被膜态与浮游态猪源乳杆菌上清液抑菌活性比较分析

试验旨在比较分析猪源约氏乳杆菌L-76和嗜淀粉乳杆菌L-102被膜态和浮游态下其上清液对病原菌的抑菌活性。采用结晶紫染色法测定L-76和L-102的生物被膜形成能力,研究其被膜态和浮游态乳杆菌上清液及上清液与不同影响因素作用后的抑菌活性,并利用扫描电镜观察其两种状态下的上清液对指示菌形态的影响。结果显示,L-76、L-102乳酸菌具有较强的生物被膜形成能力,被膜态和浮游态乳杆菌L-76、L-102具有良好的抑菌活性,其上清液经蛋白酶作用后,被膜态L-76和L-102上清液的抑菌圈直径比浮游态明显变小;经过氧化氢酶和不同温度作用后,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌活性无明显变化(P0.05),但在pH 3.0作用下,两种状态的乳杆菌上清液的抑菌效果最好;扫描电镜结果显示,被膜态乳杆菌上清液对金黄色葡萄球菌的形态影响略大。综上所述,两种状态下乳酸杆菌上清液中均含有抑菌物质,且被膜态乳酸杆菌上清液中的抑菌物质含量略多或活性略高。     

被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响

本试验旨在比较被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响。制备被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39,采用平板计数法比较不同生物状态的植物乳杆菌LR-39经酸、胆盐环境处理后的存活率。选取15只3.5月龄比格犬,随机分为被膜组、浮游组及对照组3个组,每组5只。被膜组、浮游组每日早上采食犬粮后分别灌饲被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39菌液1 mL (1×10~9CFU/mL),对照组灌饲等体积磷酸盐缓冲液(PBS),连续灌饲28 d。检测血清免疫球蛋白G(IgG)、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并对肠道菌群进行16S rDNA高通量测序分析。结果表明:1)经酸性和胆盐环境处理后,被膜态植物乳杆菌LR-39存活率显著或极显著高于浮游态植物乳杆菌LR-39(P0.05或P0.01)。2)与对照组相比,被膜组血清IgG和sIgA含量极显著提高(P0.01);与浮游组相比,被膜组血清sIgA含量极显著提高(P0.01),血清IL-6含量有降低趋势(0.05≤P0.10);与对照组相比,浮游组血清IgG、sIgA、IL-6、TNF-α含量无显著差异(P0.05)。3)α多样性分析显示,与对照组相比,被膜组和浮游组Observed species指数、Chao指数、Ace指数均升高,被膜组Shannon指数升高,Simpson指数下降;浮游组Shannon指数下降,Simpson指数升高。主坐标分析(PCoA)结果显示,3组样本间有明显聚类现象。4)在门水平上,与对照组相比,被膜组肠道厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度升高,肠道拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭杆菌门(Fusobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)相对丰度降低;浮游组肠道Bacteroidetes、Fusobacteria相对丰度升高,Firmicutes、Actinobacteria相对丰度降低。5)在属水平上,与对照组相比,被膜组肠道双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、Allobaculum、消化链球菌属(Peptostreptococcus)相对丰度升高;浮游组肠道Lactobacillus、Peptostreptococcus、梭杆菌属(Fusobacterium)、普雷沃菌属(Prevotella)、萨特氏菌属(Sutterella)相对丰度升高。6)LEfSe分析表明,被膜组优势菌属是Lactobacillus,浮游组优势菌属是Fusobacterium,对照组优势菌属包括柯林斯氏菌属(Collinsella)、链型杆菌属(Catenibacterium)、真杆菌属(Eubacterium)。7) Spearman相关性分析显示,血清IgG、sIgA、IL-6、TNF-α含量与肠道富集菌群相对丰度无显著相关性(P0.05)。由此可见,被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对犬肠道菌群结构影响不同,被膜态植物乳杆菌LR-39具有更强的耐酸及胆盐能力,可有效调整肠道菌群结构并能提高机体免疫水平。     

金黄色葡萄球菌在生物被膜态与浮游态的转录组差异表达分析

金黄色葡萄球菌是引起奶牛细菌性乳腺炎的主要原因，生物被膜的形成是金黄色葡萄球菌在不利环境条件下持久性存在的关键因素。探索同一株菌在生物被膜态与浮游态生长状态下的耐药性与其生长状态的相关性，可为进一步探究金黄色葡萄球菌的耐药性机制奠定基础。本研究培养了金黄色葡萄球菌的生物被膜，使用光学显微镜和扫描电镜观察其形成过程。测定并比较了9种抗菌药物对32株金黄色葡萄球菌在生物被膜态和浮游态的最小抑菌浓度，并对两种状态下的金黄色葡萄球菌进行转录组学测序，筛选出具有显著性差异的细胞信号通路和表达基因，同时对主要差异表达的基因进行RT-qPCR验证。结果发现，在生物被膜形成前期，随着培养时间的延长，显微镜下观察到的生物被膜态菌聚集面积越来越大，结构也越来越紧密，培养至72 h后，生物被膜逐渐开始分散。MIC测定结果显示浮游态菌的抑菌浓度低于生物被膜态菌。转录组结果显示两种状态菌的差异表达基因共1 512个，其中，生物被膜态菌中上调基因760个，下调752个。GO与KEGG富集分析显示，相比于浮游态菌，生物被膜态菌中与代谢相关的通路显著富集，其次为氨基酸的生物合成和ABC转运蛋白通路。与生物被膜形成相关的基因，如编码ABC转运蛋白的基因表达上调，而与代谢途径相关的基因下调。RT-qPCR验证了10个主要差异基因，其表达差异趋势与转录组测序结果一致。这些差异可能对金黄色葡萄球菌生物被膜态的高耐药性和细菌毒力的研究有所帮助。     

罗伊氏乳杆菌的抑菌能力及其对肉仔鸡盲肠内容物菌群的影响

试验随机选用体重、健康情况基本一致的1日龄AA白羽肉仔鸡720羽,按体重相近、性别比例相同原则随机分为空白组、抗生素组、菌粉组、上清液组、发酵液组,每组6个重复,每个重复24羽鸡,试验期42 d,以期研究罗伊氏乳杆菌的抑菌性能及其对肉仔鸡盲肠内容物菌群的影响。试验结果显示:罗伊氏乳杆菌DBN-JP发酵液对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌能力与0.02%硫酸黏菌素差异不显著;80℃加热15 min对罗伊氏乳杆菌DBN-JP发酵液的抑菌能力影响不显著;与空白组相比,菌粉组、发酵液组或上清液可抑制肉仔鸡盲肠内容物中大肠杆菌和沙门氏菌,提高乳酸杆菌数量;与抗生素组相比,菌粉组和发酵液组盲肠内容物中乳酸杆菌数显著升高,发酵液组盲肠内容物中沙门氏菌数量与抗生素组相比差异不显著。综上所述,在肉仔鸡日粮中添加罗伊氏乳杆菌DBN-JP菌粉、发酵液、上清液可抑制病原菌生长、调节盲肠内容物菌群,具有替代抗生素的潜力。     

植物乳杆菌抑菌蛋白的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】筛选新型广谱有效的抑菌蛋白,为全面解析植物乳杆菌抑菌机制和开发新型抗菌制剂奠定基础。【方法】以植物乳杆菌GX20200417-1为研究对象,采用牛津杯法测定其抑菌活性,以低温离心和超滤法初步分离获得胞外蛋白并测定其抑菌活性,对胞外蛋白进行不同温度、pH及蛋白酶处理,研究抑菌蛋白理化特性,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定植物乳杆菌代谢产物中的抑菌成分。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌作用;发酵上清液在发酵24 h的抑菌能力最强;胞外蛋白的抑菌能力与发酵上清液相近;植物乳杆菌抑菌蛋白具有较好的耐热特性,与对照组相比,在20~80 ℃时抑菌活性均无显著变化(P＜0.05),在pH 6.0~8.0时抑菌活性最佳,对蛋白酶敏感;经LC-MS/MS鉴定分析,检测出5种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是片球菌素pediocin PA-1、溶菌素(lysin)、聚酮合酶(polyketide synthase)、辅助蛋白(accessory protein)和LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein,分子质量分别为5.348、7.348、8.348、6.348和19.662 ku;蛋白质功能分析结果表明,片球菌素pediocin PA-1与溶菌素主要通过破坏细菌细胞壁与细胞膜,从而达到抑菌效果。LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein可识别含有N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基的肽聚糖,上调抗菌肽的表达;辅助蛋白主要参与细菌素的合成,聚酮合酶主要参与抗生素的合成,二者通过参与抑菌物质的合成间接发挥抑菌作用。【结论】本研究成功分离并鉴定植物乳杆菌GX20200417-1的5种抑菌蛋白;植物乳杆菌GX20200417-1可能通过其代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。     

锡林郭勒盟地区酸马奶提取的植物乳杆菌DSM20174的理化特性研究

为研究从内蒙古锡林郭勒盟地区酸马奶中提取的植物乳杆菌DSM20174的抑菌能力和抑菌活性物质的特性,采用牛津杯法将植物乳酸杆菌的菌液和发酵上清液在3种处理方式下,对牛源野生致病性大肠杆菌O78的抑菌效果进行分析。结果表明:植物乳杆菌DSM20174的菌液和发酵上清液即使在121℃,30 min处理后,抑菌直径达仍达到14.10和14.40 mm;在p H=2.0时,菌液和发酵上清液的抑菌直径为21.9和22.1 mm;而当p H=4.0时抑菌活性明显下降,前者为14.8 mm,后者为14.9 mm;p H 5.0~7.0时,抑菌直径为0;二者分别经胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的反应后,处理前组和处理后组抑菌直径变化均不明显。在3种处理方式下,发酵上清液的抑菌直径均大于同组的菌液的抑菌直径。因此,植物乳杆菌DSM20174是一种较好的抑菌活性物质和热稳定性物质,随着温度和时间的升高,抑菌活性降低。其在p H5.0的条件下有抑菌活性,随p H的升高抑菌活性降低,p H越小时抑菌活性越强,p H≥5.0时失去抑菌活性。对蛋白酶不敏感。在相同条件下,发酵上清液的抑菌作用强于菌液。     

食淀粉乳杆菌代谢产物抑菌与抗病毒的比较研究

为研究食淀粉乳杆菌（Lactobacillus amylovorus）代谢产物抑菌和抗病毒的作用机制并确定其成分,试验采用过酸、过氧化氢酶及蛋白酶等处理食淀粉乳杆菌培养上清液,并利用琼脂扩散法（牛津杯法）和MTT法分别检测了食淀粉乳杆菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力及对猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）感染猪小肠上皮细胞的抗病毒活性。结果显示,经过氧化氢酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果显著降低（P<0.05）,但抗病毒活性变化不显著（P>0.05）;经酸、蛋白酶K处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果和抗病毒活性都显著减弱（P<0.05）,表明食淀粉乳杆菌培养上清液中抑菌与抗病毒成分有一致性,且为酸性物质和对蛋白酶K敏感的蛋白类物质。     

一株牛源嗜酸性乳杆菌体外抑菌试验研究

为了验证微生态活菌制剂候选菌株的益生特性,将筛选出的牛源嗜酸性乳杆菌NL0908进行体外抑菌试验,通过共培养和上清液抑菌试验,分析发现,菌株NL0908对病原菌大肠杆菌有较强的抑菌作用。将其上清液进行相应的热处理、蛋白酶处理、中和酸等,结果表明,其抑菌物质主要是由有机酸和抗菌小肽物质共同作用。     

三株乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究

本研究通过分离鉴定猪肠道内乳酸杆菌并对其益生特性进行比较分析,旨在为乳酸杆菌在仔猪饲粮中的应用提供科学依据。试验选取健康猪粪便,利用选择性培养基进行厌氧培养和单克隆纯化,共获得三株乳酸杆菌,通过生化鉴定、16Sr RNA基因序列测定和同源性分析,确定分离菌株分别为植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌;采用牛津杯法、活菌计数法和细胞试验等研究三株乳酸杆菌体外抑菌活性、黏附性及竞争性黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的益生特性。结果表明:与对照组相比,三株乳酸杆菌培养上清液的抑菌圈直径(P0.01)和抑菌效果(P0.01)差异均极显著,并且以植物乳杆菌培养上清液的抗菌效果为最佳;三株乳酸杆菌均可黏附于IPEC-J2细胞,并且以植物乳杆菌黏附IPEC-J2的菌数为最多;与对照组相比,三株乳酸杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞均具有抑制作用(P0.01),并且以植物乳杆菌抑制黏附的效果最好。     

酸奶中乳酸杆菌分离鉴定及其与女性生殖道感染有关的生理生化特性研究

对国内外市售酸奶中添加的乳酸杆菌益生菌进行分离鉴定,对其产H2O2量及与宫颈癌HeLa细胞黏附能力进行分析,并初步判定酸奶中的乳酸杆菌是否对女性生殖道健康具有潜在的保健作用.实验共分离鉴定出10株乳酸杆菌,其中,嗜酸性乳杆菌5株、干酪乳杆菌1株、瑞士乳杆菌1株、鼠李糖乳杆菌1株、植物乳杆菌1株和德式乳杆菌1株.只有瑞士乳杆菌产H2O2量较高且与HeLa细胞的黏附作用较强,其余乳酸杆菌产H2O2的能力偏低.大部分国内外市售酸奶产品中添加的益生菌不具备抑制女性生殖道感染有关的生理生化特性,只有瑞士乳杆菌可能对女性生殖系统的健康具有保护作用.     

长白山原始森林土壤源耐低温乳酸菌的筛选

试验旨在筛选长白山原始森林土壤中耐胁迫生长能力强、产酸能力强、体外抑菌特性好的耐低温乳酸菌,并对其相关生物学特性进行分析,为东北地区寒冬季节低温青贮提供优良乳酸菌菌种资源。采用低温（10℃）进行耐低温乳酸菌初筛,经不同pH、温度及盐度等条件下进行乳酸菌生长特性测定后,进行候选菌株的种属鉴定,并对候选菌株进行生长曲线、产酸曲线、耐酸和耐胆盐性能、抑菌性能测定及小鼠饲喂试验。结果显示,通过10℃低温条件培养,初筛获得11株能够良好生长的耐低温乳酸菌,其中C37、C34和C4212经16S rRNA测序分析后鉴定为植物乳杆菌,在培养7 d时,pH均可下降至4.25以下,均能够在4℃、45℃、pH 3.0、6.5% NaCl等条件下良好生长。生长曲线分析发现,3株乳酸菌均在4 h达到对数生长期,10~12 h后进入生长稳定期。在培养24 h时,C37、C34和C4212可将pH分别降至4.04以下,在pH 3.0条件下,C37和C4212具有较高的存活率,且对0.5%胆盐具有一定的耐受性,其存活率均在80%以上。对常见病原菌体外抑菌表明,3株乳酸菌对产肠毒素大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及肠炎沙门氏菌均有抑制作用,小鼠饲喂试验表明生物安全性好。本试验结果表明,从长白山原始森林土壤中筛选和鉴定出的乳杆菌C37、C34、C4212可作为东北地区寒冬季节低温青贮优良乳酸菌菌种资源。     

Screening of Pychrotrophic Lactic Acid Bacteria from Changbai Mountain Soil

The purpose of the experiment was to screen psychrotrophic lactic acid bacteria with strong stress-resistant growth ability,acid production ability and good bacteriostatic characteristics in vitro,and analyze its related biological characteristics,so as to provide excellent psychrotrophic lactic acid bacteria resources for low temperature silage in Northeast China.The culture condition of 10 ℃ was used to screen the psychrotrophic lactic acid bacteria.After the determination of the growth characteristics of Lactobacillus under different pH,temperature and salinity conditions,the species identification of the candidate strains was carried out,and the growth curve,acid production curve,acid and bile salt resistance,bacteriostatic performance and feeding test of mice were conducted for the candidate strains.The results showed that 11 strains of psychrotrophic lactic acid bacteria could grow well at 10 ℃.The strains C37,C34 and C4212 were identified as Lactobacillus plantarum by 16S rRNA sequencing analysis.The pH of C37,C34 and C4212 decreased to below 4.25 after 7 days of culture.In addition,C37,C34 and C4212 could grow well at 4 ℃,45 ℃,pH 3.0 and 6.5% NaCl.The analysis of growth curve showed that the three strains of Lactobacillus all had a fast growth rate,entered the logarithmic growth period at 4 h,and entered the stable growth period in 10-12 h after inoculation.In the aspect of acid production rate,C37,C34 and C4212 could reduce pH below 4.04 at 24 h of culture.At pH 3.0,C37 and C4212 had a high survival rate,they all had a certain tolerance to 0.5% bile salt,and the survival rate was more than 80%.C37,C34 and C4212 had inhibitory effect on enterotoxin producing Escherichia coli,Salmonella Typhimurium,Staphylococcus aureus and Salmonella Enteritis,and the animal test of three Lactobacillus plantarum were safe.Based on the results of this experiment,Lactobacillus C37,C34 and C4212 were screened and identified from the forest soil of Changbai Mountain,which could provide excellent lactic acid bacteria resources for low temperature silage in winter in Northeast China.     

Study on Physicochemical Properties of Lactobacillus plantarum DSM20174 Bacteriocin from Koumiss

To study the physicochemical properties extracted from koumiss of Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocin,we purified the Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocins and got the bacteriocin crude extractions after ammonium sulfate precipitation and dialysis.After purification with Sephadex G-100 gel column chromatography,bacteriocin specific activity apparently increased,reaching 154.70 AU/mL,yield was 43.5%.We detected the effects of purified Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocin on bacteriostatic action of wild bovine pathogenic E.coli O78 by Oxford cup method under 3 different treatments.The results showed that:①In five groups of temperature treatments,the bacteriostatic action decreased with the increase of temperature,bacteriostatic actions of all groups were significantly different (P<0.05).Even after treatment at 121 ℃ 30 min,antimicrobial diameter was 14.90 mm.② After Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocin were treated with pH 2.0 to pH 12.0,the higher of pH,the smaller of antibacterial diameter.The inhibitory effect of groups were significantly different (P<0.05) except pH 9.0 and pH 10.0.③Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocins were treated by trypsin,pepsin and papain,antibacterial diameter apparently changed,bacteriostatic action was significantly different (P<0.05) before and after treatment.The results suggested that Lactobacillus plantarum DSM20174 bacteriocins were better antibacterial substances,but not thermal stability substances.It had a relatively wide pH range,and the smaller of pH,the stronger of its antibacterial activity,the antibacterial activity had been enhanced at optimum growth pH.It was not protease stability substances.     

酸马奶提取植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性研究

为研究从酸马奶中提取的植物乳杆菌DSM20174细菌素的理化特性,本试验提纯植物乳杆菌DSM20174细菌素,经过硫酸铵沉淀、透析后得到细菌素粗提液,再利用SephadexG-100凝胶柱层析进行纯化后,细菌素的比活力明显增加,达到154.70 AU/mL,得率为43.5%.采用牛津杯法测定纯化的植物乳杆菌DSM20174细菌素在3种不同方式处理下对牛源野生致病性大肠杆菌O78抑菌效果的影响.结果显示:①植物乳杆菌DSM20174细菌素在5组温度处理下,随着温度的升高抑菌作用降低,各组抑菌作用差异显著(P<0.05).即使121 ℃处理30 min后,抑菌直径仍达14.90 mm.②植物乳杆菌DSM20174细菌素在pH 2.0~12.0由低到高的11组酸碱处理下,pH越大抑菌直径越小,且除了pH 9.0和pH 10.0之间差异不显著(P>0.05)外,其余各组抑菌作用均差异显著(P<0.05). ③植物乳杆菌DSM20174细菌素经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶3种酶处理后抑菌直径变化明显,处理前后抑菌作用均差异显著(P<0.05).结果表明植物乳杆菌DSM20174细菌素是较好的抑菌活性物质,但不是热稳定性物质;具有较广泛的pH适用范围,且pH越小时其抑菌活性越强,在最适生长pH时抑菌活性有所增强;不是蛋白酶稳定性物质.     

不同乳酸菌添加剂对苦荬菜青贮品质的影响

为探究不同乳酸菌添加剂对苦荬菜(Lactuca indica)青贮品质的影响,本试验以‘蒙早’苦荬菜为原料,设置对照(CK组)、单独添加植物乳杆菌(LP组)、单独添加布氏乳杆菌(LB组)和混合添加植物乳杆菌和布氏乳杆菌(LP＋LB组)4个处理,青贮60天后,进行营养成分、发酵品质和微生物数量的测定。结果表明：不同乳酸菌添加剂对苦荬菜青贮饲料的粗蛋白质和可溶性碳水化合物含量有显著影响(P<0.05);加入乳酸菌添加剂后苦荬菜青贮饲料的pH值显著低于CK组(P<0.05),乳酸菌数量均有所增加(P<0.05);LB组的酵母菌数量最少(P<0.05);LP组和LP＋LB组的乳酸含量显著高于CK组和LB组(P<0.05);LB组的乙酸含量最高(P<0.05)。采用隶属函数法综合评价表明,LP组的青贮品质最好。综上所述,单独或混合添加不同发酵类型乳酸菌均能改善苦荬菜青贮饲料的发酵品质,其中植物乳杆菌更适宜用作添加剂调制苦荬菜青贮饲料。     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位嵌入型S-层蛋白在副干酪乳杆菌中的表达与鉴定

【目的】构建新型猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)乳酸菌活菌疫苗载体。【方法】应用DNA重组技术将嗜酸乳杆菌S-层蛋白(SLP)基因及PEDV S2基因B细胞表位(EpitopeS2)融合基因(SLP-EpitopeS2)克隆到乳酸杆菌表达载体pTRK892中,构建重组载体pTRK-SLP-EpitopeS2,通过电转化方法将重组质粒导入副干酪乳杆菌中,获得重组副干酪乳杆菌。分别用SDS-PAGE、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白在副干酪乳杆菌中的表达。【结果】PCR结果显示,成功扩增出大小为1 400 bp的目的条带,与插入融合基因大小一致,双酶切结果出现大小分别为1 400和4 700 bp的2条带,基因测序结果显示无碱基缺失和突变等,从而确定重组质粒pTRK-SLP-EpitopeS2构建正确。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,在48 ku处出现与理论值大小一致的目的蛋白条带,表明融合基因SLP-EpitopeS2在副干酪乳杆菌中得到有效表达。IFA结果显示,与对照组副干酪乳杆菌相比,重组副干酪乳杆菌均能被激发出特异性绿色荧光信号,与高浓度氯化锂(LiCl)洗脱下来的菌体膜蛋白样品补充鉴定试验结果相吻合。表明融合蛋白SLP-EpitopeS2可能在副干酪乳杆菌的菌体表面表达。【结论】成功构建了PEDV EpitopeS2及嗜酸乳杆菌SLP嵌入型融合表达载体pTRK-SLP-EpitopeS2,为乳杆菌活菌载体疫苗相关研究奠定了基础。     

喷雾干燥技术制备饲用乳酸菌微胶囊制剂的研究进展

乳酸菌微胶囊技术是将核心菌体包覆于胃不溶、肠溶性的安全、特殊壁材中,可增加菌体对不良环境(胃液、胆盐等)的抵抗力,使其顺利到达肠道以发挥益生作用,且利于储存、加工和运输。利用喷雾干燥技术进行微胶囊制备具有包被速率快、生产成本低、适用于连续化生产等优点,但由于其存在较高进出口风温度及快速脱水过程,对于饲用乳酸菌的微胶囊制备在壁材物质及制备参数等方面具有严格的要求。为此,作者从工艺过程、壁材选择、工艺参数选择及其产品效果分析等方面,对近年来喷雾干燥技术在乳酸菌微胶囊制备方面进行了综述,以期为推动乳酸菌微胶囊制剂的研制及其在动物生产中的应用提供依据。     

Research Progress in Microencapsulated Lactobacillus by Spray Drying

Microencapsulation provides a physical barrier to the Lactobacillus against the harsh environmental conditions and gastrointestinal passage thereby increasing the number of viable cells reaching the small intestine,and it is also beneficial to storage,processing and transportation.Spray drying is a common technology used in microencapsulation process because it is a continuous and rapid process with low cost and high reproducibility.However,it can cause a decrease in microorganism numbers and activity due to high inlet and exit air temperatures and evaporation rates during the process,which has strict requirement for Lactobacillus in the selection of wall materials and preparation parameters.This article reviewed the research progress of spray drying for microencapsulated Lactobacillus,which contained the selection of microcapsule wall material,technological parameter and the evaluation method of microencapsulated Lactobacillus.It could provide the theoretical basis of preparation for microencapsulated Lactobacillus and its industrial production.