基于线粒体COⅠ基因的2个新发现鸡种资源DNA编码研究

以中国2个新发现鸡种资源金湖乌凤鸡、安义瓦灰鸡及地方鸡种狼山鸡为研究对象,利用DNA测序技术测定了线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome c oxidase Ⅰ,COⅠ）基因序列,揭示2个新发现资源COⅠ基因的遗传多样性及其与地方鸡种的遗传关系。结果显示,选择的这段COⅠ基因序列在2个新发现资源和狼山鸡中有10个突变位点,为7个单倍型,其中有3个为特异性突变位点,5个特异性单倍型。金湖乌凤鸡、安义瓦灰鸡和狼山鸡群体内平均核苷酸多样度（Pi）分别为0.068%;0.051%和0.0369%,单倍型多样度（H）分别为0.4167、0.3030和0.9000。狼山鸡的遗传多样性大于2个新发现资源。3个地方鸡群体间的Kimura双参数遗传距离范围为－0.002～0.236;种间遗传距离小于种内遗传距离。结果表明,利用COⅠ这一特定基因的特定区段来做DNA条形编码的基础,进行不同鸡品种鉴定具有方便、快捷、经济、准确等优点,是可行和有效的。     

阿坝州藏鸡种蛋的蛋形指数和蛋重对孵化效果的影响

为探讨阿坝州藏鸡种蛋的蛋形指数、蛋重对孵化效果的影响,本试验对阿坝州藏鸡三个品系的种蛋(共1 937枚)按蛋形指数(纵径/横径)不同分为A(蛋形指数1.30)、B(蛋形指数1.30~1.35)、C(蛋形指数1.35)3组,并分别对3组的蛋形指数、蛋重、孵化情况等指标进行统计分析。结果显示:阿藏1系种蛋的蛋形指数均值为1.35,蛋重均值为54.64 g;阿藏2系种蛋的蛋形指数均值为1.34,蛋重均值为55.67 g;阿藏3系种蛋的蛋形指数均值为1.34,蛋重均值为54.94 g;阿藏1系、阿藏2系B组的受精蛋孵化率最高,分别为94.48%、94.77%;阿藏3系C组的受精蛋孵化率最高,为90.48%。     

基于血凝素裂解位点的DNA条形码在A型流感病毒分型中的应用

为了建立一种快速鉴别AIV的HA亚型的RT-PCR方法,本研究探讨了流感病毒血凝素裂解位点基因作为DNA条形码对A型流感病毒进行亚型鉴定的可行性。通过生物信息学方法对16种A型流感病毒的血凝素基因全长进行比对,在HA裂解位点的两端高度保守区设计一对DNA条形码引物,RT-PCR扩增获得约170bp的核苷酸片段。利用MEGA5.0软件构建N-J系统树并计算亚型间及亚型内平均遗传距离。结果显示,不同A型流感病毒裂解位点氨基酸具有单系性,每一亚型可分别形成各自独立的分支。不同亚型间平均遗传距离为0.277,相同亚型内平均遗传距离0.032。研究表明,利用DNA条形码技术可在A型流感病毒分型方面进行有效的分子分类鉴定。     

利用DNA条形码对海南特种野猪的鉴定研究

试验旨在探讨以猪的细胞色素氧化酶Ⅰ（cytochrome C oxidase subunitⅠ,COXⅠ）基因的特定区段作为DNA条形码识别海南特种野猪与其他品种的可行性和有效性。以海南特种野猪、海南野猪、屯昌猪、五指山猪及长白猪为研究对象,测定其COXⅠ基因,同时在NCBI中下载已发表的具有地方代表性的13个猪品种的COXⅠ基因序列,分析海南特种野猪与其他品种的遗传多样性、遗传距离,并构建系统进化树。结果发现,猪COXⅠ基因序列长1 419 bp,5个猪品种45个个体COXⅠ基因共检测到67个变异位点,占分析位点的4.7%,其中简约信息位点22个;5个猪品种的种内遗传距离为0.001~0.019,其中海南特种野猪的种内遗传最大,为0.019;5个猪品种的种间遗传距离为0.009~0.123,其中海南特种野猪与长白猪的遗传距离最大,为0.123;海南特种野猪杂交情况比较明显,与海南本地品种五指山猪、屯昌猪和海南野猪都有聚类,与武夷黑猪、三都黑猪、陆川猪位于一个分支,另一部分与大花白猪位于一个分支,与长白猪没有聚类。本试验结果为海南特种野猪的进一步选育提供了参考依据。     

阿坝州藏鸡体重和体尺性状的相关与回归分析

为了研究阿坝州藏鸡体重与体尺性状间的相关关系,本试验测定了3个不同群体藏鸡的体重和体尺性状指标,并进行了相关分析。结果表明,阿藏2系藏鸡的体重、多项体尺性状指标较高,阿藏1系藏鸡较低;除了阿藏1系的体重与胸宽差异不显著外,三个品系的体重与体尺性状间均存在极显著的相关关系(P0.01),其中胫围与体重的相关系数最高,三个品系依次为0.763、0.673、0.743;通过建立的最优回归方程(体重=-1.554 9+0.279 2胫围+0.071 6胫长+0.057 6胸宽+0.040 5体斜长+0.038 5胸深,模型决定系数为0.714)可以看出,对藏鸡体重影响较大的体尺性状依次为胫围、胫长、胸宽、体斜长和胸深。     

运用DNA指纹技术辅助筛选罗曼蛋鸡配套组合

分析罗曼蛋鸡八个品系特定基因位点上DNA指纹图带的多态性，依此进行遗传聚类分析，计算种群间的遗传距离，根据测试分析结果，以及其它资料，辅助筛选品系间的配套组合。     

利用DNA条形码对海南特种野猪的鉴定研究

试验旨在探讨以猪的细胞色素氧化酶Ⅰ(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COXⅠ)基因的特定区段作为DNA条形码识别海南特种野猪与其他品种的可行性和有效性。以海南特种野猪、海南野猪、屯昌猪、五指山猪及长白猪为研究对象,测定其COXⅠ基因,同时在NCBI中下载已发表的具有地方代表性的13个猪品种的COXⅠ基因序列,分析海南特种野猪与其他品种的遗传多样性、遗传距离,并构建系统进化树。结果发现,猪COXⅠ基因序列长1 419bp,5个猪品种45个个体COXⅠ基因共检测到67个变异位点,占分析位点的4.7%,其中简约信息位点22个;5个猪品种的种内遗传距离为0.001~0.019,其中海南特种野猪的种内遗传最大,为0.019;5个猪品种的种间遗传距离为0.009~0.123,其中海南特种野猪与长白猪的遗传距离最大,为0.123;海南特种野猪杂交情况比较明显,与海南本地品种五指山猪、屯昌猪和海南野猪都有聚类,与武夷黑猪、三都黑猪、陆川猪位于一个分支,另一部分与大花白猪位于一个分支,与长白猪没有聚类。本试验结果为海南特种野猪的进一步选育提供了参考依据。     

河南省4种地方品系鸡的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD) 技术分析河南省4个地方鸡的品系,固始鸡快羽G_K系、固始鸡慢羽G_M系、矮小型绿壳蛋鸡、黄麻羽丝毛乌骨鸡的遗传变异。用186个随机引物对4个鸡种基因组DNA池扩增筛选,40个引物产生多态性。此40个引物经重新优化反应体系后,对120个个体的基因组DNA 进行RAPD分析。40个引物共产生387种扩增片段,扩增产物片段的长度大小在100～2220 bp范围内。利用电泳分析数据分别计算4个品系群体之间的遗传相似系数和遗传距离指数,结果4个鸡种的亲缘关系与它们的引种情况基本一致。同时也证明了RAPD技术可以作为分子标记,很好地检测鸡种群内的遗传变异及区分不同鸡品系。     

鸡myostatin基因成熟区段DNA的克隆及其在甲醇酵母中的融合表达

根据GenBank中鸡myostatin（AF019621）成熟区段的cDNA序列设计了1对引物，利用PCR技术扩增了萧山鸡myostatin的成熟区段，构建了重组真核表达载体myostatin-pPIC9K，并在甲醇酵母中融合表达了myostatin蛋白。结果发现，萧山鸡myostatin基因存在2处碱基变异：T^204→C^204（编码的氨基酸没有变），C^205→T^205（编码的氨基酸由Pro变成Ser），从而产生了1个EspⅠ或Bpull02Ⅰ限制性内切酶酶切位点。核苷酸序列同源性分析表明，myostatin基因成熟区段DNA在不同物种间具有高度的保守性。SDS-PAGE鉴定结果表明，表达的目的蛋白（26ku）具有生物学活性。     

近交系大鼠STR复合扩增DNA多态性的分析

实验从已筛选出的近交系大鼠的 2 0个基因座位点中 6个位点 ,合成 6对引物 ,利用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术对国内已知的SHR、SHRSP、L EW、RCS、WKY和 F3 44等 6个近交系大鼠各 4只进行了 DNA多态性的分析。结果表明同一品系不同个体之间没有多态性 ;不同品系个体之间具有显著多态性 ;利用这6个特异性的位点对国内 6种常用近交系大鼠可有效地进行遗传背景的鉴别。该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分 ,并大大地提高了其监测效率。因此 ,本实验为实验动物遗传背景的监测提供一个高效快捷、简便准确的方法     

甘草药渣对生长肥育猪生长性能、胴体性状和肉品质的影响

本试验旨在研究甘草药渣对生长肥育猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响。选取240头体重80 kg左右健康的三元杂交猪,按等性别比例随机分成4组,每组3个重复,每个重复20头。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣,试验期为7周。结果表明:1%甘草药渣组的平均日增重最高,与对照组相比差异显著(P<0.05);与对照组相比,1%、2%、4%甘草药渣组的平均日采食量分别提高了8.04%(P>0.05)、11.54%(P<0.05)、13.28%(P<0.05);与其他3组相比,1%甘草药渣组的料重比显著降低(P<0.05)。2%和4%甘草药渣组的屠宰率显著高于对照组(P<0.05),1%和2%甘草药渣组的眼肌面积显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣对肌肉常规营养成分含量、背膘厚以及大理石纹评分、pH24 h、熟肉率、滴水损失和剪切力均没有产生显著影响(P>0.05)。生长肥育猪肌肉中共检测到17种氨基酸,与对照组相比,饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣对生长育肥猪肌肉中甘氨酸、半胱氨酸、脯氨酸的含量没有产生显著影响(P>0.05); 1%甘草药渣组肌肉中必需氨基酸和氨基酸的总量均为最高,显著高于4%甘草药渣组(P<0.05),但与对照组没有显著差异(P>0.05)。与对照组相比,饲粮中添加4%的甘草药渣显著降低了肌肉中花生酸的含量(P<0.05),饲粮中添加1%的甘草药渣显著提高了肌肉中不饱和脂肪酸的含量(P<0.05)。由此可知,饲粮中添加1%的甘草药渣可提高生长育肥猪的生长性能,增加眼肌面积和肌肉中不饱和脂肪酸的含量,从而改善肉质,因此推荐生长育肥猪饲粮中甘草药渣的添加量为1%。     

miR-27a和miR-378在中外猪种背最长肌中的差异表达研究

为了研究miRNA表达量与肉质风味表型指标的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(Q-PCR)检测了4个猪种背最长肌中miR-27a和miR-378的差异表达。结果表明:背最长肌组织中2种miRNA的表达水平在4个猪种中趋于一致。相关性分析显示,2种miRNA在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈正相关,与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈负相关。表明miR-27a和miR-378对猪肉品质具有正调控作用,而对猪胴体品质具有负调控作用。该研究可为阐明miRNA在猪肌肉生长和脂肪沉积过程中的调控机制提供基础数据。     

日粮中添加禾王草对泌乳奶牛血液生化指标和激素水平的影响

本文研究了日粮中添加禾王草（Pennisetum giganteum）干草或青贮对泌乳奶牛血液生化指标和激素水平的影响。将45头产奶量、泌乳天数和胎次等相近的荷斯坦奶牛随机分为3组。对照组日粮粗饲料由羊草、苜蓿干草和全株玉米青贮组成,试验Ⅰ组粗饲料中禾王草青贮代替40%全株玉米青贮,试验Ⅱ组粗饲料中禾王草干草代替全部羊草和33%苜蓿干草,3组日粮营养水平相近,预饲期10 d,正试期60 d。结果表明：与对照组相比,试验Ⅰ组、Ⅱ组对白蛋白、总蛋白、尿素氮、胆固醇、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、β-羟丁酸和非酯化脂肪酸含量影响不显著;试验Ⅱ组生长激素和皮质醇含量略高,但差异不显著,各组间胰岛素含量差异不显著。综上所述,用禾王草干草代替部分苜蓿干草或用禾王草青贮代替适量全株玉米青贮饲喂奶牛安全可靠。     

日粮中添加不同水平杜仲叶对牦牛瘤胃液体外发酵的影响

为研究日粮中添加不同水平杜仲叶对牦牛瘤胃液体外发酵及养分降解率的影响,采用单因素试验设计,分为6个处理组,基础日粮的精粗比为50:50,分别用0%(对照组)、1%、2%、3%、4%、5%的杜仲叶替代基础日粮中的粗料,每个处理组设4个重复。结果表明:(1)与对照组相比,基础日粮中添加杜仲叶培养72 h后,对总产气量(GP)、最大潜在产气量(b)、产气速率(c)、产气前停滞时间(L)和pH没有显著影响(P> 0.05);(2)与对照组相比,各试验组的干物质降解率(DMD)分别提高8.85%、9.15%、11.90%、15.47%、14.55%,粗蛋白质降解率(CPD)分别提高2.20%、4.11%、8.59%、10.72%、7.27%,中性洗涤纤维降解率(NDFD)分别提高5.11%、7.11%、9.50%、13.31%、6.83%,酸性洗涤纤维降解率(ADFD)分别提高11.96%、15.17%、16.57%、16.57%、18.60%、11.25%。随杜仲叶添加水平的提高,日粮中DMD、CPD、NDFD和ADFD呈二次曲线变化(P <0.01),在添加量为4%时达到最大值,添加量提高到5%时,日粮中DMD、CPD、NDFD和ADFD显著降低(P <0.05);(3)与对照组相比,各试验组的NH3-N浓度分别降低4.05%、4.73%、8.68%、11.03%、12.99%,微生物菌体蛋白(MCP)浓度分别提高104.55%、204.55%、222.73%、236.36%、236.36%。瘤胃液中NH3-N浓度随杜仲叶添加水平的提高呈线性下降(P <0.01),而瘤胃液中MCP浓度随杜仲叶添加水平的提高呈二次曲线变化,添加量为1%～3%时MCP浓度显著增加(P <0.01),当添加量为3%以上时,MCP浓度呈现平台模型。综上,日粮中添加杜仲叶可以提高日粮纤维的降解率,降低瘤胃液氨态氮浓度,提高瘤胃微生物蛋白的合成,杜仲叶适宜添加量为3%～4%。     

酵母培养物对肉兔生产性能、脏器指数和血液生化指标的影响

本试验旨在通过研究饲料中添加不同水平的酵母培养物对肉兔生长性能、屠宰性能、脏器指数和血液生化指标的影响,确定其适宜添加量。将192只断奶新西兰兔随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复8只,分别饲喂含0 %、0.1 %、0.2 %和0.3 %酵母培养物的试验饲粮,试验期6周。结果表明:添加酵母培养物可显著降低肉兔腹泻率(P < 0.05);与对照组相比,添加0.2 %和0.3 %酵母培养物组日增重和血清葡萄糖浓度显著提高(P < 0.05),添加0.3%酵母培养物组肾脏指数显著降低(P < 0.05);添加酵母培养物对平均日采食量、料重比、屠宰性能、心脏指数、肝脏指数、胰脏指数和血清胆固醇、甘油三酯浓度均无显著影响(P > 0.05)。因此,肉兔饲料中酵母培养物的适宜添加量为0.3 %。     

家兔矮小同源盒基因(Shox2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因(Shox2)序列,预测其结构和功能,以及研究Shox2基因的时空表达特征,本研究克隆了新西兰白兔Shox2基因全长CDS区,分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征,并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期(E20.5d)、胚胎后期(E28.5d)、幼龄期(出生后10d)、成年期(A)4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织,采用实时荧光定量PCR技术研究Shox2基因的时空表达图谱。结果,成功克隆了新西兰白兔Shox2基因(登录号:KP726285)。Shox2基因CDS区全长666bp,翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示,Shox2为碱性、不稳定蛋白,Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%,无规则卷曲区域占33.48%,延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高,说明Shox2蛋白在进化中较保守。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,在E20.5d的家兔胚胎中,Shox2mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高,在E28.5d时表达量较高的是脾、心,幼龄期时表达量较高的是真皮、肝,成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔Shox2基因,预测了其结构和功能。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与Shox2功能高度相关,并受到严格的调控。     

一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响

为研究牦牛肠黏膜源屎肠球菌G2对健康小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响,试验设置对照组(CON)、热灭活菌组(EHK)、活菌组(ENT)3个处理组,每组8只C57BL/6小鼠,共计24只。CON组、EHK组、ENT组于正式试验期第1、2、4、6天按0.1 mL/只分别灌胃M17培养基、热灭活菌液和活菌菌液,灌胃前无菌收集小鼠粪便进行乳酸菌总菌计数,第8天处死小鼠取样。结果表明:ENT组乳酸菌总菌数量在第3、5天显著大于CON组与EHK组(P <0.05);各组小鼠结肠病理学评分无显著差异,但ENT组隐窝深度显著高于CON组与EHK组(P <0.05);各组间肠黏膜免疫因子Reg3β、Reg3γ和MUC2基因mRNA表达量差异不显著,TNF-α表达量ENT组显著低于CON组(P <0.05)。综上可知,牦牛源屎肠球菌G2可能为一种肠道过路菌,能在短时间内提高肠道乳酸菌的总数,一定程度上具有改善肠道形态和促进肠道健康的作用。     

日粮中添加川芎茎叶对彭县黄鸡生产性能、屠宰性能及器官指数的影响

试验旨在通过研究日粮中添加川芎茎叶对彭县黄鸡生产性能、屠宰性能及器官指数的影响,以期为川芎茎叶的利用提供理论基础。试验随机选取72日龄雄性彭县黄鸡280只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复14只。A组为对照组,饲喂基础日粮;B组、C组和D组为试验组,分别饲喂日粮中含1%、3%和5%川芎茎叶的试验日粮,试验期为47 d。结果表明:C组和D组彭县黄鸡末期体重显著高于A组(P < 0.05),分别增加1.56%和1.68%,B组彭县黄鸡末期体重高于A组,增加0.58%,但无显著差异(P > 0.05);与A组相比,D组全净膛率显著提高2.75%(P < 0.05),B组和C组分别提高0.42%和0.62%,但是无显著差异(P > 0.05);C组法氏囊指数最高且比A组、B组和D组分别提高0.22、0.20和0.15,C组法氏囊指数显著高于A组和B组(P < 0.05),C组和D组间差异不显著(P > 0.05),且A组、B组和D组之间无显著差异(P > 0.05)。在本试验条件下,在彭县黄鸡的饲粮中添加川芎茎叶对彭县黄鸡生长发育与健康无负作用,饲粮中含较高比例的川芎茎叶可改善末期体重、全净膛率以及法氏囊指数,并且可提高生产性能和屠宰性能,增强免疫能力。     

群体感应分子——法尼醇与白色念珠菌的相互作用

群体感应最早在细菌中发现,近年来也陆续发现存在于真菌中。群体感应中的关键信号分子被称为群体感应分子,是由微生物自身所分泌、感知、响应并作用于其自身,在引起反应的浓度时对其自身没有毒性的一类物质。法尼醇是白色念珠菌的群体感应分子,影响白色念珠菌的耐药性、菌丝形成、黏附力和凋亡;影响白色念珠菌宿主机体的免疫及宿主细胞的凋亡。此外,白色念珠菌对法尼醇具有高于其他真菌的耐受性,但这种机制尚不明确。目前对群体感应分子法尼醇的作用机制缺乏了解,本文就群体感应分子法尼醇与白色念珠菌之间的相互作用展开综述。     

饲粮直链/支链淀粉和淀粉酶对肉鸡生长性能的影响及其互作效应研究

本试验旨在研究饲粮直链/支链淀粉和淀粉酶对肉鸡生长性能和营养物质表观消化率的影响。试验采用4×3双因子设计,选用1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡960只,随机分为12个组,每组5个重复,每个重复16羽肉鸡,饲粮直链/支链淀粉分别为0.11、0.23、0.35、0.47,淀粉酶的添加量分别为0、3000、6000U/kg。试验期为21d。试验测定了肉鸡生长性能和营养物质表观消化率。结果表明:1)直链/支链淀粉为0.23的饲粮组肉鸡的平均日增重显著提高(P<0.05),料重比以直链/支链淀粉为0.47的饲粮组最高(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);饲粮中添加6000U/kg淀粉酶显著降低肉鸡平均日增重(P<0.05),但对料重比影响不显著(P>0.05);二者的互作效应不显著(P>0.05)。2)能量、粗蛋白质、干物质、粗脂肪以及钙表观消化率以直链/支链淀粉为0.11的饲粮组最高(P<0.05),直链/支链淀粉为0.47的饲粮组最低(P<0.05);饲粮中添加淀粉酶对营养物质表观消化率影响不显著(P>0.05);二者的互作效应对营养物质表观消化率影响显著(P<0.05)。综上所述,饲喂直链/支链淀粉为0.23和淀粉酶添加量为3 000 U/kg的饲粮可提高肉鸡的生长性能。