等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用

等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)、链置换等温扩增(SDA)、交叉引物扩增(CPA)5种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍,为该技术在病原检测的实际应用提供参考。     

分子生物学诊断技术的应用(二)

<正>3核酸扩增技术-聚合酶链反应(PCR)核酸扩增包括聚合酶链反应、连接酶链反应和Qβ复制酶技术等,根据实际应用情况,主要介绍聚合酶链反应。     

DNA芯片技术及其应用

DNA芯片技术是近年来发展起来的一项融微电子、生命科学和物理学为一体的新技术,是基于核酸杂交的理论而研制的.目前广泛应用于DNA测序、基因突变检测、基因表达研究、蛋白组学研究等多个方面,具有广泛的应用前景.     

假病毒在RNA病毒检测中的应用研究进展

由于核酸检测对于病毒感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值,近年来,基于RNA的核酸检测技术,如RT-PCR扩增(Mulder,1994)、核酸依赖的序列扩增(NASBA)     

DNA芯片技术及其应用

DNA芯片技术是近年来发展起来的一项融微电子、生命科学和物理学为一体的新技术，是基于核酸杂交的理论而研制的。目前广泛应用于DNA测序、基因突变检测、基因表达研究，蛋白组学研究等多个方面，具有广泛的应用前景。     

LAMP技术在猪传染病检测中的应用

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)技术是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。该技术在1h内能扩增出109个靶序列拷贝,扩增产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段的混合物。LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便等优点在核酸的科学研究、疾病的检测与预防以及动物胚胎的性别鉴定等领域得到了日益广泛的应用。本文主要综述了LAMP技术在猪传染病检测中的作用,使之能为该技术的深入研究和应用提供参考。     

NASBA技术在动物疫病检测中的应用

核酸依赖性扩增技术（NASBA）是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。它的特点是：恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。本文就现阶段核酸依赖性扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景作一综述。     

重组酶聚合酶扩增技术及其在牛病原检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,可在恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强、操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、引物设计与反应条件、产物检测方式及在牛病原检测中的应用等内容,旨在为牛病原检测新技术、新方法的研制提供参考。     

PCR技术在动物检疫中的新应用

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术自1985年建立以来,经过了20余年的发展,应用日益广泛,体现了其强大的生命力。对病原体核酸的扩增被广泛应用于     

环介导等温扩增技术及其在鸡病诊断中的应用

环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,简称LAMP)是一种体外等温扩增核酸片段的新技术,利用4条特异性引物,在Bst DNA聚合酶的催化下能够有效地扩增出靶基因。与常规PCR法相比该法具有特异性强、灵敏度高、快速准确以及操作简便等优点,现已广泛应用于动物疾病检测中。此文综述了LAMP技术原理及其在鸡传染性疾病病原检测中的应用,旨在为该技术的深入研究和应用提供参考。     

恒温扩增技术在动物疫病检测中的应用

恒温扩增技术是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。目前主要的恒温扩增技术有:滚环核酸扩增、环介导等温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列扩增和解链酶扩增。它们都具有共同的特点:恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。本文就现阶段恒温扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景做一综述。     

环介导等温扩增技术的最新研究进展

环介导等温核酸扩增技术是一种新型的核酸扩增技术,其核心原理是对靶基因片段的6个区域设计3对引物,实现对靶基因片段地快速、高效扩增。该技术目前已广泛的运用于一些领域。通过简述该技术的原理方法,在一些领域的运用,总结该技术国内外目前的研究进展以及改进措施,分析该技术未来的发展趋势,对环介导等温核酸扩增技术有一个全面的了解,以期为今后该技术的发展运用提供一定的参考依据。     

环介导等温扩增技术的改进及其在病原微生物检测中的应用研究进展

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来发展出来的一种新型核酸扩增技术。自建立以来,该技术不断改进和发展,并广泛应用于病原微生物的检测,文章将就此展开综述。     

3种新城疫病毒核酸扩增检测方法的比较研究

本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg^2＋浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58 pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158 pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。     

东北林蛙种蛙蛙病毒LAMP快速检测

由于环境、气候的恶化以及疾病的侵害,全球两栖动物种群数量呈现出整体衰退的趋势,其中虹彩病毒属蛙病毒科的蛙病毒是不可忽略的原因之一.环介导等温扩增技术（loop-mediated-isothermal-amplification,LAMP）是一种新型的核酸扩增技术,具有特异性强、快速、简便等特点,本研究利用LAMP技术,开发了针对中国东北林蛙种蛙蛙病毒的快速检测方法,针对蛙病毒MCP基因设计出能特异识别靶序列上6个位点的4条特异性引物,在链置换聚合酶（Bst酶）的作用下,62℃扩增30 min.通过对实验参数的优化,扩增后病毒的最低检出数可达到102个拷贝.该方法可用于东北林蛙养殖厂种蛙蛙病毒的临床快速检测,保证种蛙的存活质量和数量.     

羊痘病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

为建立羊痘病毒(CaPV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中羊痘病毒的保守基因序列,设计出针对羊痘病毒的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪优化得到病毒核酸等温扩增最佳条件是62 ℃恒温反应60 min。在此条件下,病毒核酸的最低检测含量为3.1×10^-2 pg/μL,灵敏度比OIE推荐的PCR方法高10⁴倍。添加钙黄绿素(calcein)建立的目测法,还可实现对上述病原体检测结果肉眼观察。本研究获得的CaPV LAMP仪器法和目测法可特异性地扩增羊痘病毒属的山羊痘病毒、绵羊痘病毒及牛疙瘩皮肤病病毒核酸,具有反应快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备要求低等特点。     

猪细菌性传染病病原检测新方法研究进展

细菌性传染病是生猪养殖业的严重威胁之一，近年来其发病情况呈现出新变化，对动物产品质量和公共卫生安全造成严重危害。对病原进行快速、准确的检测，是预防和控制猪病的有效手段，对养猪业发展和人畜健康具有重要意义。伴随生命科学技术的发展和学科间的交叉融合，传统的病原菌分离培养、普通PCR方法和早期免疫学等检测技术均朝着精确高效的方向不断发展革新，并以传统方法为基础建立了多种新型检测技术。文章重点介绍了猪细菌性传染病病原检测的几种新技术：以核酸分子生物学为基础的实时荧光定量PCR法（qPCR）、环介导等温扩增法（LAMP）、夹心DNA杂交（DNAH）等；以免疫学为基础的免疫胶体金标记技术、时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）、免疫磁珠分离法（IMS）等；以蛋白质分子生物学为基础的细菌质谱鉴定技术；以及适用于现场快速诊断的即时检测（POCT）技术，并分析了这几种新技术的优缺点，为不同条件的检测机构和研究部门在开展猪细菌性传染病检测和研究时选择相应的方法提供一定的参考，以期在猪病预防控制中发挥更加积极的作用。     

口蹄疫病毒分子生物学检测方法研究进展

口蹄疫是一种高度传染的病毒性疫病,及早诊断意义重大。分子生物学检测方法在口蹄疫病诊断和病毒分型过程中具有许多优势,已经广泛应用。作者对实时荧光PCR法、多重PCR法、核酸杂交法、基因芯片法、环介导等温扩增法及核酸序列依赖扩增法等进行分析和比较,对各种方法的检测效率、灵敏度、优缺点及国内外的研究情况进行综述,为口蹄疫病毒分子生物学检测方法的应用与深入开发提供参考。     

非洲猪瘟病毒核酸检测技术与应用进展

自2018年8月以来,非洲猪瘟已成为我国养猪业的头号疫病,对养猪业造成了巨大损失。基于聚合酶链式反应(PCR)的核酸检测方法具有高灵敏性和高特异性,在对非洲猪瘟的诊断、感染监控和养殖复产过程中生物安全评价等方面发挥了重要的作用。文章对常用的核酸检测技术与特点、非洲猪瘟病毒核酸检测方法的应用、核酸检测新技术展望3个方面进行了总结,以期为养猪企业在非洲猪瘟核酸检测和监测方面提供帮助。     

环介导等温扩增技术及其在动物疫病诊断中的应用

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplifi cation,LAMP）技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性强、敏感性高、简单、快捷及不需要昂贵的仪器设备等特点,受到了生物医学研究者的高度关注。目前,该方法已经被广泛应用于各种病原微生物检测。本文综述了近年来LAMP在动物疫病检测中的具体应用实例和目前的研究进展,并对LAMP方法在动物疫病诊断中的应用前景做了展望。