添加赖氨酸对小尾寒羊瘤胃消化代谢的影响

试验选用5只1.5岁左右装有永久性瘤胃瘘管的小尾寒羊公羊(体重约45 kg),按照5×5拉丁方试验设计(对照组、低尿素对照(等氮)组、低赖氨酸组、高尿素对照(等氮)组、高赖氨酸组),研究添加未经任何处理的市售赖氨酸对成年小尾寒羊瘤胃微生物群落、瘤胃消化代谢和整体消化代谢的影响。赖氨酸盐酸盐添喂量分别为0、4.0和8.0 g/kg日粮(干物质计)。结果表明,绵羊添加4.0和8.0 g/kg赖氨酸盐酸盐日粮,自由采食量分别比对照组增加5.5%(P>0.05)和11.8%(P<0.05),瘤胃细菌总数分别增加18.9%(P<0.01)和23.9%(P<0.01),其中球菌分别增加21.2%(P<0.01)和30.1%(P<0.01),大杆菌数量减少16.7%(P<0.05)和33.3%(P<0.01),瘤胃液总挥发性脂肪酸分别比对照组增加9.6%(P<0.05)和12.2%(P<0.01),其中丁酸分别增加12.8%(P>0.05)和20.2%(P<0.01),有机物表观消化率分别增加6.4%(P>0.05)和10.0%(P<0.05),粗蛋白质表观消化率分别比对照组增加7.0%(P>0.05)和18.3%(P<0.01),氮保留率分别增加46.4%(P>0.05)和110.7%(P<0.01)。然而,添加赖氨酸对绵羊瘤胃原虫和真菌数量、瘤胃液氨态氮浓度均无显著影响(P>0.05)。由本试验得出结论,给成年小尾寒羊添加一定量的未经任何处理的市售赖氨酸,可提高小尾寒羊的日粮自由采食量和消化率,增加氮保留率;可调控瘤胃微生物群落的组成,增加瘤胃细菌总数,主要是瘤胃球菌数量;以上这些添加赖氨酸的作用是添加等氮量尿素所不能完全替代的。     

50～75日龄番鸭日粮限制性氨基酸水平研究

本试验旨在研究日粮不同赖氨酸粗蛋白质比例和蛋氨酸(含硫氨基酸)赖氨酸比例对50~75日龄番鸭生产性能、血清生化指标和肌肉品质的影响。试验选用1440只健康50日龄番鸭,随机分为9组,每组4个重复,每重复40只鸭,饲喂9种不同赖氨酸粗蛋白质比例(Lys/CP)(分别为5%、5.5%、6%)和蛋氨酸(含硫氨基酸)赖氨酸比例(Me(SAA)t/Lys)(分别为35%(75%)、40%(80%)、45%(85%))的玉米-豆粕型日粮。试验结束时,进行称重,每个重复挑选2只接近平均体重的番鸭进行采血和屠宰。结果显示:①Lys/CP对日均采食量(ADFI)、日均增重(ADG)影响显著,5%和5.5%组显著高于6%组(P<0.05);Me(tSAA)/Lys为40%(80%)的组ADFI显著高于45%(85%)组,40%(80%)组ADG显著高于其他两组,而料肉比显著低于其他两组;②Lys/CP为5%的组血清尿酸和甘油三酯含量显著高于(P<0.05)其他两组;Me(SAA)t/Lys对血清尿酸和甘油三酯含量影响不显著(P>0.05);日粮Lys/CP和Me(tSAA)/Lys对血清甘油三酯含量存在交互作用;③日粮Lys/CP为5.5%的组胸肌干物质(DM)含量显著高于其他两组,粗蛋白质(CP)含量显著高于6%组;Me(tSAA)/Lys为35%(75%)和40%(80%)的组胸肌CP含量显著高于45%(85%)组;日粮Lys/CP和Me(tSAA)/Lys对胸肌DM和CP含量存在交互作用;④日粮Lys/CP为5.5%和6%的组腿肌DM含量显著高于5%组,5.5%组腿肌CP含量显著高于其他两组;Me(tSAA)/Lys为40%(80%)和45%(85%)的组腿肌DM含量显著高于35%(75%)组;日粮Lys/CP和Me(tSAA)/Lys对腿肌DM和CP含量存在交互作用。     

碱性氨基酸转运载体基因在骨骼肌中的表达规律及其调控

骨骼肌是机体的重要组成成分,与生命体的生长、运动和代谢等密切相关。研究表明,骨骼肌质量的增加主要依赖于蛋白质合成与降解的相对速率,而蛋白质合成的效率与饲粮氨基酸的组成和含量直接相关。赖氨酸(Lys)等碱性氨基酸作为动物体限制性或必需氨基酸,其吸收利用效率对动物的生长发育至关重要。前期研究发现,碱性氨基酸转运载体(CATs)是细胞吸收碱性氨基酸的主要转运载体,在Lys、精氨酸等碱性氨基酸的吸收过程中发挥重要作用。本文就CATs的分类、功能、表达规律及其调控机制等方面进行综述,为机体氨基酸的高效利用和肌肉生长发育调控提供理论参考。     

碱性氨基酸转运载体基因在骨骼肌中的表达规律及其调控北大核心CSCD

骨骼肌是机体的重要组成成分,与生命体的生长、运动和代谢等密切相关。研究表明,骨骼肌质量的增加主要依赖于蛋白质合成与降解的相对速率,而蛋白质合成的效率与饲粮氨基酸的组成和含量直接相关。赖氨酸(Lys)等碱性氨基酸作为动物体限制性或必需氨基酸,其吸收利用效率对动物的生长发育至关重要。前期研究发现,碱性氨基酸转运载体(CATs)是细胞吸收碱性氨基酸的主要转运载体,在Lys、精氨酸等碱性氨基酸的吸收过程中发挥重要作用。本文就CATs的分类、功能、表达规律及其调控机制等方面进行综述,为机体氨基酸的高效利用和肌肉生长发育调控提供理论参考。     

赖氨酸影响奶牛乳蛋白合成的分子机制北大核心CSCD

乳蛋白是评价牛奶质量的重要指标。在以玉米为基础饲粮的奶牛的乳蛋白合成过程中,赖氨酸(Lys)既是限制性氨基酸又是必需氨基酸,发挥着重要调控作用。Lys可提高奶牛泌乳性能、维持乳腺健康,但目前Lys调控乳蛋白合成的详细分子机制尚不清楚。本文综述了Lys影响奶牛泌乳性能特别是乳蛋白合成的研究进展,并介绍了Lys影响奶牛乳蛋白合成的可能机制,为完善奶牛泌乳营养精准调控策略提供理论参考。     

过量赖氨酸对断奶仔猪及其肠道上皮细胞的影响

旨在从体内与体外探究过量赖氨酸对断奶仔猪的影响。本试验选用144头杜×长×大三元杂交断奶仔猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复6头仔猪（3头阉公猪和3头母猪），各组在日粮中分别添加1.3%、2.6%、3.9%和5.2%的回肠标准可消化赖氨酸（standardized ileal digestibility lysine，SID Lys），观察其对于仔猪生长性能、器官指数以及生理生化等指标的影响。以IPEC-J2为体外模型，根据培养基与营养需要中氨基酸的种类与比例，添加赖氨酸及其他氨基酸，测定IPEC-J2细胞的增殖情况，并试图通过平衡氨基酸手段降低因过量添加赖氨酸造成的不利影响。结果显示，随着日粮SID Lys添加量的增加，断奶仔猪的生长性能显著下降（P<0.05），血浆平均红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、部分血清游离氨基酸含量和肠道形态受到影响。当在培养基中添加2.0 mmol·L^-1赖氨酸时，IPEC-J2细胞活力显著下降（P<0.05），培养基中原赖氨酸浓度（0.5 mmol·L^-1）是IPEC-J2生长的最适浓度。当按照培养基中氨基酸平衡比例补充其他必需氨基酸时，细胞活力有一定程度的改善；当按照猪碱性氨基酸的最适比例补充相应浓度的精氨酸与组氨酸时，细胞活力随处理时间的变化而变化。综上所述，单独添加过多的赖氨酸对断奶仔猪的生长会产生负面作用，在生产实际应用中应充分考虑氨基酸之间的平衡。     

水稻秸秆、麦麸、葡萄糖添加对绿狐尾藻青贮质量影响研究

为探究添加不同比例的水稻秸秆、麦麸与葡萄糖对新鲜绿狐尾藻青贮品质的影响规律，采用双因素完全随机设计，A因素为稻秸添加比例：0%，5%，10%，15%(相应计算麦麸和绿狐尾藻添加比例)；B因素为葡萄糖添加比例：0%，2%，4%，6%，青贮原料充分混合后青贮。结果表明：稻秸与葡萄糖添加比例及二者互作对青贮效果有显著或极显著影响(P<0.05或P<0.01)。随稻秸添加比例增加，丁酸含量显著增加(P<0.05)，纤维含量极显著增加，粗蛋白含量极显著降低(P<0.01)；随葡萄糖添加比例增加，pH值显著下降(P<0.05)，可溶性糖含量极显著升高(P<0.01)，粗蛋白、纤维含量及有氧稳定性极显著降低(P<0.01)。综合来看，70%绿狐尾藻与30%麦麸混合青贮添加2%~6%葡萄糖可制备饲用品质和有氧稳定性均优的青贮饲料；添加5%或10%水稻秸秆并添加4%葡萄糖可制备原料成本更低的青贮饲料。     

大薯部分替代玉米对文昌鸡盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量的影响

本试验旨在研究大薯部分替代玉米对文昌鸡盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量的影响,探讨大薯替代玉米作为文昌鸡饲料开发的可行性。选择288只健康、体重相近的50日龄文昌鸡母鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复18只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮;Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组为试验组,分别饲喂以大薯替代基础日粮中10%、15%、20%玉米的等能等氮试验日粮。试验期28 d。结果表明,经过14 d饲养试验,大薯替代不同比例玉米对文昌鸡盲肠微生物区系无显著影响(P>0.05),对文昌鸡盲肠内容物短链脂肪酸含量影响显著(P<0.05),其中Ⅲ组丙酸、丁酸含量显著低于对照组(P<0.05)。随着饲养期延长至28 d,大薯替代不同比例玉米对盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量影响显著(P<0.05),其中Ⅱ组大肠杆菌数量显著低于对照组(P<0.05),Ⅲ组粪链球菌、总厌氧菌数量分别显著和极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01);Ⅰ组丁酸和丙酸含量分别显著和极显著低于对照组(P<0.05;P<0.01)。综上所述,大薯部分替代玉米能提升盲肠有益菌群数量,但短期饲喂会降低短链脂肪酸生成,长期饲喂对短链脂肪酸生成无显著影响。在本试验条件下,建议大薯替代玉米比例以15%为宜。     

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。     

不同豆粕添加量的日粮对奶牛产奶性能的影响

将40头荷斯坦产奶牛随机分为4个试验组,每组10头。4种试验日粮均配制成蛋白质(CP)含量15.2%、产奶净能(NEL)6.90~7.06 MJ/kg。日粮通过调节豆粕和棉籽粕的用量改变日粮赖氨酸(Lys)含量,这样试验1组日粮赖氨酸含量为0.65%、试验2组0.62%、试验3组0.59%和试验4组0.56%。所有试验奶牛先饲喂10 d试验日粮作为预试期,然后开始70 d正试期。试验1组产奶量最高,平均为(27.13±1.53)kg/d;试验4组产奶量最低,平均为(24.40±1.56)kg/d;试验2组和3组依次为(26.18±1.37)和(25.27±1.58)kg/d;其中试验1组产奶量明显高于试验3组(P<0.01)和试验4组(P<0.01),试验2组明显高于试验4组(P<0.05)。因此,在日粮蛋白质含量保持相同和产奶净能相近的条件下,提高日粮赖氨酸含量则提高了奶牛产奶量,降低日粮赖氨酸含量则降低了奶牛产奶量;大量使用棉籽粕替代豆粕降低日粮赖氨酸含量,导致产奶量降低;尽管日粮赖氨酸含量容易提高奶牛日粮成本,由于提高产奶量,增加了产奶纯收入。使用日粮赖氨酸含量这一指标有利于评价奶牛产奶量、乳成分和经济效益。     

Effects of Lysine Dipeptides on the Expression of Genes Related to Milk Protein Synthesis and Amino Acid Transporters in Bovine Mammary Tissue

The study was carried out to investigate the effects of various lysine (Lys) dipeptides on gene expression related to milk protein and amino acid transporters in bovine mammary tissue.Mammary tissues were obtained from midlactating Holstein dairy cows and cultured under lactogenic hormones (prolactin, hydrocortisone and insulin) with different ratios of various Lys-peptide (Lys-Lys (KK), Lys-His (KH), Lys-Phe (KF), Lys-Leu (KL)and Lys-Thr (KT)).They isometrically substituted 0, 5%, 10%, 15% and 20% of free Lys (total concentration of Lys was 210 μg/mL), respectively.After 48 h treatment, mammary tissues were harvested for gene expression analysis by Real-time PCR.The results showed that:Compared with the free Lys group with no Lys substitution, when the KH replaced Lys at ratio of 15%, the KF replacement ratio was 10%, KK, KL and KT replacement ratio was 5%, the CSN1S1 mRNA abundance were the highest (P<0.05);When the KK replaced Lys at ratios of 5%, 10%, 15% and 20%, KH replacement ratios were 10% and 15%, KF replacement ratio was 15%, KL replacement ratios were 5% and 20% and KT replacement ratios were 5%, 10% and 15%, the SLC15A2 gene expression was significantly enhanced (P<0.05); when the KH replaced lysine at ratio of 15%, KK and KL replacement ratio was 10%, KF and KT replacement ratio was 5%, the abundance of SLC6A14⁺ mRNA was the highest (P<0.05);When the KH replaced Lys at ratio of 15% and 20%, KK replacement ratios were 5%, 10% and 15%, KL replacement ratio was 5% and 10%, the mRNA abundance of mTOR was significantly increased (P<0.05).The results indicated that the Lys dipeptides might be able to promote amino acid uptake and milk protein related gene expression in bovine mammary gland tissues.     

不同营养水平日粮对陕北白绒山羊生长性能和小肠组织SLC7A7、SLC3A1及SLC15A1 mRNA表达的影响

本试验旨在研究日粮营养水平对断奶后2~6月龄陕北白绒山羊生长性能及小肠组织中与氨基酸转运吸收相关的SLC7A7、SLC3A1和SLC15A1 mRNA表达的影响。选取健康、日龄（（60±1.60）d）和体重（（10.73±1.03）kg）相近的雌性陕北白绒山羊羔羊36只，随机分为4组，分别饲喂4种试验日粮，其消化能和粗蛋白质水平分别为标准日粮的85%、100%、115%和130%。标准日粮营养水平参考肉羊饲养标准NY/T816-2004，依据生长阶段（10~19 kg、15~27 kg）和目标增重设置。试验期间，分别于120和180日龄称重，于180日龄，每个重复屠宰1只试验羊，采集十二指肠中上部、空肠中段、回肠末端组织样品，通过实时荧光定量PCR检测SLC7A7、SLC3A1和SLC15A1表达水平。结果表明：1）第一阶段（60~120 d）115%水平组平均日增重显著高于其他三组（P<0.05），第二阶段（121~180 d）115%水平组平均日增重显著高于85%和100%水平组（P<0.05），与130%水平组无明显差异。两阶段115%水平组羔羊干物质采食量极显著高于其他3组（P<0.01）。两阶段料重比115%水平组显著低于85%、100%水平组（P<0.05）。2）相同营养水平下，SLC7A7和SLC15A1 mRNA的表达丰度顺序均为回肠>空肠>十二指肠；3）随日粮营养水平的增加，SLC7A7、SLC3A1和SLC15A1 mRNA在小肠各段的相对表达量呈先上升后下降的趋势，且115%水平组表达量最高。115%水平组SLC7A7和SLC15A1 mRNA相对表达量显著高于其他3组（P<0.05）；115%水平组SLC3A1 mRNA的相对表达量显著高于85%和130%水平组组（P<0.05）。本试验条件下，与其他营养水平组相比，115%水平组陕北白绒山羊羔羊在2~6月龄生长性能最佳，SLC7A7、SLC3A1和SLC15A1 mRNA在小肠各段的表达量最高。     

山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1cDNA序列克隆及表达

试验旨在克隆山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1 cDNA序列,探究其表达的组织特异性及其在小肠中的表达发育模式。参考GenBank已发表的绵羊、牛SLC3A1基因mRNA序列设计引物,克隆山羊SLC3A1基因的cDNA序列,采用实时荧光定量PCR的方法分析其在1日龄山羊11种组织及其在1日龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄山羊十二指肠、空肠、回肠中的mRNA表达情况。结果表明,成功克隆得到了山羊SLC3A1基因cDNA序列,其与绵羊、牛、野猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为99%、97%、88%、86%、80%和79%。SLC3A1基因转录表达有明显的组织特异性,其在1日龄山羊肾脏、回肠、空肠、结肠中表达量依次降低(P<0.05),其他组织中表达量很低。同一月龄山羊,SLC3A1基因在不同肠段的表达量数值上回肠>空肠>十二指肠。SLC3A1基因在不同月龄山羊十二指肠表达量以1日龄山羊为最高(P<0.05),6~12月龄山羊相同肠段之间表达量无显著差异(P>0.05);空肠表达量随山羊年龄的增加均呈现逐步降低的趋势;回肠表达量在各个月龄山羊之间差异不显著(P>0.05)。结果说明,山羊碱性氨基酸转运载体基因SLC3A1的主要表达部位在肾脏和肠道,推测b^0,+碱性氨基酸转运系统转运氨基酸的主要部位为肾脏和肠道。SLC3A1基因在山羊小肠受肠段和发育阶段的影响,具有不同的表达发育模式。     

Cloning and Expression of Caprine Cationic Amino Acid Transporter Gene SLC3A1 cDNA Sequence

The objective of this study was to clone caprine cationic amino acid transporter gene SLC3A1 and investigate its mRNA expression in different tissues and its development regularity in small intestine.The cDNA sequence of caprine SLC3A1 gene was cloned with the primer which was designed according to mRNA sequence of Ovis aries and Bos taurus in GenBank.Then its expression was quantified by Real-time PCR in 11 tissues from goats at the age of day 1 and duodenum,jejunum and ileum from goats at the age of day 1,month 6,month 8,month 10 and month 12.The results indicated that cDNA sequence of SLC3A1 gene was obtained,and its homology with SLC3A1 gene in Ovis aries,Bos taurus,Sus scrofa,Homo sapiens,Mus musculus and Rattus norvegicus were 99%,97%,88%,86%,80%,79%,respectively.SLC3A1 gene was expressed in all of these collected tissues,whereas the expression level varied from tissues.Specifically,its expression in kidney,jejunum,ileum and colon were significant higher than that in other tissues at the age of day 1 and decreased systematically (P<0.05).The expression of SLC3A1 in small intestine at the same age of goat was ileum>jejunum>duodenum.SLC3A1 gene expression in duodenum at the age of day 1 was significant higher than that at the other ages (P<0.05),it decreased with age in jejunum,and there was no significant difference among ileum with age (P>0.05). In conclusion,SLC3A1 gene and b^0,+ cationic amino acid transporter system were mainly expressed in kidney and intestine.The expression of SLC3A1 gene was differentially regulated and distributed by developmental stages and segments of small intestine in goat.     

宁乡猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因多态性及其与IMF含量的关联分析

旨在研究宁乡猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因的多态性及其与肌内脂肪（IMF）含量的关联性。本试验采用PCR-RFLP和Sanger测序的方法对172头宁乡阉公猪FABPs、SLC13A5和NR1H4基因的多态性进行检测,并探究多态性与宁乡猪IMF含量的关联性。结果表明,宁乡猪H-FABP-Hinf Ⅰ酶切位点存在多态性,其中Hh基因型个体的IMF含量最高,与HH、hh基因型个体的IMF含量差异极显著（P<0.01）;H-FABP-Hae Ⅲ酶切只检测到DD和Dd两种基因型,Dd基因型个体的IMF含量极显著高于DD基因型个体（P<0.01）;H-FABP基因的Hinf Ⅰ和Hae Ⅲ多态性位点共形成3种单倍型和5种单倍型组合,其中单倍型组合HD/hd个体具有最佳的IMF含量。H-FABP的Msp I酶切结果及A-FABP基因测序结果显示,宁乡猪不存在多态现象;SLC13A5基因多态性位点g.50705299T/C和NR1H4基因多态性位点g.83607915G/A处不同基因型间IMF含量的差异均不显著（P>0.05）。综上所述,H-FABP基因Hinf Ⅰ和Hae Ⅲ酶切位点多态性与宁乡猪IMF含量显著关联,其形成的单倍型组合HD/hd的IMF含量最高。以上结果可为宁乡猪IMF含量性状的早期分子选育提供参考。     

长顺绿壳蛋鸡SLC8A1基因多态性及其对蛋壳品质的影响

【目的】探究溶质载体家族8成员A1（solute carrier family 8 member A1，SLC8A1）基因多态性对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响，为今后改善蛋壳品质提供参考。【方法】根据GenBank数据库中鸡SLC8A1基因序列（登录号：NC_052534.1），使用Primer Premier 3.0软件设计引物进行PCR扩增，采用直接测序法筛选SLC8A1基因SNP位点，并利用SPSS 22.0软件检测SNP位点不同基因型蛋壳指标的差异。【结果】在SLC8A1基因外显子11上共发现3个新的SNPs：g.16085681 T>C、g.16085766 C>T和g.16085781 T>C，共存在3种单倍型：H1（TCT）、H2（CTC）、H3（TTC），以及6种双倍型：H1H1（TTCCTT）、H1H2（TCTCTC）、H1H3（TTTCTC）、H2H2（CCTTCC）、H2H3（CTTTCC）、H3H3（TTTTCC）。χ²检验结果显示，3个SNPs位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05），均表现为中度多态。关联性分析结果显示，g.16085681 T>C位点TC基因型个体蛋壳强度显著高于TT基因型（P<0.05），g.16085681 T>C位点和单倍型H2（C_16085681T_16085766C_16085781）对SLC8A1基因mRNA二级结构产生明显的影响；g.16085766 C>T位点CC基因型个体蛋形指数显著高于TT基因型（P<0.05）；双倍型H1H1、H1H3个体蛋形指数显著高于H2H3，H2H3个体蛋壳强度和蛋壳厚度均显著高于H1H3，H1H2、H2H2个体蛋重均显著高于H3H3（P<0.05）。【结论】g.16085681 T>C位点可作为影响蛋壳强度的标记位点，g.16085766 C>T位点可作为影响蛋形指数的标记位点，双倍型H2H3可能是蛋壳强度和蛋壳厚度的有利双倍型。     

三穗鸭SLC4A9基因表达量及其多态性对蛋壳品质的遗传效应分析

为探究溶质载体家族4成员9（solute carrier family 4 member 9,SLC4A9）基因的表达量及其多态性对鸭蛋壳品质的遗传效应,试验采用实时荧光定量PCR法检测SLC4A9基因在三穗鸭不同组织中的表达水平,采用PCR产物直接测序法筛查三穗鸭SLC4A9基因的SNP位点,并分析SNP位点对三穗鸭蛋壳品质的遗传效应。结果显示,SLC4A9基因mRNA在三穗鸭10个组织中均有不同程度表达,其中在心脏和胰腺中为高度特异性表达,肾脏中为中度表达,其他为低度表达。试验共检测到10个SNPs位点,其中3个位于外显子上（g.6803 C>T、g.7065 C>T和g.7089 C>G）,且均为错义突变,7个位于内含子上（g.7162 C>G、g.11044 G>A、g.11090 T>C、g.11234 C>T、g.11261 C>T、g.11349 C>T和g.11403 G>A）,其中g.6803 C>T位点突变导致丙氨酸（GCG）变为缬氨酸（GTG）;g.7065 C>T位点突变导致丙氨酸（GCC）变为缬氨酸（GTC）;g.7089 C>G位点突变导致丙氨酸（GCA）变为甘氨酸（GGA）。χ²检验结果显示,g.6803 C>T、g.11090 T>C和g.11349 C>T突变位点的基因型分布均偏离了Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.05）,其余位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。关联分析结果表明,g.11349 C>T位点的CC和CT基因型蛋壳强度显著高于TT基因型（P<0.05）。综上,SLC4A9基因的10个SNPs位点均对三穗鸭的蛋壳品质产生影响,其中g.11349 C>T位点达到了显著水平,可为蛋鸭蛋壳品质的改善及遗传标记提供参考依据。     

Effects of Interference and Overexpression of DDR1 on Proliferation and Apoptosis of Mammary Epithelial Cells in Dairy Cows

The aim of this study was to investigate the effect of discoidin domain receptor 1 (DDR1) gene on the proliferation, apoptosis and cell cycle of dairy cow mammary epithelial cells through interfering and overexpressing DDR1. The small RNA interference fragment of DDR1 gene and overexpression vector pcDNA3.1-DDR1 were transfected into dairy cow mammary epithelial cells, qRT-PCR and Western blot were used to detect the interference and overexpression efficiency of DDR1; CCK-8 was employed to detect cell proliferation; Flow cytometry was performed to detect the changes of cell cycle and apoptosis (early apoptosis and late apoptosis). qRT-PCR was used to detect the expression of genes related to proliferation and apoptosis. After interfering DDR1 gene in dairy cow mammary epithelial cells, mRNA and protein expression levels of DDR1 were down-regulated by 94% and 30%, respectively; While after overexpressing DDR1 gene, its mRNA and protein expression were up-regulated 68.24 and 1.38 times, respectively. Interfering DDR1 extremely significantly inhibited the proliferation of cells (P<0.01), the ratio of early and late apoptotic cells was extremely significantly increased (P<0.01); the ratio of G1 phase cells in the interference group was extremely significantly increased (P<0.01), and the proportions of S and G2 phase cells were significantly decreased (P<0.01 and P<0.05), which suggested that the cells were blocked in G0/G1 phase. Conversely, overexpression of DDR1 could significantly promote cell proliferation (P<0.05), significantly inhibit the late apoptosis of cells (P<0.05), the proportion of G1 phase cells was extremely significantly decreased (P<0.01), and the proportion of S phase cells was extremely significantly increased (P<0.01), suggesting the enhancement of transition from G1 to S phase. The results of qRT-PCR detection showed that after interfering DDR1, the expressions of BAX and Caspase9 genes were significantly up-regulated (P<0.05), and the expressions of P53 and FAS genes were extremely significantly up-regulated (P<0.01), while the expressions of PCNA and CyclinB1 genes were significantly down-regulated (P<0.05). After overexpression of DDR1, the expressions of Cytc and BAX genes were significantly (P<0.05) and extremely significantly down-regulated(P<0.01), respectively, and the expression of CyclinB1 gene was extremely significantly up-regulated (P<0.01). In summary, DDR1 can regulate the proliferation, apoptosis and cycle of dairy cow mammary epithelial cells, this result will provide a reference for elucidating the molecular mechanism of DDR1 involved in the growth and development of dairy cow mammary epithelial cells.