培养的囊胚率平均为24.7%.对水牛的卵巢观察结果表明活采对水牛的健康及生殖机能不产生影响.     

水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育的研究

本研究比较了不同来源的水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育。对10头摩拉母水牛连续6周进行活体采卵,共采集292枚卵母细胞,头均回收卵母细胞4.87枚,头均A级卵数为3.07枚,从屠宰场收集74头水牛卵巢共采集559枚卵母细胞,头均回收卵母细胞和A级卵母细胞分别为7.55枚和5.20枚,均显著高于活体采集的水牛卵母细胞(P<0.01)。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、体外受精和体外培养至囊胚。结果表明,活体采卵组和屠宰水牛卵母细胞组受精分裂率差异不显著,分别为54.81%和57.73%。屠宰水牛卵母细胞组的囊胚率则高于活体采卵组(28.78%vs21.34%,P<0.05)。利用两组的胚胎进行常规法冷冻保存,冻胚解冻后的存活率差异不显著(P>0.05)。     

牛活体采卵技术研究进展

应用活体采卵技术可以从活体母牛反复采集大量系谱明确的卵母细胞,用于胚胎的体外化生产。本文将对牛活体采卵技术的研究进展和操作方法进行综述,分析影响活体采卵效果的因素和存在问题,并论述活体采卵在家畜育种和胚胎生物技术等方面的应用前景。     

幼龄绒山羊的活体采卵技术

应用活体采卵技术可以从母羔活体反复采集大量系谱明确的卵母细胞，用于胚胎的体外化生产。本文将对小母羊的超数排卵与活体采卵技术的操作方法进行综述，分析影响活体采卵效果的因素和存在的问题，并论述活体采卵在绒山羊育种和胚胎生物技术等方面的应用前景。     

影响牛活体采卵效果因素的研究进展

利用活体采卵技术可以连续采卵数周,每周两次,而不影响供体的正常生产,而且几乎在任何体况下都可以采卵,因此,活体采卵是目前唯一一种可以替代超数排卵的技术。目前活体采卵主要用于牛,在羊、马、水牛等体型较大的家畜也有应用,但应用相对较少,在这以牛为例总结一下影响活体采卵的各种因素,主要包括以下四个方面。1供体牛的体况1.1年龄青年母牛(13～15月龄)甚至性成熟前的犊牛(6～9月龄)都可作为OPU的卵母细胞供体,且不会影响这些牛卵巢的功能和以后的妊娠率(Brown等,1996)。年龄对可采卵泡数的影响报道不完全一致。Kruip等(1994)、Bunga…     

山羊活体采卵及卵母细胞体外受精研究

选择健康空怀山羊母羊,随机分组,分别用PMSG1000u和FSH325~375u超数排卵处理,研究利用外源激素进行超排对山羊活体采卵效果的影响,比较活体采集与屠宰场采集的卵母细胞体外受精效果。结果表明,经超排处理后,卵巢明显增大,同时提高了采集卵母细胞的数量和质量。用FSH超排,≥2mm的卵泡数为23.00个±5.69个,采集卵母细胞数为12.67枚±4.06枚,极显著大于对照组(P<0.01)。活体采集的卵母细胞的体外成熟率及受精率分别为44.44%和33.33%,均略高于从屠宰场获取卵巢采集的可用卵泡卵母细胞,但差异不显著(P>0.05)。     

通过活体采卵(OPU)的方法来进行牛体外胚胎生产的研究

近年来，体外胚胎生产的技术日益提高，尤其是在牛上应用比较广泛，在1988年由体外生产的胚胎最后可移植到受体的数目达到30000枚，靠超声波引导从活体上采集卵母细胞（OPU）进行体外胚胎的生产的方法现在被广泛采用，这种方法可以使活体持续性的生产胚胎，大大地提高了繁殖效率。且活体采卵是一项非常灵活、方便的技术，通常1周可以采集2次，连续许多周，都不影响供体的繁殖潜力，通常依靠活全采卵的方法（OPU）所获得的平均每8～10个卵母细胞中就可生产出2枚可移植的胚胎，从而提高了胚胎的生产效率，缩短了世代间隔，而且用活体采卵的方法（OPU）所生产的胚胎质量也要好于屠宰的卵巢上所获得的卵母细胞生产的胚胎。目前，这种方法除在牛上应用外、也在其它动物如水牛，马上采用。     

影响山羊腹腔镜法活体采卵效果的研究

用屠宰厂采集的卵巢作为实验材料,比较了不同型号的采卵针对卵母细胞回收效果的影响,结果9号和12号针的回收率分别为66.78%和62.41%,显著高于7号针的52.63%(P<0.05);可用率分别为63.59%和68.82%,也显著高于7号针的55%(P<0.05)。在活体采卵实验中,比较了不同采卵间隔时间对活体采卵效果及供试羊卵巢损伤情况的影响,结果间隔1周组的每次每只卵泡数(12.08个)、每次每只获卵数(8.75枚),均显著低于间隔2周组(15.58个,11.97枚)和3周组(14.91个、11.42枚)(P<0.05)。间隔1周重复活体采卵对卵巢的损伤较大,卵巢表面有较多的血斑;间隔2周组和3周组卵巢基本能够恢复正常。同时还比较了离体卵巢与LOPU获得的卵子对体外受精效果的影响,二者在卵裂率(85.14%对83.33%)和桑椹胚率(52.38%对45.58%)方面差异不显著(P>0.05),但囊胚率差异显著(P<0.05),分别为30.16%和14.71%。     

雪龙黑牛活体采卵与屠宰采卵在体外受精技术中的应用研究

利用超声波活体采卵技术(ovum pick-up,OPU)对12头纯种雪龙黑牛间隔4d采卵2次,对51头F2代遗传性能优秀的雪龙黑牛每周采卵1次,并对活体采卵与屠宰采卵及体外受精后胚胎的发育进行了对比分析.结果表明,活体采卵第2次卵泡数比第1次多82个,而获得的卵母细胞数第2次比第1次少1 2枚;屠宰采卵优秀卵母细胞率高于活体采卵,并且囊胚发育率高于活体采卵.     

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验.在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较.同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法.结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P＜0.01).(2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P＜0.05).(3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化.(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎.     

奶牛超数排卵手术取卵试验初报

成熟的卵母细胞是转基因、核移植技术的必要条件,目前获得牛卵母细胞的主要途径有两个。一是通过屠宰场获得卵巢,在实验室抽吸得到卵母细胞进行体外成熟培养(IVM),这是目前研究采用的主要方式。第二是使用B超引导,经阴道活体穿刺取得卵母细胞进行体外成熟培养,活体采卵技术目前仍需要完善。很多研究表明,卵母细胞体外成熟过程中胞质发生的一些事件对其后合子的基因启动     

卵母细胞来源对水牛体细胞核移植胚胎发育潜能的影响

[目的] 探索不同来源卵母细胞对体细胞核移植（SCNT）重构胚的发育能力及发育潜能关键蛋白表达水平的影响。[方法] 试验分为活体采卵（OPU）和屠宰场（SLH）卵巢2组,OPU组用超声波活体采卵仪穿刺抽吸10头非泌乳期经产水牛卵巢的卵泡采卵,SLH组从屠宰场卵巢抽吸卵泡采卵。获得的卵母细胞分别进行体外成熟,体外成熟22~24 h后,吹打去除卵丘细胞,挑选具有第一极体的卵母细胞,去核后与水牛耳部成纤维细胞进行SCNT,分别统计SCNT重构胚的融合率、分裂率和囊胚率,用免疫荧光检测2种SCNT重构胚的E-钙黏蛋白（E-cadherin）和转录因子Sox2蛋白的表达水平。[结果] OPU组卵母细胞成熟率及其SCNT重构胚的囊胚率均显著高于SLH组（P<0.05）,但2组SCNT重构胚的融合率和分裂率均无显著差异（P>0.05）;免疫荧光结果显示,E-cadherin蛋白定位于细胞膜上,Sox2蛋白分布在细胞核膜及细胞质中,OPU组SCNT重构胚中E-cadherin和Sox2的表达水平均显著高于SLH组（P<0.05）。[结论] 活体采集的水牛卵母细胞更适合用于SCNT重构胚的构建。     

影响水牛活体采卵效果的因素研究

为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3～12岁、体重400～700 kg的尼里拉菲水牛52头（其中3～7岁40头、8～12岁12头）,根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下（包含3个月）和3～9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明：冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季（P<0.05）和夏季（P<0.01）,且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节（P<0.01）;3～7岁牛的头均可用卵母细胞数比8～12岁牛的多1.78枚（P<0.05）;活体连续采卵时间在3个月以下（包含3个月）的卵母细胞可用率比连续采卵3～9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3～7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。     

奶牛活体采卵-体外受精效率的影响因素研究

为建立稳定高效的活体采卵-体外受精技术体系,提高体外胚胎生产效率,本研究先利用屠宰场采集的新鲜卵巢卵母细胞进行体外受精,通过胚胎发育潜力来筛选最佳的体外胚胎培养液;再进一步研究不同种公牛精液和供卵母牛对活体采卵-体外受精效率的影响。结果显示,CR1aa培养液和mCR1aa培养液卵裂率差异不显著（P>0.05）,但mCR1aa组的囊胚发育率显著提高（28.1% vs 20.6%,P<0.05）;选取的3头荷斯坦种公牛精液的活体采卵-体外受精胚胎的卵裂率差异不显著（P>0.05）,但1号种公牛精液体外受精后囊胚率（38.7%）显著高于2号和3号（23.8%&22.9%）（P<0.05）;随机选择的3头活体采卵供体母牛（H1、H2、H3）获得的头均可用卵母细胞数无显著差异,但H1和H2供体母牛体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率均显著高于H3供体牛（P<0.05）,且H1供体牛体外受精囊胚率显著高于H2供体牛（P<0.05）。结果表明,mCR1aa培养液能显著提高体外受精囊胚发育率,适用于体外胚胎生产;种公牛精液和供体母牛个体差异会直接影响活体采卵-体外受精胚胎的生产效率,为奶牛活体采卵-体外受精生产技术体系的优化提供参考。     

提高绵羊卵母细胞发育能力的研究

近年来，研究者对羊卵巢在培养前的保存温度与时间，采卵方法等因素进行了研究，取得一些重要成果。在绵羊的体外受精研究中也发现，从不同温度保存的卵巢中采取的卵母细胞色泽变化明显。此次试验就绵羊卵巢的不同保存温度以及不同的采卵方法对卵母细胞发育能力的影响进行了研究，以期为提高绵羊胚胎体外生产效率提供有用的参考依据。     

羊卵母细胞体外受精研究进展

目前,羊的体外受精技术尚不完善,存在很多问题亟待解决。对近年来羊卵巢卵母细胞体外受精技术的研究现状和进展进行了综述,其中包括卵巢卵母细胞的采集、卵母细胞体外成熟、精子体外获能、体外受精。并且就影响卵巢卵母细胞体外成熟的因素和体外受精的方法进行了探讨。