瘤胃源酵母的分离筛选及对不同底物发酵能力影响

本实验旨在分离筛选瘤胃源酵母,研究其对不同饲料底物的发酵特性。实验以山羊及奶牛瘤胃液为菌源,利用酵母选择性培养基,通过分离筛选、生长曲线测定和26S rDNA鉴定,获得1株生长速度较快的Meyerozyma属酵母菌株。在此基础上,采用体外发酵技术,分别以羊草与精料混合物、马铃薯淀粉和玉米淀粉为底物,以奶牛瘤胃液为接种物,研究该酵母菌株对瘤胃微生物体外发酵参数的影响。结果表明,在以羊草和精料混合物为底物时,添加瘤胃源酵母显著降低了发酵液pH和乳酸浓度(P<0.001),显著提高了丙酸浓度和干物质消失率(P<0.05);以玉米淀粉为底物时,添加该酵母菌显著降低了发酵液pH和乳酸浓度(P<0.001);以马铃薯淀粉为底物时,显著降低了pH(P<0.05),提高了丙酸浓度(P<0.05);但在上述3种底物条件下,添加酵母菌对发酵液中总产气量、氨态氮、乙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度无显著影响(P>0.05)。采用Real-time PCR测定结果表明,添加该酵母菌可显著提高以羊草和马铃薯淀粉为底物时发酵液中总菌16S rDNA的挎贝数(P<0.05)。结果说明,本研究分离获取的瘤胃源酵母可提高瘤胃微生物对羊草精料混合物的降解能力,降低羊草精料混合物组和玉米淀粉组发酵液中乳酸浓度,提示该菌株可能具有提高日粮消化利用效率、促进丙酸生成和瘤胃细菌生长的作用。     

瘤胃源酵母的分离筛选及其在不同精粗比饲粮中对瘤胃体外发酵的影响

本试验旨在分离筛选瘤胃源酵母菌添加至不同精粗比饲粮中,研究酵母菌对反刍动物瘤胃体外发酵的影响,为研制出防治亚急性瘤胃酸中毒(SARA)的微生态制剂提供菌株。抽取4头荷斯坦公牛和4只肉羊瘤胃液,使用麦芽汁琼脂培养基,通过分离筛选,测定乳酸利用率及生长曲线,18S rRNA鉴定,最终获得1株乳酸利用率较高、生长速率较快的酵母菌,即褶皱假丝酵母菌(Candida rugosa),命名为N09号酵母。采用体外模拟瘤胃发酵技术,试验饲粮精粗比分别为5:5、6:4、7:3,测定在不同精粗比饲粮中添加活菌数为3×10~8CFU/mL的该酵母菌对瘤胃主要发酵参数的影响。结果表明:随着日粮精粗比的提高,产气量呈降低趋势,干物质降解率和微生物蛋白浓度呈升高趋势;在9、12、28、36 h时,精粗比为6:4和7:3组pH显著高于5:5组;3组发酵液氨态氮浓度差异不显著;总挥发性脂肪酸、乙酸、丙酸和丁酸浓度随时间延长呈上升趋势,乙酸/丙酸呈下降趋势。     

奶牛饲料中酿酒酵母菌的分离鉴定及其发酵液的体外抑菌活性研究

本试验旨在分离鉴定甘肃地区奶牛场饲料中的酿酒酵母菌,进而研究酿酒酵母菌发酵液的体外抑菌活性。通过YPD固体培养基对采集的5份饲草和5份饲料样品中的酵母菌进行分离,分别进行生化鉴定和26SrDNA测序鉴定,进而检测酿酒酵母发酵液的体外抑菌活性。结果表明,从样品中分离出4种共12株酵母菌,分别为3株酿酒酵母菌(Y1、Y7和Y11)、4株汉逊德巴利酵母菌、3株浅黄隐球酵母菌和2株戴尔有孢圆酵母菌;3株酿酒酵母菌的发酵液对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的抑菌活性存在差异,其中酵母菌Y7和Y11的发酵液对3种病原菌均具有抑菌活性,而Y1的发酵液只对大肠杆菌具有抑制作用。本试验为进一步筛选性能优异的酿酒酵母菌用于微生态制剂研发奠定了基础。     

高效淀粉降解酵母菌的分离纯化及生物学特性研究

研究旨在从新疆库车馕面团中分离筛选能够高效降解淀粉的酵母菌并对其生理生化特性进行研究。试验利用不同的培养基,从新疆库车县不同馕房采集的馕面团中分离酵母菌,测定酵母菌总数,并对具有降解淀粉功能的菌株进行淀粉降解试验、形态学观察、生理生化及分子鉴定。结果分离得到31株酵母菌,其中8株菌株具有淀粉降解能力,通过进一步筛选获得2株高效降解淀粉的功能菌株Y2-2和Y3-1,降解率分别为81.07%和88.12%。经生理生化试验和26S rDNA D1/D2区域序列鉴定,这2株菌属于酿酒酵母,是该样品的特殊酵母品系,试验将为以淀粉做原料的工业生产和高蛋白质性新饲料添加剂的开发提供优质菌种。     

酸化剂对产黄曲霉毒素菌株的体外抑制试验

为探究复合酸化剂对产黄曲霉毒素菌株的抑菌作用,试验以发霉饲料中分离的1株产黄曲霉毒素菌株为指示菌,用复合酸化剂对指示菌进行体外抑制试验。结果表明酸度环境是黄曲霉生长的影响因素。酸的浓度越高,对黄曲霉生长的抑制效果越明显。在相同的p H环境,复合有机酸比无机酸抑制效果更好。其机制与有机酸抑制肠道病原菌的机制相似。     

肉鸭消化道酵母益生菌的分离与鉴定

为获得可用作肉鸭专用饲用酵母益生菌菌株,试验分别收集4个不同地域肉鸭消化道6个部位的内容物,利用麦芽汁琼脂培养基分离纯化酵母菌株,通过26S r DNA D1/D2区域基因序列同源性分析、形态学和生理生化验证等方法,确定酵母菌的种属。结果表明:从肉鸭消化道6个部位共分离出35株酵母菌,其中有7株为酿酒酵母菌,且在各个肠段都能分离出酵母菌。本研究分离的7株酿酒酵母菌可作为肉鸭专用饲用酵母益生菌的备选菌株。     

益生性酵母菌的筛选与鉴定

采用YPD平板从青海牦牛瘤胃和西藏青稞酒糟中筛选酵母菌,并对其进行形态学、分子生物学特性、生理生化特性和益生特性鉴定。试验结果表明:从青海牦牛瘤胃中筛选到马克斯克鲁维酵母菌3株,从西藏青稞酒糟中筛选到酿酒酵母菌4株,毕赤酵母菌2株,其中毕赤酵母菌JZ10起酵时间短,环境适应性强,有广泛的药物敏感性且对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有强抑制作用,具有良好的生长特性和益生特性,为后续酵母菌作为饲料添加剂提供一定的参考依据。     

西农萨能奶山羊瘤胃产蛋白酶酵母菌的筛选研究

试验旨在从西农萨能奶山羊瘤胃液中分离出产蛋白酶的酵母菌株,并对其产酶能力进行测定。以蛋白酶的活性进行筛选,得到高产蛋白酶酵母菌,对其产酶条件进行优化。经形态学观察及26S rDNA序列分析鉴定出5株产蛋白酶酵母菌,分别对各菌株产酶条件进行优化,在最佳产酶条件下,菌株库德毕赤酵母Y1(时间48 h、接菌量3%、温度30℃、pH值9)产酶活力达229.89 U/mL,东方伊萨酵母Y5(时间48 h、接菌量4%、温度37℃、pH值9)产酶活力达212.63 U/mL,马克斯克鲁维酵母Y16(时间48 h、接菌量3%、温度37℃、pH值9)产酶活力达208.44 U/mL,近平滑假丝酵母Y20(时间48 h、接菌量4%、温度37℃、pH值9)产酶活力达211.74 U/mL,单孢酿酒酵母Y21(时间48 h、接菌量4%、温度30℃、pH值9)产酶活力达209.96 U/mL。同时对五株酵母菌产水解酶的效果进行了探究,发现库德毕赤酵母Y1、马克斯克鲁维酵母Y16、单孢酿酒酵母Y21具有较高的植酸酶活性,达到14.38、15.34、15.63 U/mL;五株菌株均表现出较高的果胶酶活性,其中单孢酿酒酵母Y21显著高于其他菌株(P0.05),达到15.18 U/mL;五株菌株均表现出较高的纤维素酶活性,均超过180 U/mL,其中近平滑假丝酵母Y20显著高于其他菌株(P0.05),达到199.08 U/mL。试验成功分离出5株产蛋白酶菌。库德毕赤酵母Y1、马克斯克鲁维酵母Y16、单孢酿酒酵母Y21具有较高的植酸酶活性。五株菌株均表现出较高的果胶酶活性、纤维素酶活性。     

大蒜油对体外瘤胃发酵、甲烷生成和微生物区系的影响

本试验旨在通过体外培养法研究大蒜油和脱臭大蒜油对瘤胃发酵、甲烷生成和微生物区系的影响.在体外培养过程中用压力读取式法(RPT系统)测定产气量,利用气相色谱仪测定甲烷产量.培养24 h后,测定挥发性脂肪酸、pH、氨态氮浓度,并用实时荧光定量PCR测定瘤胃微生物区系.研究发现,与对照组相比,添加大蒜油极显著降低甲烷产量(P<0.01),显著降低乙酸摩尔百分比和氨态氮浓度(P<0.05),显著提高丙酸摩尔百分比(P<0.05),对产气量和总挥发性脂肪酸含量也有显著地抑制作用(P<0.05),但抑制程度不如大蒜油对甲烷产量的抑制程度.添加脱臭大蒜油对甲烷产生也有一定作用,但效果不显著(P>0.05).添加大蒜油和脱臭大蒜油后甲烷菌和原虫含量极显著降低(P<0.01),且大蒜油的抑制作用强于脱臭大蒜油(P<0.01).试验结果表明.适宜浓度的大蒜油可以改变瘤胃发酵类型,增加丙酸摩尔百分比,显著抑制甲烷生成而不影响消化,这种改变与瘤胃微生物区系的变化密切相关;此外,大蒜油的作用效果明显强于脱臭大蒜油.     

不同酿酒酵母体外模拟胃肠道内环境适应性研究

本研究旨在考察不同酿酒酵母菌株在体外模拟胃肠道内环境的适应性,为饲用酿酒酵母的科学使用提供理论依据。试验选择4株酿酒酵母菌株Sc1、Sc2、Sc3、Sc4分别开展:(1)37℃生长试验;(2)酸性酵母膏胨葡萄糖(YPD)肉汤中适应性生长试验;(3)人工胃液耐受性试验;(4)人工肠液耐受性试验。结果显示:Sc2在37℃具有较好的生长适应性,Sc4能够达到最大活菌数;pH3.0和pH4.0的YPD肉汤中4株酿酒酵母都能正常增殖,酿酒酵母Sc2、Sc3、Sc4酸耐受性优于Sc1;各菌株的商品化活性干酵母在人工胃液和人工肠液中2h存活率均高于50%,4h存活率高于45%,Sc4在模拟人工胃液中的耐受性最好,Sc3在模拟人工肠液中的耐受性最好。综上所述,不同酿酒酵母在体外模拟胃肠道内环境的适应性不同,酿酒酵母Sc2、Sc3、Sc4比酿酒酵母Sc1具有更好的胃肠道环境耐受性。     

大熊猫源双歧杆菌分离株的培养特性及药敏试验

双歧杆菌的培养特性和药敏试验是研究双歧杆菌微生态制剂的基础。从大熊猫新鲜粪便中分离的两株双歧杆菌进行细菌培养、药敏试验及耐温驯化等研究发现,改良肉汤培养基是双歧杆菌大熊猫分离株体外增殖理想的培养基;2个双歧杆菌大熊猫分离株均对红霉素、氯霉素等敏感,对青霉素等产生较高的耐药性;在较高温度下双歧杆菌大熊猫分离株能迅速地增殖,代谢能力大为提高,并与其他乳酸菌协同发酵,抑制致病菌的生长。双歧杆菌大熊猫分离株在体外生长良好,不是广谱的耐药菌株。     

反刍动物饲用高产蛋白酵母菌株的分离和筛选

青贮饲料和酒糟饲料富含酵母菌,从中分离优化筛选出高产蛋白菌株可作为反刍动物饲用酵母菌。作者通过正交试验,对分离菌株进行培养条件的优化,从中筛选出1株高产蛋白菌株为酿酒酵母菌（saccharomyces cerevisiae）,在温度30℃、初始pH为5、葡萄糖浓度2%、大豆蛋白胨浓度1%、麦芽汁粉0.3%、酵母膏0.3%、接菌量3%,转速180 r/min时,生物产量达到最高,细胞蛋白达到60.54 mg N/dl,菌体细胞达到1.7×10⁹个/ml。     

肉鸭消化道酵母益生菌热胁迫耐受性及其机理研究

从肉鸭消化道内分离筛选出的5株酿酒酵母益生菌中,筛选高耐热性的菌株,并探究酵母菌胞内热休克蛋白表达与环境温度的相关性。通过热应激处理比较不同菌株的耐热性,然后对酵母细胞破壁,释放胞内蛋白,再利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)技术,分析不同菌株的热应激蛋白表达特性。结果显示,5个酿酒酵母菌株中有4株在常态时即存在热休克蛋白70家族和90家族热激蛋白的少量表达。3号酵母菌株在45℃和48℃相对于其他菌株而言耐受性更佳,其热休克蛋白70家族和90家族表达水平也更高。本试验还显示,冻融、超声波、高压均质三种不同破壁方法相比较,高压均质法效果最好。最佳工艺条件为:均质压力140 MPa,循环3次,原菌液稀释102倍,此时胞壁破壁率可达94.54%。可见,肉鸭消化道酵母菌株的耐热性存在差异,不同菌株的耐热性与热休克蛋白70家族和90家族的表达密切相关。试验菌株中3号菌株的热应激耐受性最佳,可以作为后续肉鸭专用饲用酵母益生菌的备选菌株。     

鸽源性大肠杆菌的分离鉴定及茶多酚对其体外抑菌效果的研究

【目的】确定广州市某规模化鸽场腹泻病例的病原菌及探讨茶多酚对该病原菌的体外抑菌效果。【方法】采集广州市某规模化鸽场腹泻病鸽的粪便,通过分离纯化、染色镜检、16S rRNA基因测序和构建系统进化树等方法对病原菌进行鉴定;采用药敏纸片法分析病原菌的耐药性;采用PCR技术检测病原菌携带的毒力基因;同时通过体外抑菌试验测定茶多酚对该病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)以及不同浓度(0(空白对照)、125、250、500和1 000 μg/mL)茶多酚对该病原菌的生长、运动和毒力基因表达的影响,综合评定茶多酚对该病原菌的体外抑菌效果。【结果】从病料中分离出1株致病菌株,其生物学特性与大肠杆菌基本一致,命名为GG20210604;经16S rRNA基因测序和系统进化树进一步证实,该菌株为大肠杆菌;经检测,GG20210604对环丙沙星和氨苄西林耐药,并携带4种毒力基因:fliC、fimH、iroN和hlyF;体外抑菌试验结果显示,茶多酚对GG20210604的MIC和MBC均为4 000 μg/mL;与空白对照组相比,当茶多酚浓度为250、500和1 000 μg/mL时,GG20210604的生长和运动均被显著抑制(P＜0.05);250和500 μg/mL茶多酚均显著降低GG20210604的fliC、iroN和hlyF基因的表达(P＜0.05),250 mg/mL茶多酚显著降低fimH基因的表达(P＜0.05)。【结论】本研究分离得到1株鸽源性大肠杆菌,该菌株对环丙沙星和氨苄西林耐药并携带fliC、fimH、iroN和hlyF 4种毒力基因。茶多酚对该菌株具有良好的抑菌效果,可以显著抑制其生长、运动和毒力基因的表达。本研究为预防和缓解鸽因大肠杆菌引起的腹泻提供新的思路,并且为茶多酚作为植物性抑菌剂在养鸽生产中的应用提供理论依据。     

一株猪肺炎支原体HN0613株的分离鉴定

采集疑似猪支原体肺炎病理变化的肺脏,经Friis液体、固体培养基培养、纯化,PCR、测序分析、生化鉴定、生长抑制、代谢抑制和致病性试验证实分离获得一株猪肺炎支原体菌株,命名为HN0613.该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养达108 CCU/mL;菌株有较强的毒力,可作为疫苗候选株进一步研究.该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎灭活疫苗奠定了基础.     

2008-2009年反刍动物营养研究进展 Ⅱ.外源添加剂对瘤胃发酵的调控

作者综述了2009年在ADSA-ASAS大会和CNKI、PubMed等数据库中外源添加剂(离子载体、酶制剂、植物提取物、饲用微生物)对瘤胃发酵调控的相关文献39篇。离子载体如莫能菌素主要通过促进瘤胃丙酸的产生,抑制生物氢化菌,促进长链脂肪酸在瘤胃内发生不完全氢化等瘤胃调控作用,从而缓解反刍动物的能量负平衡,减少甲烷排放,降低乳中脂肪含量。酶制剂(包括纤溶酶和淀粉酶等)在饲喂前加入日粮中能够免受瘤胃蛋白酶的降解,并保持酶活性,促进饲料的消化。植物提取物中皂角甙通过抑制原虫生长降低甲烷的排放,动物长期采食富含单宁的植物可产生单宁耐受菌,并且单宁的植物提取物可影响瘤胃的生物氢化作用,植物精油对瘤胃的调控作用包括减少淀粉和蛋白的降解,以及通过对某种瘤胃微生物的选择性作用抑制氨氮的降解。饲用微生物(主要有酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌等)能增加营养物质消化率,改变瘤胃发酵模式,增加瘤胃微生物菌群,但其益生效果与泌乳阶段、日粮类型、环境条件有关。     

产纤维素酶酵母菌的筛选及鉴定

研究旨在筛选出产纤维素酶较高的酵母菌,并对其生物学特性探讨。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高一株酵母菌,通过菌株形态学和分子生物学对该菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐酸性、耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果表明,所筛酵母菌Y3为酿酒酵母菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为3.27 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为2.22 U/ml,木聚糖酶酶活为4.21 U/ml,耐酸性、耐模拟胃液较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。试验筛选到酿酒酵母菌Y3是一株较高产纤维素酶菌株并具有良好的生物学特性,对于提高粮食加工副产物的利用率具有非常重要的现实意义。     

富含十八碳不饱和脂肪酸的植物油对体外瘤胃发酵和甲烷生成的影响

选取3种典型的植物油:菜籽油、豆油和亚麻油,利用体外培养系统进行体外发酵,研究植物油的类型和添加水平对瘤胃体外发酵和甲烷生成的影响。3种植物油分别添加底物干物质的3%、5%和7%,未添加植物油组为对照,共10个处理,每个处理设3个重复。结果表明,菜籽油对甲烷产量无显著影响(P>0.05),豆油7%添加水平显著抑制了甲烷生成,而亚麻油所有添加水平均显著降低了甲烷生成量(P<0.05)。在豆油和亚麻油处理组中,随着添加水平的提高,甲烷产量线性下降(P<0.01)。3种植物油均显著改变了瘤胃发酵模式,随着植物油中所含不饱和脂肪酸不饱和度的增加,乙酸和丁酸的摩尔比例显著降低,丙酸摩尔比例显著升高(P<0.05);植物油添加水平的提高显著降低了乙酸和丁酸摩尔比例,显著升高了丙酸摩尔比例(P<0.05),乙酸丙酸比例显著降低。本试验结果表明植物油降低甲烷的效果跟其来源和添加水平有关;随着植物油添加水平的提高和所含不饱和脂肪酸不饱和度的增加,甲烷生成量显著降低。     

反刍动物微生态制剂高活性菌种的筛选与比较

该研究的目的是对8株酵母菌和4株霉菌生物学活性进行比较研究,筛选出优良高活性菌株。方法：通过对8株酵母菌的生物量、粗蛋白含量、活菌数、发酵香味及4株霉菌生物量和产酶能力等指标的测定,筛选优良菌株作为试验基础菌种。结果表明,酿酒酵母BC和BD、产朊假丝酵母BY、热带假丝酵母BR和黑曲霉H3,以其优良的生产性能被选为反刍动物微生态制剂试验用菌种。     

体外法研究延胡索酸二钠对瘤胃微生物发酵活力及甲烷产量的影响

为探讨延胡索酸二钠对瘤胃甲烷产量及瘤胃微生物发酵活力的影响,本研究共设计了3个试验来阐明该问题。试验1采用体外批次培养,研究了不同日粮条件下(高牧草日粮、中等水平牧草的日粮和低牧草日粮)添加延胡索酸二钠(0,4和7mmol/L)对山羊瘤胃微生物发酵及甲烷产量的影响。结果表明,较对照相比,添加延胡索酸二钠显著提高了累积产气量、pH值和TVFA产量(P<0.05),降低了甲烷产量(P<0.05),其中高牧草日粮组下降幅度最大。试验2探讨了延胡索酸二钠对黄化瘤胃球菌发酵粗饲料活力的影响。结果表明,与对照组相比;添加延胡索酸二钠显著提高了黄化瘤胃球菌数量及其对黑麦草的降解率(P<0.05);试验3探讨了延胡索酸二钠对瘤胃真菌发酵粗饲料活力的影响,结果显示,延胡索酸二钠显著降低了厌氧真菌发酵的总产气量、干物质消失率及羧甲基纤维素酶酶活(P<0.05)。结果说明,延胡索酸二钠在降低甲烷产量方面与发酵底物的天然特性有关,其中对高牧草日粮的作用效应最为显著;延胡索酸二钠可提高瘤胃混合微生物与瘤胃纤维降解菌发酵粗饲料的能力,但对瘤胃真菌的发酵活力具有抑制效应。