miR-1、miR-27a、miR-369和miR-378在7个地方猪种背最长肌中的表达与肉质性状的关系研究

实验采用荧光定量PCR技术(q-PCR)检测藏猪、成华猪、雅南猪、丫杈猪、青峪猪、内江猪和乌金猪7个地方猪种背最长肌中miR-1、miR-27a、miR-369、miR-378的差异表达,旨在研究miRNA表达量与肉质风味表型指标的相关性。结果表明:背最长肌组织中4种miRNA的表达水平在7个猪种中趋于一致,在藏猪、内江猪、雅南猪和成华猪中相对表达量较高,在丫杈猪和乌金猪中相对表达量较低;相关性分析显示,4种miRNA在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈正相关,与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈负相关,表明miR-1、miR-27a、miR-369和miR-378对猪肉品质具有正调控作用,而对猪胴体品质具有负调控作用。本研究可为阐明miRNA在猪肌肉生长和脂肪沉积过程中的调控机制提供基础数据。     

不同猪种背最长肌中miR-23a、miR-151、miR-299、miR-199a和miR-497的差异表达研究

为研究miRNA表达量与肉质风味的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(Q-PCR)检测了4个猪种背最长肌中miR-23a、miR-151、miR-299、miR-199a和miR-497的差异表达。结果表明,miR-23a、miR-151在藏猪背最长肌中表达最高,miR-299、miR-199a和miR-497在约克夏猪背最长肌中表达最高;相关性分析显示,miR-23a、mi R-151在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈正相关,与肌纤维面积、眼肌面积和瘦肉率呈负相关,miR-299、miR-199a和miR-497在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈负相关,与肌纤维面积、眼肌面积和瘦肉率呈正相关。综上表明,miR-23a、miR-151对猪肉品质具有正调控作用,miR-299、miR-199a和miR-497对猪胴体品质具有正调控作用。     

不同猪种背最长肌中miR-27a和miR-378的差异表达研究

为了研究miRNA表达量与肉质风味表型指标的相关性,试验采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测了藏猪和大约克夏猪背最长肌中miR-27a、miR-378的差异表达。结果表明:藏猪在6月龄时背最长肌中miR-27a和miR-378的表达量均极显著低于大约克夏猪(P0.01)。相关性分析显示,miR-27a、miR-378与肌内脂肪含量和硫胺素呈负相关,而与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈显著或极显著正相关(P0.05或P0.01)。说明miR-27a和miR-378对猪肉品质具有重要的负调控作用。     

miR-27a、miR-27b和miR-378在不同猪种皮下脂肪中的差异表达研究

为研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,实验采用QRT-PCR技术检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-27a、miR-27b、miR-378的差异表达情况。结果表明:miR-27a、miR-27b、miR-378在大约克夏猪背部皮下脂肪中的表达水平均显著高于6个地方猪种(P0.05);地方猪种中,3种miRNA表达水平均表现为在雅南猪中最高;3种miRNA在背部皮下脂肪中相对表达量均与瘦肉率、多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P0.01)。综上表明,miR-27a、miR-27b和miR-378均可抑制猪脂肪沉积,提高胴体性能,但对猪肉质具有负调控作用。     

miR-1和miR-369在中外猪种背最长肌中的表达与肉质性状的关系研究

为了研究mi RNA表达量与肉质风味表型指标的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(Q-PCR)检测了5个猪种背最长肌中mi R-1和mi R-369的差异表达。结果表明:背最长肌组织中2种mi RNA的表达水平在5个猪种中趋于一致。相关性分析显示,2种mi RNA在背最长肌中的表达水平与肌内脂肪含量和硫胺素含量呈正相关,与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈负相关。表明mi R-1和mi R-369对猪肉品质具有正调控作用,而对猪胴体品质具有负调控作用。该研究可为阐明mi RNA在猪肌肉生长和脂肪沉积过程中的调控机制提供基础数据。     

不同猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的表达差异及其与胴体、肉质性状相关性分析

为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部皮下脂肪中的表达水平显著高于地方猪种(P<0.05);地方猪种中,miR-1和miR-369表达水平分别在藏猪和雅南猪中最高;相关性分析显示,miR-1和miR-369在背部皮下脂肪中表达水平均与瘦肉率、多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01),与单不饱和脂肪酸含量均呈显著负相关(P<0.05),miR-369表达水平还与平均背膘厚呈极显著负相关(P<0.01)。试验表明miR-1和miR-369可能对猪脂肪沉积和单不饱和脂肪酸生成起负调控作用,对多不饱和脂肪酸生成起正调控作用。     

5种miRNA在牛背最长肌中表达及其与肉质性状相关性研究

为研究miRNA表达水平与牛肉质性状的相关性，本研究以新疆褐牛和哈萨克牛背最长肌组织为研究对象，采用荧光定量PCR技术检测了背最长肌组织中的miR-320a、miR-152、miR-143、miR-451、miR-125a表达情况。结果显示：新疆褐牛背最长肌组织中miR-320a、miR-152、miR-143、miR-451表达水平显著高于哈萨克牛，miR-125a表达水平显著低于哈萨克牛。相关性分析显示：miR-320a、miR-152、miR-143、miR-451、miR-125a与脂肪含量呈极显著正相关；miR-320a、miR-152与肉豆蔻酸含量呈显著正相关，miR-143与肉豆蔻酸含量呈极显著正相关，miR-152、miR-125a与棕榈烯酸呈显著负相关，miR-143与亚油酸呈显著负相关；miR-320a、miR-152、miR-143与失水率呈显著负相关；miR-320a、miR-143与黄度值、pH呈显著正相关；miR-320a与红度值呈显著正相关。结果表明：miR-320a、miR-152、miR-143、miR-125a表达量增加促进肌肉组织脂肪沉积，其中mi...     

miR-222在藏猪和DLY猪背最长肌和腰大肌中的表达差异研究

为了探究miR-222在藏猪和DLY猪背最长肌和腰大肌中的差异表达情况,试验选用雌性藏猪和DLY猪各6头,采用RT-PCR法检测miR-222和PGC1α在背最长肌和腰大肌中的表达情况。结果表明,在藏猪和DLY猪中miR-222在背最长肌的表达量均显著(P 0.05)高于腰大肌,而藏猪和DLY猪背最长肌的PGC1α表达量均显著(P 0.05)低于腰大肌。miR-222在猪背最长肌和腰大肌的表达特性,提示miR-222与猪的肌肉发育特性有关。     

microRNA调控猪肌内脂肪沉积的研究进展

肌内脂肪（intramuscular fat,IMF）含量是评判猪肉品质的关键指标,其可影响猪肉的嫩度、剪切力、多汁性和风味等。微小RNA （microRNA,miRNA）是一类长度约为22 nt的短链非编码RNA,在胚胎发育、成脂分化、肌纤维形成、神经调节、免疫应答等多种生理过程中发挥重要作用。越来越多的研究表明,miRNA在猪肌内脂肪沉积过程中发挥重要调控作用,是脂质代谢的重要调控因子。作者通过归纳国内外关于miRNA调控猪肌内脂肪沉积的相关研究发现,miR-34a、miR-125a-5p、miR-32-5p等通过靶向作用转录因子Krüppel样因子（Krüppel-like factors,KLF）家族成员调控猪肌内脂肪沉积,miR-130a通过靶向作用过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptor,PPAR）家族成员调控猪肌内脂肪沉积,miR-34a、miR-17-5p和miR-125a-5p等通过靶向作用其他家族成员,如长链酯酰辅酶A合成酶4（acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4）、核受体共激活因子3（nuclear receptor coactivator 3,NCOA3）等来调控猪肌内脂肪沉积。然而miRNA调控猪肌内脂肪的具体作用机制尚不完全清楚,还需要进一步探究。作者通过梳理目前已经证实的与猪肌内脂肪沉积相关的miRNA,整理相关miRNA的靶基因以及主要作用通路,以期为筛选肌内脂肪相关miRNA提供参考,为改善肉质提供新的思路和策略,为阐明miRNA在猪脂质代谢中的作用机制提供参考。     

不同品种猪肌肉组织miR-1和miR-133基因的表达分析

本研究旨在探讨猪miR-1和miR-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测miR-1和miR-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的表达情况。结果表明,在蓝塘猪中,miR-1的表达量分别为长白猪和大花白猪的4.7和6.4倍,前者与后两者之间表达水平有显著的差异(P<0.05),而后两者之间表达量差异不显著(P>0.05);同样,miR-133在蓝塘猪中的表达量最高,其次为长白猪,两者分别是大花白猪的7.2和5.7倍,且差异显著(P<0.05),但蓝塘猪与长白猪之间差异不显著(P>0.05)。miR-1和miR-133在不同品种猪中存在特异性表达,提示可能与肌肉发育性状相关。     

阿坝藏鸡三个品系线粒体DNA编码分析

试验旨在通过对阿坝藏鸡三个品系进行深入研究,利用COX1和D-LOOP基因某一特定区段作为DNA条形码对阿坝藏鸡三个品系进行分子鉴定,分析其遗传多态性并探讨DNA条形码在藏鸡分支鉴定工作的可行性和有效性。以阿藏1系、阿藏2系、阿藏3系三个品系作为研究对象,利用DNA测序技术测定了COX1和D-LOOP基因的部分序列。两基因在三个品系的单倍型数量、平均核苷酸差异数(K)均不相同,阿藏3系的平均核苷酸差异数高于阿藏1系和阿藏2系;三个品系核苷酸多态度(Pi)相差不大,其中阿藏2系COX1基因核苷酸多态度略高于其他两品系。三个品系内COX1和D-LOOP两基因测算得出的遗传距离分别为2.21~2.40、4.02~4.34,且各品系间相差不大。通过构建两基因的UPGMA树显示,三品系间存在一定程度的基因交流。利用COX1和D-LOOP基因某一特定区段作为DNA条形码的基础,各有其优势特点,两基因工具搭配使用可提高品系鉴定的准确性。     

酵母培养物对肉兔生产性能、脏器指数和血液生化指标的影响

本试验旨在通过研究饲料中添加不同水平的酵母培养物对肉兔生长性能、屠宰性能、脏器指数和血液生化指标的影响,确定其适宜添加量。将192只断奶新西兰兔随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复8只,分别饲喂含0 %、0.1 %、0.2 %和0.3 %酵母培养物的试验饲粮,试验期6周。结果表明:添加酵母培养物可显著降低肉兔腹泻率(P < 0.05);与对照组相比,添加0.2 %和0.3 %酵母培养物组日增重和血清葡萄糖浓度显著提高(P < 0.05),添加0.3%酵母培养物组肾脏指数显著降低(P < 0.05);添加酵母培养物对平均日采食量、料重比、屠宰性能、心脏指数、肝脏指数、胰脏指数和血清胆固醇、甘油三酯浓度均无显著影响(P > 0.05)。因此,肉兔饲料中酵母培养物的适宜添加量为0.3 %。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与非典型瘟病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立同时快速简便地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与非典型瘟病毒(APPV)两种病毒的方法,本研究根据GenBank中登录的PRRSV、APPV的基因序列,选取PRRSV的ORF2基因和APPV的NS2基因分别设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了能够同时检测PRRSV与APPV的双重RT-PCR方法。利用该方法对PRRSV、APPV重组质粒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒的cDNA和阴性对照进行检测,结果显示除PRRSV和APPV重组质粒扩增结果为阳性外,其余均为阴性,表明其特异性良好;该方法对APPV和PRRSV质粒标准品的最低检出量分别为2.17×10~4拷贝/μL、3.13×10~3拷贝/μL,敏感性较高;同时批间和批内重复性试验表明该方法重复性好。利用该方法对四川地区临床73份疑似仔猪颤抖病与猪繁殖与呼吸综合征病的病料样品进行检测,结果与单一RT-PCR的检测符合率为100%。本研究建立的双重RT-PCR方法具有良好的实用性,可用于临床样品的检测,对临床早期诊断具有重要意义。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响

为研究牦牛肠黏膜源屎肠球菌G2对健康小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响,试验设置对照组(CON)、热灭活菌组(EHK)、活菌组(ENT)3个处理组,每组8只C57BL/6小鼠,共计24只。CON组、EHK组、ENT组于正式试验期第1、2、4、6天按0.1 mL/只分别灌胃M17培养基、热灭活菌液和活菌菌液,灌胃前无菌收集小鼠粪便进行乳酸菌总菌计数,第8天处死小鼠取样。结果表明:ENT组乳酸菌总菌数量在第3、5天显著大于CON组与EHK组(P <0.05);各组小鼠结肠病理学评分无显著差异,但ENT组隐窝深度显著高于CON组与EHK组(P <0.05);各组间肠黏膜免疫因子Reg3β、Reg3γ和MUC2基因mRNA表达量差异不显著,TNF-α表达量ENT组显著低于CON组(P <0.05)。综上可知,牦牛源屎肠球菌G2可能为一种肠道过路菌,能在短时间内提高肠道乳酸菌的总数,一定程度上具有改善肠道形态和促进肠道健康的作用。     

甘草药渣对生长肥育猪生长性能、胴体性状和肉品质的影响

本试验旨在研究甘草药渣对生长肥育猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响。选取240头体重80 kg左右健康的三元杂交猪,按等性别比例随机分成4组,每组3个重复,每个重复20头。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣,试验期为7周。结果表明:1%甘草药渣组的平均日增重最高,与对照组相比差异显著(P<0.05);与对照组相比,1%、2%、4%甘草药渣组的平均日采食量分别提高了8.04%(P>0.05)、11.54%(P<0.05)、13.28%(P<0.05);与其他3组相比,1%甘草药渣组的料重比显著降低(P<0.05)。2%和4%甘草药渣组的屠宰率显著高于对照组(P<0.05),1%和2%甘草药渣组的眼肌面积显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣对肌肉常规营养成分含量、背膘厚以及大理石纹评分、pH24 h、熟肉率、滴水损失和剪切力均没有产生显著影响(P>0.05)。生长肥育猪肌肉中共检测到17种氨基酸,与对照组相比,饲粮中添加1%、2%、4%的甘草药渣对生长育肥猪肌肉中甘氨酸、半胱氨酸、脯氨酸的含量没有产生显著影响(P>0.05); 1%甘草药渣组肌肉中必需氨基酸和氨基酸的总量均为最高,显著高于4%甘草药渣组(P<0.05),但与对照组没有显著差异(P>0.05)。与对照组相比,饲粮中添加4%的甘草药渣显著降低了肌肉中花生酸的含量(P<0.05),饲粮中添加1%的甘草药渣显著提高了肌肉中不饱和脂肪酸的含量(P<0.05)。由此可知,饲粮中添加1%的甘草药渣可提高生长育肥猪的生长性能,增加眼肌面积和肌肉中不饱和脂肪酸的含量,从而改善肉质,因此推荐生长育肥猪饲粮中甘草药渣的添加量为1%。     

群体感应分子——法尼醇与白色念珠菌的相互作用

群体感应最早在细菌中发现,近年来也陆续发现存在于真菌中。群体感应中的关键信号分子被称为群体感应分子,是由微生物自身所分泌、感知、响应并作用于其自身,在引起反应的浓度时对其自身没有毒性的一类物质。法尼醇是白色念珠菌的群体感应分子,影响白色念珠菌的耐药性、菌丝形成、黏附力和凋亡;影响白色念珠菌宿主机体的免疫及宿主细胞的凋亡。此外,白色念珠菌对法尼醇具有高于其他真菌的耐受性,但这种机制尚不明确。目前对群体感应分子法尼醇的作用机制缺乏了解,本文就群体感应分子法尼醇与白色念珠菌之间的相互作用展开综述。     

副猪嗜血杆菌及巴氏杆菌双重荧光定量PCR检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌(Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pm)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于Hps的Omp P2基因,Pm的PlpE基因设计两对特异性引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种同时检测Hps及Pm的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性地检测Hps和Pm,其对重组质粒标准品的最低检测浓度分别为5.60×10^2拷贝/μL、7.58×10^2拷贝/μL。双重与单一荧光定量PCR最低检测限相同,且均是常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于2.5%。临床应用结果显示:该方法对阳性样品的检出率为53.57%,明显优于常规PCR和细菌分离鉴定。该方法能够用于两种疾病的同时检测和快速排查疾病。为两种疾病的防治提供有效检测工具。     

日粮中添加禾王草对泌乳奶牛血液生化指标和激素水平的影响

本文研究了日粮中添加禾王草（Pennisetum giganteum）干草或青贮对泌乳奶牛血液生化指标和激素水平的影响。将45头产奶量、泌乳天数和胎次等相近的荷斯坦奶牛随机分为3组。对照组日粮粗饲料由羊草、苜蓿干草和全株玉米青贮组成,试验Ⅰ组粗饲料中禾王草青贮代替40%全株玉米青贮,试验Ⅱ组粗饲料中禾王草干草代替全部羊草和33%苜蓿干草,3组日粮营养水平相近,预饲期10 d,正试期60 d。结果表明：与对照组相比,试验Ⅰ组、Ⅱ组对白蛋白、总蛋白、尿素氮、胆固醇、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、β-羟丁酸和非酯化脂肪酸含量影响不显著;试验Ⅱ组生长激素和皮质醇含量略高,但差异不显著,各组间胰岛素含量差异不显著。综上所述,用禾王草干草代替部分苜蓿干草或用禾王草青贮代替适量全株玉米青贮饲喂奶牛安全可靠。