鹅源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究

2020年6月,潍坊临朐某养鹅场饲养的2月龄朗德鹅不断出现发病和死亡,剖检可见内脏器官、脂肪、肌肉出血。为确定发病原因,进行病原的分离鉴定。结果显示:从发病鹅内脏器官中分离到一株革兰氏阳性球菌,该分离菌对头孢拉定、米诺环素高敏;显微镜检、生化试验、微生物质谱仪检测、16 S rRNA基因测序和同源性分析确定该分离菌为凝固酶阴性的缓慢葡萄球菌。致病性试验表明,该分离菌可以引起雏鹅发病死亡,发病率为100%,死亡率为89%,死亡雏鹅以肝脏肿大出血、肺脏出血等内脏器官出血为主要病理变化,与自然发病一致。研究首次在鹅上分离出缓慢葡萄球菌,为鹅的缓慢葡萄球菌病的防治和合理用药提供了依据。     

一株牛源铜绿假单胞菌的分离鉴定

为了确诊秦皇岛市昌黎县某肉牛养殖场肉牛肺炎的病因,试验对肉牛肺脏中的病原进行分离培养,并对纯化培养的分离菌采取革兰氏染色、细菌生化鉴定及16S rDNA鉴定,对分离菌进行药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明:从病死牛严重病变的肺脏实质部分离到一株优势菌,为革兰氏阴性杆菌。生化试验结果表明,该优势菌与铜绿假单胞菌符合率高达99.9%,将该分离菌命名为PaQHD-1。16S rDNA鉴定结果表明,PaQHD-1与铜绿假单胞菌参考菌株处于同一分支,并且同源性在99%以上。PaQHD-1仅对环丙沙星表现敏感,对其余的14种抗生素均表现耐药;分离菌可致小鼠死亡,小鼠死亡率100%(5/5)。说明本次致牛肺炎的病原为铜绿假单胞菌,且该分离菌具有一定的致病性及耐药性。     

引起幼貂大量死亡的肺炎克雷伯菌的分离和鉴定

采用西蒙式枸橼酸盐琼脂培养基从山东威海地区肺出血死亡幼貂的肺脏和肝脏中分离到1株细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质、16S rRNA测序鉴定,并对该分离菌进行了药敏试验和人工感染试验。结果显示,该菌16S rRNA序列与GeneBank登录号为CP006648的肺炎克雷伯菌16S rRNA序列同源性为95%,分离菌具有高度的耐药性,对小鼠具有较强致病作用,并可复制出与水貂类似的病理变化,由此推断肺炎克雷伯菌是导致幼貂大量死亡的主要致病菌。     

羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本研究通过病死羊的肺脏中进行细菌分离、形态学观察、生化试验、致病性试验、药敏试验和16S rRNA扩增。结果从肺中分离到1株具有致病性的革兰氏阴性短杆菌。生化试验鉴定结果符合肺炎克雷伯氏菌的特征。分离株对头孢噻肟、阿米卡星、头孢曲松和链霉敏感外,对强力霉素等12药物具有耐药性。16S rRNA测序结果分析显示分离株与肺炎克雷伯氏菌的核苷酸同源性为97.1%~99.0%,在核苷酸进化树上与肺炎克雷伯氏菌属于同一分支。结果表明本研究从病死羊的肺脏中分离到1株肺炎克雷伯氏菌。     

羊源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了调查内蒙古通辽市某羊场发病羊死亡的原因,对疑似致病菌进行分离、鉴定及部分生物学特性研究。对病死羊进行剖检,无菌条件下采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏等组织脏器进行细菌分离培养;对分离菌进行小鼠致病性试验、细菌生化检测、16S rDNA基因扩增及同源性比对分析和药物纸片扩散法敏感性试验。结果显示,分离菌株符合肺炎克雷伯菌生化特性;16S rDNA序列与GenBank中已登录的肺炎克雷伯杆菌序列同源性为99.59%;小鼠致病性试验结果表明分离株有较强的致死性;分离株携带多种毒力基因致病性较强。药敏试验结果表明分离株对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、多西环素等药物高度敏感,对复方新诺明、卡那霉素等中度敏感,对庆大霉素、头孢哌酮、头孢氨苄等耐药。结果表明,分离株为肺炎克雷伯菌,是该羊场发病羊死亡的致病菌。     

水禽源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及致病性观察

对从湖北和广西两地的病鸭和病鹅体内分离到7株细菌,进行了细菌分离培养、鉴定及动物试验,结果 7株分离细菌为肺炎克雷伯菌且对小鼠具有致病性。表明鸭和鹅可以携带人兽共患病病菌,人们应该重视对该菌的防控。     

貉源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药敏试验

为确定河北昌黎地区某养殖场貉呼吸道疾病引起死亡的病因,本研究从送检的貉病料肺脏中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,并对分离株进行形态学观察、16S rRNA序列测序及全自动细菌生化鉴定仪鉴定,在此基础上完成了分离株的分型、人工感染小鼠试验及药敏试验等。结果显示,该分离株为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,并将其命名为CLKp18;该分离株的16S rRNA基因序列与GenBank中登录的多株肺炎克雷伯菌参考株同源性均高达99%。Vitek全自动细菌鉴定仪结果表明,该菌株与肺炎克雷伯菌鉴定标准相似度为99%。人工感染小鼠试验结果显示,试验组小鼠在攻毒后6 h开始出现临床症状。无菌取出死亡小鼠的肺脏、肝脏、脾脏及肾脏,划线涂板,均可分离到该菌,表明该分离株感染小鼠后,能侵入到小鼠体内多个组织器官,引起不同程度的病变,尤以肝脏和肺脏病变较为明显,对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为2.17×10~7 CFU。药敏试验结果表明,该菌对单环内酰胺类、氯霉素类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类及大部分头孢类耐药,但对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶和亚胺培南敏感。本研究结果确定了引起本次貉呼吸道症状疾病的致病菌为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,且该分离株有较强的致病性和多重耐药性。本研究为临床治疗由该菌引起的貉肺炎提供了参考依据。     

貉源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药敏试验

为确定河北昌黎地区某养殖场貉呼吸道疾病引起死亡的病因,本研究从送检的貉病料肺脏中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,并对分离株进行形态学观察、16S rRNA序列测序及全自动细菌生化鉴定仪鉴定,在此基础上完成了分离株的分型、人工感染小鼠试验及药敏试验等。结果显示,该分离株为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,并将其命名为CLKp18;该分离株的16S rRNA基因序列与GenBank中登录的多株肺炎克雷伯菌参考株同源性均高达99%。Vitek全自动细菌鉴定仪结果表明,该菌株与肺炎克雷伯菌鉴定标准相似度为99%。人工感染小鼠试验结果显示,试验组小鼠在攻毒后6 h开始出现临床症状。无菌取出死亡小鼠的肺脏、肝脏、脾脏及肾脏,划线涂板,均可分离到该菌,表明该分离株感染小鼠后,能侵入到小鼠体内多个组织器官,引起不同程度的病变,尤以肝脏和肺脏病变较为明显,对小鼠的半数致死量(LD_(50))为2.17×10~7 CFU。药敏试验结果表明,该菌对单环内酰胺类、氯霉素类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类及大部分头孢类耐药,但对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶和亚胺培南敏感。本研究结果确定了引起本次貉呼吸道症状疾病的致病菌为非K1/K2型肺炎克雷伯菌,且该分离株有较强的致病性和多重耐药性。本研究为临床治疗由该菌引起的貉肺炎提供了参考依据。     

规模化鹅场致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测

为有效防治鹅大肠杆菌病并分析其耐药性,无菌采集疑似大肠杆菌感染鹅的肝脏、脾脏等组织,进行细菌分离培养、生化鉴定、PCR鉴定、16S rRNA序列比对。结果表明,所分离的细菌为大肠杆菌。通过血清凝集试验,鉴定其主要血清型为O88、O171、O59、O27。应用小鼠对4种血清型代表菌株进行致病性试验,结果分离的菌株致小鼠发病率为92.5%,死亡率为87.5%,表现腹腔有纤维素性渗出物,肝淤血肿大且表面有纤维素性伪膜等病理变化。对代表菌株采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,结果显示,分离株对甲氧苄啶、磺胺异恶唑敏感,对黏杆菌素、美罗塔南等11种临床常用药物高度耐药。研究表明,从辽宁省黑山县分离的鹅大肠杆菌具有较强的致病性和较高的耐药性。     

一株鹅源鸭疫里默杆菌的分离及PCR鉴定

上海某鹅场发生雏鹅急性死亡,患病鹅的临诊症状、病理变化疑似鸭疫里默杆菌感染。通过细菌分离培养获得一株细菌纯培养物,使用PCR方法以及测序鉴定该菌株为鹅源鸭疫里默杆菌。     

东非黑白疣猴肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

我园新引进的东非黑白疣猴群体中突然死亡2只,从实质脏器组织(心、肝、脾、肺、肾)、胸腔积液、心血样本中均分离得到细菌,对分离到的菌株纯化后进行形态特征观察、生化试验、药敏试验以及小鼠致病性试验,并进行16SrDNA序列测定分析。结果表明该菌株为肺炎克雷伯氏菌,致病性试验显示其对小鼠具有较强致病性,死亡小鼠具有与该死亡黑白疣猴一致的肺部病理剖解症状,并从死亡小鼠体内分离到一致的菌株,表明引起此次黑白疣猴死亡的病原菌为肺炎克雷伯氏菌。     

6株奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌的分离、鉴定及生物学特性

为研究陕西关中地区奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌的流行情况,从某规模化奶牛场无菌采集乳样53份,进行细菌分离鉴定。通过细菌形态学观察、生化试验以及16S rRNA序列分析,共分离出6株肺炎克雷伯菌,并对其进行药物敏感性、生物被膜形成、random amplified polymorphic DNA(RAPD)分型以及小鼠致病性的试验。生化特性结果表明6株肺炎克雷伯菌对各种糖的分解能力无明显差异。药敏试验结果表明,6株菌均对恩诺沙星、阿米卡星、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、四环素、美罗培南、头孢曲松和头孢他啶敏感,对青霉素和氨苄西林耐药。生物被膜表型检测结果表明,6株菌均可产生生物被膜,其中菌株KP4为中等黏附,其他5株为弱黏附,生物被膜成分中均含有胞外多糖,不含卷曲菌毛和纤维素。RAPD分型结果表明,分离的6株菌株共分3个基因型,其中C型占50.00%(3/6),B型占33.33%(2/6),A型占16.67%(1/6)。小鼠致病性结果表明,分离株对小鼠均具有较强的致病性,被感染小鼠的肝脏、脾脏和肺脏均有不同程度的出血。本试验为防控陕西省内肺炎克雷伯菌引起的奶牛乳房炎提供依据。     

猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

为确定四川某猪场导致猪细菌性感染死亡的病原,本研究从送检病死猪肺脏样品中分离得到一株细菌,对该菌株进行培养特性观察、生化试验、动物致病性试验、药敏试验、16S r RNA基因的扩增及测序鉴定。结果显示其16S r RNA基因序列与肺炎克雷伯菌(Kpn)序列同源性达99%,表明该菌株为Kpn肺炎亚种;致病性试验结果显示其对小鼠具有强致病性;并且在血平板上出现α溶血现象;药敏试验结果显示分离菌株表现出多重耐药性,毒力较强,并且在培养特性上发生一定的改变。本实验为进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。     

大肠杆菌与肠道沙门菌混合感染朗德鹅的诊断分析

为确诊某朗德鹅养殖场大批雏鹅出现腹泻、急性死亡的病因,采集患病雏鹅心脏、肝脏、肾脏等病料接种胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)、麦康凯和伊红美蓝等细菌培养基,进行细菌分离培养、革兰染色、16S rRNA测序和系统发育分析,并对分离菌进行小鼠致病性试验和抗菌药物药敏分析。结果显示:鉴定得到1株肠道沙门菌(Salmonella enterica)和2株大肠杆菌(Escherichia coli);3株分离菌对小鼠均具有较强的致病力;药物敏感性试验显示分离株对呋喃唑酮、复方新诺明、多黏菌素B敏感,对诺氟沙星、氨苄西林、环丙沙星等抗菌药物具有多重耐药性。诊断分析结果为朗德鹅养殖场雏鹅大肠杆菌病和沙门菌病诊断、治疗和预防提供了依据。     

两株水貂源肺炎克雷伯菌对小鼠的致病性研究

为确定临床中收集到的两株水貂源肺炎克雷伯菌Kpn-HY和Kpn-WH对小鼠的致病性,用SPF级小鼠腹腔接种不同浓度的肺炎克雷伯菌菌液,接种后观察小鼠的发病情况,对病死小鼠进行病理剖检和病理组织学研究。结果表明:两株水貂源肺炎克雷伯菌半数致死量(LD50)分别为4.00×10~5cfu/m L和1.35×10~7cfu/m L;两菌株在致小鼠病理变化方面具有相似性,主要表现为肺脏严重性出血、损伤,大量炎性细胞浸润,肝脏、肾脏出血,且均引起败血症,但在致病程度方面存在明显差异。说明肺炎克雷伯菌Kpn-HY和Kpn-WH存在明显的致病性差异。     

水貂肝脏中克雷伯氏菌的鉴定

为了检验辽宁省某水貂场患呼吸系统疾病的散发病例是否由肺炎克雷伯氏菌引起,试验采用病理剖检、组织切片、无菌技术分离细菌、分子生物学鉴定等方法对其进行检验。结果表明:通过对患病水貂进行解剖,发现其肺脏有明显出血斑,并伴有坏死灶、钙化灶;组织切片显示,肺泡壁不清,肺脏组织有散在慢性炎性细胞、红细胞;通过无菌技术从肝脏中分离得到一株细菌,经分子生物学鉴定确定其为肺炎克雷伯氏菌。说明水貂所患疾病是由肺炎克雷伯氏菌感染引发的肺炎。     

扭角羚肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

本试验旨在报告四川省野生扭角羚自然生存过程中致病性细菌的检测及生物学特征。试验对发病死亡扭角羚病变组织进行细菌学检查及分离,对分别从肝脏、脾脏和肺脏分离得到的4株优势菌进行形态特征、生化特性和16SrDNA分子鉴定,判定为肺炎克雷伯氏菌。这4株菌对供试小白鼠均有致病性。测其LD50,分别为2.9×107、2.9×107、4.5×107和1.1×108 CFU/只。4株分离菌对供试的先锋霉素等敏感,对阿米卡星等中度敏感,对红霉素等耐药。推测这4株肺炎克雷伯氏菌是导致扭角羚死亡的主要病原菌。     

西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌血清型鉴定、致病性及耐药性检测

为了研究西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌血清型鉴定、致病性及耐药性等生物学特性,采集患有呼吸道疾病宠物犬的咽拭子、鼻拭子及痰液等病料组织127份,用细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定、PCR等方法进行肺炎克雷伯菌鉴定,采用人工感染小鼠试验、PCR法及K-B药敏纸片法分别检测其致病性、血清型及耐药性。结果显示,从采集的127份样品分离得到62株致病性肺炎克雷伯菌,分离的62株致病性肺炎克雷伯菌有4种血清型,以K5(37.1%)和K1(19.4%)血清型为主要流行的血清型;对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、强力霉素、大观霉素、磺胺二甲氧嘧啶8种药物耐药率在61.%以上,对其他药物的耐药率在9.7%～35.5%之间。研究结果可为西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌病的防控及合理用药提供参考依据。     

猪源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及致病性研究

某猪场发生一种高发病率、高死亡率的传染病。本研究从该场濒死猪只的心脏血液及肺脏中分离出1株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察及法国生物梅里埃API鉴定系统鉴定,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。药敏试验表明该菌对多种药物具耐药性,但对氟哌酸、红霉素和强力霉素等敏感;致病性试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,猪只腹腔注射可复制病例,表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。     

貂源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

本研究从疑似感染肺炎克雷伯菌(Kpn)的病死水貂病料中分离得到5株革兰氏阴性杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和分子生物学鉴定,确认分离得到的菌株为Kpn。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与已知的Kpn相应序列的同源性为100%;药敏试验显示分离株对头孢曲松和舒巴坦高度敏感。动物致病性试验显示该分离株对小鼠具有较强的致病性。