多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立

本文建立了一种能够同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的多重PCR方法（mPCR）。借助于Oligo6.0引物设计软件,设计了4对引物分别用于扩增PCV2ORF2基因353bp片段、PPVNS-1基因271bp片段、PRRSVMN基因美洲型434bp片段、PRVgB基因194bp片段。通过人为混合以上4种病毒进行特异性及敏感性试验,结果表明,该方法具有很好的特异性和敏感性。对猪瘟病毒、大肠杆菌和双蒸水的PCR扩增结果均为阴性;该mPCR方法对PPV的最低检测量为8.64×10-3μg,PRV的最低检测量为2.36×10-3μg,PRRSV的最低检测量为3.68×10-3μg,PCV2的最低检测量为2.90×10-4μg。该方法的建立对临床上PCV2、PPV、PRV、PRRSV的鉴别诊断以及以上这4种病毒的流行病学调查具有十分重要的意义。     

猪五种繁殖障碍性疫病病原体多重PCR的建立及初步应用

为了建立能够同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)的多重PCR,并用于猪场感染情况的动态监控以及临床诊断,根据GenBank中已发表的5种病毒的基因序列,针对CSFV的E2、PRRSV的Nsp2、PRV的gB、PCV2的ORF2和PPV的VP2基因,分别设计了特异性引物。在建立的单项PCR基础上,通过优化反应条件,建立了能同时检测5种病毒的多重PCR,并具有较高的灵敏性和良好的特异性。采用建立的多重PCR对127份疑似病猪的扁桃体活体组织进行检测,检出了5种病毒的存在,其中感染2种及以上病毒的样品比例为38.6%(49/127),表明该方法是一种快速、灵敏、高效的病原学检测手段。     

猪主要繁殖障碍疾病病原的多重实时定量PCR快速检测

本研究旨在建立多重Real-time PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV).根据GenBank数据库中PRRSV、PCV2、PRV、和PPV的核苷酸序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,检测系列稀释的纯化阳性质粒,建立检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的单项和多重Real-time PCR方法.灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单项和多重Real-time PCR检测,该方法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对4种病毒的最低检测量为＜101拷贝或1 TCID50,检测灵敏度比常规PCR高100倍.对40份临床样本进行检测,多重Real-time PCR检测结果和单项Real-time PCR检测结果完全一致.建立的同时检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的多重Real-time PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点.     

CSFV、PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及其应用

由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(Ec.oli)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。     

PMWS患病猪群中PCV2与CSFV、PPV、PRRSV混合感染的调查

应用套式PCR方法对采自辽宁、河北、河南、湖北、湖南、山东、浙江、福建和广西9个省份的733份临床发病猪肺脏和淋巴结样品进行了PCV2的检测,然后对鉴定为PCV2阳性的283份病料再分别进行PRRSV、PPV和CSFV的检测,以确定猪群中PCV2与CSFV、PRRSV和PPV双重感染情况,结果表明:CSFV、PRRSV和PPV阳性样品分别为74份、94份和46份,阳性率分别为26.1%、33.2%和16.3%。表明这些地区发病猪群中PCV2与这三种病毒的双重感染普遍存在,其中以PCV2和PRRSV的双重感染较为突出;但在河北和湖北两省,则以PCV2与CSFV的双重感染为主。     

多重PCR快速检测猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型方法的建立

根据GenBank上猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）的已知序列,利用Primer Premier 5.0及DNAstar软件对上述病毒基因保守区进行引物设计,选出扩增序列为PRV gB基因373 bp、PCV2 ORF2基因430 bp两对引物。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了PRV-PCV2两重PCR检测方法。敏感性及特异性试验结果显示,该mPCR对2种病毒的核酸检测可至1.47×10-6~1.62×10-6 ng,而对灭菌双蒸水、猪细小病毒（PPV）猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）多重PCR的扩增结果均为阴性,作为临床上猪伪狂犬病和猪圆环病毒2型感染的病原学快速诊断方法具有可行性。     

猪瘟病毒猪细小病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用

猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其敏感性可达到CSFV 10 TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50 CSFV 10TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50。同时具有较好的特异性,对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株及PRRSV B13株6个毒株均能扩增出相应的片段,而BVDV、BDV均未扩增出相应的片段。本方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。     

多重PCR对猪病毒性繁殖障碍疾病的调查分析

为了解猪群中病毒性繁殖障碍疾病的流行状况,用多重PCR诊断方法,对太原市附近14个养猪场和门诊病例共1068份样品进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）的检测,其平均感染率分别为：PRRSV 32%、CSFV 40%、PPV 20%、PRV 12%、PCV-2 27%。其中混合感染2种病毒的猪群为39%,感染2种病毒的猪为24%。用RT-PCR试剂盒对山西省11个地市66个猪场及121个散养户的1572份血样进行了PRRSV和CSFV的检测,结果PRRSV感染率为33%,CSFV感染率为46%。用间接血凝试验对61个县38个乡136个村179户的1593份血样进行了猪瘟免疫抗体的检测,平均合格率为43.9%,从而为防控此类疫病的发生,制定综合防制措施提供试验数据。     

2017-2020年浙江省猪主要病毒性传染病的流行病学调查与分析

为了解浙江省猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验对2017-2020年浙江省不同地区规模化猪场送检的血清和病料样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)4种疫病痛原和抗体检测.抗体检测结果显示:PRRSV、CSFV、PCV2、PRV...     

PRRSV、PCV2与CSFV多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立与初步应用

旨在建立一种能快速、灵敏、同时检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪瘟病毒(CSFV)3种病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。参照GenBank中登录的相关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增PRRSV ORF7基因、PCV2ORF2基因与CSFV 5′端保守序列的部分片段。将测序正确的3段基因片段分别克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,PCV2、PRRSV与CSFV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为84.6、86.7、89.3℃,溶解曲线特异,灵敏度分别可达181、202、177拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。本试验建立的PRRSV、PCV2与CSFV的荧光定量PCR检测方法实现了3种病毒的同时检测,能够对PRRSV、PCV2、CSFV混合感染的临床病料进行快速诊断。     

中国饲料工业协会第五届理事会顾问、会长、常务副会长、副会长、秘书长、副秘书长、常务理事、理事名单

顾问刘中一张德邻宋瑞祥聂振邦张子仪戎易王维四会长白美清国务院原副秘书长、第四届理事会会长常务副会长(8人,以姓氏笔划为序)刘永好新希望集团董事长、第四届理事会副会长刘汉元通威股份有限公司董事长、第四届理事会副会长陈丹广东恒兴集团股份有限公司董事长、第四届理事会副会长张延喜农业部原副部长、第四届理事会副会长吴明夏湖南正虹科技发展股份有限公司董事长、第四届理事会副会长陶一山唐人神集团股份有限公司董事长、第四届理事会副会长温鹏程广东温氏食品集团有限公司董事长、第四届理事会副会长谭竹洲原化学工业部副部长、第…     

The content of fresh material, DNA and RNA in different tissues of turkeys during growth. 2. Analysis of the myocardium, the liver, the lungs, the kidney, the pancreas, the spleen and the duodenum]

The highest DNA concentration so far recorded from organs of turkey chicken one day after hatching was the lung value of 8.61 +/- 0.20 mg/g of fresh matter, while the lowest level amounted to 1.92 +/- 0.11 mg/g and was linked to the myocardium. DNA concentrations in the spleen went up from 5.93 +/- 0.26 mg/g on the first day to 13.04 +/- 0.93 mg/g on the 224th day. The highest total amount of DNA on the 224th day was 314.6 +/- 30.23 mg/g in the liver. A high RNA concentration on the first day from hatching was 8.74 +/- 0.14 mg/g in the liver and the lowest 2.51 +/- 0.12 mg/g in the myocardium. DNA levels for the whole period under review (first through 224th days) rose by the following factors: 246.3 in the spleen, 87.4 in the pancreas, 76.6 in the liver, 60 in the duodenum, 40.5 in the kidneys, 18 in the lung, and 31.3 in the myocardium. Functional implications relating to DNA, RNA, and protein variations are discussed in some detail.     

Comparison of the Effect of the Aromatase Inhibitor, Anastrazole, to the Antioestrogen, Tamoxifen Citrate, on Canine Prostate and Semen

This study compared the efficiency of the aromatase inhibitor, anastrazole, with the antioestrogenic receptor blocker, tamoxifen, on normal (NRL) and hyperplastic prostate glands. Forty healthy dogs were classified as NRL (n = 18) or abnormal (ABN) with benign prostate hyperplasia (n = 22). The dogs were randomly assigned to one of the following six groups, treated for 60 days; oral placebo for normal (NRL-PLC; n = 6) and abnormal (ABN-PLC; n = 6), oral anastrazole 0.25–1 mg/day, for normal (NRL-ANZ, n = 6) and abnormal (ABN-ANZ, n = 8) and oral tamoxifen citrate 2.5–10 mg/day for normal (NRL-TMX; n = 6) and abnormal (ABN-TMX; n = 8) dogs. The dogs were evaluated before treatment and then monthly for 4 months. At the end of the treatment, the prostatic volume decreased by 28.5 ± 4.3%, 21.6 ± 6.3% and 0.7 ± 1.0% in the ABN-TMX, ABN-ANZ and ABN-PLC (p < 0.01), respectively. From then on, prostatic volume began to increase without reaching pre-treatment values at the end of the study. In the ABN animals, there were no differences for this parameter between ANZ and TMX treatment (p > 0.1), whereas in the NRL animals ANZ produced a less pronounced decrease (p < 0.05), libido, testicular consistency and scrotal diameter decreased during treatment in the TMX group (p > 0.05). These parameters and sperm volume, count, motility and morphological abnormalities remained unaltered throughout the study in the ANZ and PLC groups (p > 0.05). There were no haematological nor biochemical side effects. Anastrazole might offer a safe and effective alternative for the medical management of dogs with benign prostatic hyperplasia.     

猪肌浆中某些元素含量与肌肉和骨骼生长的关系——定远猪及其二元杂交猪肌浆中Ca、P、Mg、Mn、Zn的含量与肌肉生长和后肢发育之间的相关性比较

研究了定远猪及其杂交F1 代猪肌浆中Ca、P、Zn、Mn、Mg等元素含量与肌肉生长和后肢发育之间的相关性。结果表明 ,杂交使得猪肌浆中的Ca含量显著降低 (P <0 0 1 ) ,导致肌浆Ca、P比例改变并升高 ;肌浆Mg、Mn、Zn含量变化不明显。杂交F1 代猪肌浆中Ca、Zn与肌肉蛋白质含量间呈较高的正相关 ,r =0 84～ 0 91 ,(定远猪r =0 40 ) ,肌浆Ca、Zn水平可能是肌肉生长的指示剂。肌浆Mn、Zn含量与后躯及后肢骨骼发育状况间的关系尚未能肯定     

Effects of the paralysis tick, Ixodes holocyclus, on the electrocardiogram of the Spectacled Flying Fox, Pteropus conspicillatus

OBJECTIVE: To evaluate cardiac electrical function in the Spectacled Flying Fox (bat) infested with Ixodes holocyclus. DESIGN: Prospective clinical investigation of bats treated for naturally occurring tick toxicity. PROCEDURE: ECGs were performed on bats with tick toxicity (n = 33), bats that recovered slowly (n = 5) and normally (n = 5) following treatment for tick toxicity, and on normal bats with no history of tick toxicity (n = 9). RESULTS: Bats with tick toxicity had significantly prolonged corrected QT intervals, bradycardia and rhythm disturbances which included sinus bradydysrhythmia, atrial standstill, ventricular premature complexes, and idioventricular bradydysrhythmia. CONCLUSIONS: The QT prolongation observed on ECG traces of bats with tick toxicity reflected delayed ventricular repolarisation and predisposed to polymorphic ventricular tachycardia and sudden cardiac death in response to sympathetic stimulation. The inability to document ventricular tachycardia in bats shortly before death from tick toxicity may be explained by a lack of sympathetic responsiveness attributable to the unique parasympathetic innervation of the bat heart, or hypothermia-induced catecholamine receptor down-regulation. Bradycardia and rhythm disturbances may be attributable to hypothermia.