奶牛酮病治疗及酮体与抗氧化指标的相关性研究

选择胎次、年龄、体重相近的围产期奶牛作为研究对象,确诊为酮病奶牛80头为试验组,80头健康奶牛为对照组,采血检测相关指标。结果表明,对照组与试验组BHBA、NEFA、GLU、TAC、MDA、H2O2、GSH-Px、CAT、SOD、ROS、RNS差异显著(P0.05);NEFA与VE、MDA、H2O2、TAC、CAT、SOD、GSH-PX、RNS相关,MDA、H2O2相关系数在70%以上。     

去乙酰化酶SIRT1在玉米赤霉烯酮致小鼠睾丸间质细胞氧化损伤中的调控作用

为揭示玉米赤霉烯酮(ZEA)生殖毒性的机理,试验以小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为对象,白藜芦醇(RSV)为激活剂,探究了SIRT1在玉米赤霉烯酮(ZEA)致小鼠睾丸间质细胞氧化损伤中的调控作用。试验分设对照组、RSV组(5μmol/L)、ZEA组(10μmol/L)、RSV+ZEA组(5μmol/L RSV+10μmol/L ZEA),处理24 h后,通过CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR检测细胞SIRT1基因表达,实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)实时监测细胞指数,流式细胞术检测活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性,qRT-PCR检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)基因表达,AO/EB染色检测细胞凋亡情况。结果显示,与对照组比,ZEA浓度为10μmol/L时能极显著抑制TM3细胞的活性(P0.01),提高细胞内MDA水平(P0.01),抑制过氧化氢酶CAT活性,晚期凋亡的TM3细胞明显增多;与ZEA组相比,RSV+ZEA组细胞活力显著提高(P0.05),SIRT1基因明显激活(P0.01),MDA水平极显著下降(P0.01),CAT活力呈现显著性上升,GSH-Px和SOD基因表达水平显著上升(P0.05),晚期凋亡的TM3细胞明显减少。结论认为,SIRT1基因的激活可减轻ZEA对小鼠睾丸间质细胞的氧化损伤作用,减少细胞的凋亡损伤,对ZEA致TM3细胞损伤具有保护作用。     

紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡和细胞ROS及SOD失衡的研究

为研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)凋亡及对氧化还原平衡的影响,本实验以不同浓度的紫杉醇处理细胞,采用台盼蓝排斥试验和MTT法检测细胞活性,并进行丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双荧光染色以及在透射电镜下观察CHMm细胞凋亡和形态学变化,并检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)等反映细胞内氧化还原功能的指标。结果显示:在紫杉醇的作用下,CHMm生长受到不同程度的抑制,引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态;ROS和MDA含量增加,SOD和CAT酶活性降低,细胞内出现氧化还原失衡。表明紫杉醇能够抑制CHMm细胞生长,打破氧化还原平衡,诱导细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性。     

沙葱总黄酮对过氧化氢诱导的红细胞氧化损伤的保护作用

本试验旨在研究沙葱总黄酮在体外条件下对过氧化氢(H2O2)诱导的红细胞氧化损伤的保护作用。在筛选建立红细胞氧化损伤模型时所需的最适H2O2浓度和作用时间及沙葱总黄酮安全浓度范围的基础上,将试验分为空白对照组、H2O2损伤组、不同浓度沙葱总黄酮组(沙葱总黄酮在细胞悬液中的终浓度分别为30、130、260、390和520μg/mL),每组9个重复,评价沙葱总黄酮对红细胞溶血率、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响。结果表明,沙葱总黄酮能显著抑制H2O2损伤引起的红细胞溶血(P0.05),且其作用呈剂量依赖关系。与H2O2损伤组相比,130、260和520μg/mL沙葱总黄酮能显著降低红细胞中M DA的含量(P0.05),并提高红细胞中SOD、CAT和GSH-Px的活性(P0.05)。由此可见,沙葱总黄酮通过抑制H2O2氧化损伤引起的溶血、降低过氧化产物的产生及提高抗氧化酶活性,从而保护红细胞免受氧化应激引起的损伤。     

BHBA对体外培养牛肝细胞氧化应激状态及抗氧化关键酶活性和mRNA表达的影响

评价氧化应激状态有助于理解奶牛代谢紊乱性疾病(如酮病等)的发病机制.本研究以牛肝细胞体外培养模型为基础,通过细胞培养液中添加不同浓度的β-羟丁酸(BHBA),运用分光光度方法和实时荧光定量PCR(realtime PCR)技术,分别测定细胞裂解上清液中过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)的含量、总抗氧化能力(TCA)和过氧化氢酶(CAT)、总谷胱甘肽过氧化物酶(T-GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性,以及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达水平的变化.结果显示,随着BHBA浓度的增加,肝细胞中H2O2和MDA的含量呈剂量依赖性增加,添加BHBA 24 h后,各组H2O2和MDA的含量均显著高于0、12和48 h.各时间点TCA含量随添加BHBA浓度的增加而降低.添加BHBA 12 h后,低浓度组(0.6mmol/L BHBA)T-SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达均显著高于对照组,高浓度组(1.2和2.4mmol/L BHBA)T SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mRNA表达均低于对照组;添加BHBA 24、48h后,T SOD、T-GSH-Px和CAT的活性及CAT、GSH-Px、Mn-SOD和Cu/Zn SOD mR-NA表达均随BHBA浓度的增呈剂量依赖性抑制.结果表明,添加低浓度的BHBA可以维持体外培养肝细胞中氧化抗氧化系统的动态平衡,但高浓度BHBA影响该动态平衡,导致肝细胞处于氧化应激状态,引起氧化应激损伤,进而影响肝细胞的正常生理功能.     

H2O2诱导BRL-3A细胞模拟大鼠肝脏氧化应激损伤的研究

动物冷暴露过程中,肝脏因发生氧化应激而受损.利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用BRL-3A细胞,根据细胞存活率确定500 μmol/L H2O2作用细胞3h为施加条件,然后通过检测蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性,探讨在细胞水平上建立冷暴露大鼠肝脏损伤模型.结果显示,H2O2处理组细胞存活率下降,蛋白质羰基含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性均降低.与对照组相比,其存活率、细胞内蛋白质羰基含量和CAT活性,均差异极显著(P＜0.01),细胞内SOD和GSH-Px活性,差异显著(P＜0.05).结果表明,500 μmol/L H2O2作用于BRL-3A细胞可导致氧化应激的发生,其相关指标与大鼠冷暴露后肝脏受损指标改变趋势类似,利用BRL-3A细胞建立冷暴露引起的肝脏氧化损伤模型,为进一步探讨冷应激对肝脏损伤的机制奠定基础.     

T-2毒素对Sertoli细胞氧化应激和DNA损伤作用的研究

用不同浓度的T-2毒素染毒Sertoli细胞24h。染毒结束后采用MTT法检测细胞相对活力,常规方法检测SOD、过氧化氢酶(CAT)和谷胱肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量,彗星试验检测DNA损伤。结果显示,与对照组比较,随着T-2毒素染毒剂量的增加,Sertoli细胞的超氧化物歧化酶(SOD)、CAT和GSH-Px活性显著下降(P<0.05),MDA含量显著上升(P<0.05),DNA的损伤程度则加重的极为显著(P<0.01)。结果表明,T-2毒素可显著抑制Sertoli细胞活力,并通过氧化应激损伤细胞的DNA。     

茶多酚对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用

为研究茶多酚（TP）对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用，试验分为正常组、氧化损伤模型组、TP低（25 mg/mL）剂量组、中（50 mg/mL）剂量组、高（100 mg/mL）剂量组，分别通过MTT法、Hoechst 33342染色法、流式细胞分析法和ELISA法测定TP对H2O2诱导下U251细胞存活率、细胞形态、凋亡率和胞内活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）和胞内抗氧化酶活性的影响。结果表明：选择H2O2浓度和处理时间分别为400 μmol/L和24 h来构建U251细胞氧化损伤模型|TP浓度为0 ~ 100 mg/mL对U251细胞无毒性作用|中、高剂量组TP能显著抑制H2O2造成的U251细胞存活率降低（P < 0.05）|低、中、高剂量组TP能显著降低细胞凋亡率、MDA、胞内ROS水平和荧光强度（P < 0.05）|同时中、高剂量组TP能显著提高胞内总抗氧化能力（T-AOC）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性。TP对H2O2诱导U251细胞氧化损伤具有保护作用，其作用可能与增强细胞内抗氧化酶活性，减少脂质发生过氧化，清除细胞内过量的ROS及抑制细胞凋亡有关。 [关键词] 茶多酚|U251细胞|H2O2|氧化损伤|保护作用     

茯苓多糖对糖尿病小鼠淋巴细胞DNA损伤及肾组织主要抗氧化酶活性的影响

为研究茯苓多糖对2型糖尿病(NIDDM)小鼠淋巴细胞DNA损伤及肾组织主要抗氧化酶活性的影响,试验采用高糖高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)方式诱导NIDDM动物模型,然后将动物分成正常对照组、模型对照组、茯苓多糖灌胃组、罗格列酮灌胃组,药物连续灌胃42 d后,检测小鼠淋巴细胞DNA损伤,肾组织超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果表明:WRP对NIDDM小鼠淋巴细胞DNA损伤具有修复作用,能提高糖尿病小鼠肾组织中SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA的含量。表明茯苓多糖能增强肾脏抗氧化性,保护自由基介导的氧化损伤,可以治疗或延缓糖尿病肾病(DN)的发生。     

丹皮酚对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤的缓解作用

旨在探究丹皮酚对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, BMECs)炎性损伤的缓解作用。使用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对BMECs活力的影响,选用20、50和100 mg/L丹皮酚处理LPS诱导的BMECs炎性模型,并检测细胞凋亡、氧化应激因子、相关炎性因子及NF-κB关键通路蛋白表达的变化。结果显示：10～100 mg/L丹皮酚对BMECs增殖有不同程度的促进作用;不同剂量的丹皮酚可显著抑制细胞凋亡及IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平,提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量,抑制IκBα和p65的磷酸化水平。以上结果表明,丹皮酚能够抑制LPS诱导的BMECs的炎性损伤,其作用机制可能与NF-κB信号通路被抑制有关。     

硒对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

本试验旨在研究硒(Se)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化损伤的保护作用及其机制。将贴壁生长的第3代BMEC随机分为8组,每组6个重复,每个重复1个培养孔。对照(CON)组采用基础培养液,不添加Se和LPS,培养30h;LPS组和6个Se保护组在基础培养液中分别添加不同水平的Se(0、10、20、50、100、150和200nmol/L),培养24h后,加入1μg/mL LPS作为外源刺激作用6h。结果表明:1)与CON组相比,LPS组BMEC的相对增殖率显著下降(P0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著下降(P0.05),GPx1和TrxR1的基因和蛋白表达量、硒蛋白P(SelP)含量也显著下调(P0.05);而LPS组的一氧化氮(NO)含量,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)和白介素-6(IL-6)含量及其基因表达量,活性氧(ROS)活性,丙二醛(MDA)含量均显著升高(P0.05),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关因子p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的基因表达量呈相似变化。2)与LPS组相比,Se保护组随Se添加水平的增加,相对增殖率,T-SOD、CAT、GPx、TrxR活性,T-AOC,GPx1、TrxR1基因和蛋白表达量均呈先升高后下降趋势;而NO含量,iNOS活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6含量及其基因表达量,MAPK信号通路相关因子ERK1/2、JNK、p38 MAPK的基因表达量,ROS活性,MDA含量呈先降低后升高的趋势;以20~100nmol/L Se保护效果较好,综合来看50nmol/L Se保护效果最好。结果提示,Se可提高BMEC的抗氧化功能,对LPS引起的细胞氧化损伤具有保护作用,其机制是Se增强TrxR活性从而抑制MAPK信号通路的激活,最终减少NO的大量释放,但过高水平的Se会对细胞造成损伤。培养液中20~100nmol/L Se的保护作用较好,尤其以50nmol/L Se效果最好。     

苜蓿黄酮对脂多糖诱导下奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响

研究苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)诱导下奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响。将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组,即基础培养基、基础培养基中加入1 μg·mL^-1的LPS、基础培养基中加入1 μg·mL^-1的LPS和75 μg·mL^-1苜蓿黄酮、基础培养基中加入75 μg·mL^-1苜蓿黄酮。细胞在37 ℃, 5% CO₂的培养箱中培养。结果表明:1)LPS刺激12 h后奶牛乳腺上皮细胞活性下降,而添加苜蓿黄酮能够极显著抑制LPS诱导下细胞活性的下降(P<0.01)。2)在LPS刺激下,细胞内的活性氧(ROS)浓度升高,而添加苜蓿黄酮能够显著降低其浓度(P<0.05)。3)LPS显著上调细胞的IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4和MyD88表达(P<0.01),而苜蓿黄酮能够显著下调细胞的IL-1β、IL-6、TNF-α和TLR2表达(P<0.01或P<0.05)。4)在LPS刺激下,p53、Caspase3、p38和P-p38蛋白的表达显著升高(P<0.01或P<0.05),而添加苜蓿黄酮能够显著降低p53和p38蛋白的表达(P<0.05)。在LPS诱导下,苜蓿黄酮能够通过降低ROS浓度,抑制细胞凋亡,提高细胞活性;可能通过抑制TLR2/MyD88信号通路来降低细胞炎症因子的表达,从而保护细胞免受炎性损伤。     

雌激素调控奶牛乳腺上皮细胞凋亡及生长周期作用机制的研究

试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E₂组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E₂+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。     

Moringa oleifera leaf flavonoids protect bovine mammary epithelial cells from hydrogen peroxide-induced oxidative stress in vitro

Bovine mammary epithelial cells (BMECs) of high-producing dairy cows are subject to constant oxidative stress as a result of high metabolic rate and physiological adaptation to intensive farming. Moringa (Moringa oleifera) leaf has been proposed to have the antioxidant potential in scavenging free radicals due to the presence of flavonoids. In this study, we investigated the cytoprotective effects of moringa leaf flavonoids in alleviating oxidative stress in BMECs in vitro. Oxidative stress was established by exposing isolated BMECs to H₂O₂ for 2 hr. Doses of moringa leaf flavonoids were evaluated by treating BMECs for 12 hr. The optimal concentrations of H₂O₂ and moringa leaf flavonoids were 500 μmol/L and 1.0 mg/ml, respectively. The results showed that moringa leaf flavonoids increased the activities of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase; and reduced malondialdehyde activity and intracellular accumulation of reactive oxygen species (ROS) in the H₂O₂-induced oxidative stress system. A Hoechst33258 staining assay revealed that moringa leaf flavonoids decreased the apoptosis rate in BMECs, while leaving membrane integrity and nucleolar morphology unchanged. We concluded that moringa leaf flavonoids have the antioxidant capacity to effectively reduce oxidative stress in BMECs.     

山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立

【目的】 探究过氧化氢(H₂O₂)诱导山羊乳腺上皮细胞(GMEC)氧化损伤的最佳条件,构建可靠、稳定的氧化损伤模型,为今后探究紫大薯花青素对氧化损伤的保护机制提供模型条件。【方法】 试验采用二因子完全随机设计,第一因素为H₂O₂处理浓度,分别为0(对照组)、350、430、460、490、520和550 μmol/L,第二因素为对GMEC的处理时间,分别为8、11、14、17 h。舍弃细胞存活率低于60%的处理组,并根据结果重新调整处理浓度与时间。然后通过细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及培养液内乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定确定最佳的H₂O₂处理条件。【结果】 与对照组相比,各H₂O₂处理组作用8 h后GMEC存活率均显著降低(P<0.05),其中350、430、460 μmol/L H₂O₂处理8 h时细胞存活率分别降低至64.6%、72.9%、66.2%,基本符合细胞存活率的筛选需求(70%)。因此,选择350、430、460、490、520 μmol/L H₂O₂处理4、6、8、10 h进行后续试验。调整后,除4 h 430 μmol/L处理组外,各处理组LDH活性在不同处理时间下均显著高于对照组(P<0.05),并随着时间的延长逐渐升高,10 h时各处理组LDH活性均达到最大值,且与浓度呈正比;各处理组ROS含量在6 h时均显著高于对照组(P<0.05),且8 h时各处理组ROS含量较6 h均大幅度显著升高(P<0.05),说明8 h为ROS含量变化的转折点;430、490、520 μmol/L处理组MDA含量在处理8 h后均显著高于对照组(P<0.05),其中430 μmol/L处理组MDA含量在8和10 h时显著高于对照组(P<0.05);各浓度组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性在处理6~8 h时均出现不同程度的降低,且8 h时仅430 μmol/L处理组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著低于照组(P<0.05)。【结论】 430 μmol/L H₂O₂处理GMEC 8 h为构建GMEC氧化损伤模型最佳条件。     

Study on Effect of IGF-1 on Proliferation and Apoptosis of Bovine Mammary Epithelial Cells by Adding Inhibitor

The test was aimed to study the effect of insulin-like growth factor 1(IGF-1) on the proliferation of bovine mammary epithelial cells (BMECs),and provide a theoretical basis for the subsequent regulating mammary gland development using IGF-1. The optimal IGF-1 concentration for inhibiting BMECs apoptosis was obtained by measuring the apoptosis rate at 12, 24, 48 and 72 h after the addition of IGF-1 at four groups (0, 10, 50 and 100 μg/mL). Then divided into six groups:BMECs group, BMECs+IGF-1 group, BMECs+LY294002 group, BMECs+IGF-1+LY294002 group, BMECs+RAPA group and BMECs+IGF-1+RAPA group,and the apoptosis rates were detected by flow cytometry. The results showed that the heterologous IGF-1 had an inhibitory effect on the apoptosis of BMECs with an optimal concentration of 50 μg/mL. The apoptosis rates of BMECs+IGF-1+LY294002 and BMECs+IGF-1+RAPA groups were extremely significantly higher than BMECs+IGF-1 group (P<0.01). This study suggested that IGF-1 could activate the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway and thereby inhibit the apoptosis of BMECs. Moreover, IGF-1 might also promote the "repair" mechanism for the inhibited PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, and therefore make it reparticipate in BMECs life process.     

添加通路阻断剂对IGF-1影响奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的研究

试验旨在研究胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）增殖的影响,为后期利用IGF-1调控乳腺发育奠定理论基础。以奶牛乳腺上皮细胞为材料,首先分4组分别外源添加0（对照组）、10、50、100 μg/mL IGF-1且分别培养12、24、48、72 h,测定抑制BMECs凋亡率的最佳浓度;然后分6组：单纯BMECs组、BMECs+IGF-1组、BMECs+LY294002组、BMECs+IGF-1+LY294002组、BMECs+RAPA组和BMECs+IGF-1+RAPA组,采用流式细胞术测定各组细胞凋亡率。结果表明,外源性添加IGF-1对BMECs凋亡率具有抑制作用,最佳浓度为50 μg/mL;BMECs+IGF-1+LY294002与BMECs+IGF-1+RAPA组细胞凋亡率均极显著高于BMECs+IGF-1组（P<0.01）。推断IGF-1能够活化PI3K/Akt/mTOR信号通路,参与BMECs凋亡的调控作用,进而抑制BMECs细胞凋亡;IGF-1可能会对被抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路产生"修复"机制,使其能够重新参与BMECs的生命进程。     

苜蓿素对脂多糖诱导下奶牛乳腺上皮细胞炎症和乳蛋白合成相关基因表达的影响

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P0.05),而T组则显著升高(P0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P0.01),而一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量则显著低于L组(P0.01)。3)LPS能够显著升高细胞的白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体2(TLR2)、TLR4和髓样分化因子88(My D88)表达水平(P0.01),而添加苜蓿素能够显著降低IL-1β、TNF-α、TLR2和TLR4的表达水平(P0.01)。4)与对照组相比,T组细胞的酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子5(STAT5)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)和核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)表达量显著升高(P0.01),而碱性氨基酸转运载体1(CAT1)表达量显著降低(P0.01)。LPS能够显著降低细胞的CAT1、L型氨基酸转运载体1(LAT1)、STAT5、m TOR和4EBP1表达水平(P0.01或P0.05),而添加苜蓿素能够显著升高STAT5表达水平(P0.01)。结果表明,乳腺细胞在LPS刺激下,导致细胞内炎症因子基因表达升高和抑制乳蛋白合成相关基因的表达,而添加苜蓿素能够抑制乳腺细胞内炎症因子基因表达,但对乳蛋白合成的相关基因表达作用不明显;无LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高乳腺细胞活性和促进乳蛋白合成相关基因的表达。     

抑制PERK对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬的影响

旨在研究PERK在脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬中的作用。首先,试验设对照组(CON)和LPS组(LPS,4μg·mL^-1),研究LPS对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响;随后用不同浓度的PERK抑制剂GSK2606414(GSK)预处理细胞,通过测定PERK、ATF4、eIF-2α和CHOP的mRNA表达,筛选出GSK的最佳抑制浓度;最后将奶牛乳腺上皮细胞分为对照组(CON)、LPS组(LPS)、GSK+LPS组(GLPS)和GSK组4组,研究抑制PERK对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬的影响。采用RT-qPCR和Western blot分析内质网应激、自噬相关基因和蛋白的表达,通过免疫荧光检测GRP78和p62的荧光强度。结果表明：1)与对照组相比,LPS组的PERK、IRE1α、ATF6、GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。LPS还可以显著升高LC3、ATG5、ATG14和Beclin1的mRNA和蛋白表达(P<0.01),并且显著降低p62的mRNA和蛋白表达(P...