日本：成功培育出无免疫力猪

日本农业生物资源研究所研究小组成功培育出尢免疫力猪。这是世界首次人工培育成功无免疫机能的大型动物。研究小组提取猪胎儿体细胞,导入无免疫机能基因,利用体细胞克隆技术,克隆出40头遗传基因相同的猪仔,其中14头没有免疫机能所必须的胸腺。     

体细胞克隆技术在乌金猪遗传资源保护上的应用

旨在通过猪体细胞克隆技术,生产乌金猪火毛系,并分析生长发育能力及繁殖性能,为该技术在地方优良猪种保种上的应用提供理论依据。本研究采集了符合乌金猪种质特征的3头公猪和12头母猪的耳组织样品。公猪年龄分别为3、6、11月龄,母猪年龄差距较大,最小的2月龄,最大的10岁。其中3头母猪和1头3月龄公猪已被去势,10岁母猪已无繁殖能力。结果,成功建立了15头乌金猪的耳组织成纤维细胞系,分别选择1头3月龄乌金猪（♂）和10岁乌金猪（♀）的成纤维细胞进行体细胞核移植,经胚胎移植入16头代孕母猪,共获得25头克隆猪,克隆猪生长发育正常,性成熟后进行自然交配共获得39头F1代活仔。本研究通过体细胞克隆技术成功克隆了乌金猪,具备正常的生长发育性能和繁殖性能,为地方猪种的保护研究提供了新的途径。     

韩国科学家用骨髓干细胞克隆猪获成功

韩国一个研究小组近日宣布利用骨髓干细胞成功克隆出猪，较之动物克隆研究中大多采用的体细胞克隆，新成果采用的方法可使猪的克隆成功率大幅提升。     

提高体细胞克隆猪成功率的尝试

自从Wilmut等（1997）利用体细胞在世界上首次成功获得克隆绵羊以来,至今牛、小鼠、山羊、猫、兔、骡、马、老鼠、鹿的体细胞克隆也相继获得了成功克隆。在猪体细胞克隆方面,自岩元正树研究小组、PPL公司、Infigen公司成功以来,其它众多研究小组也获得了成功。将体细胞克隆技术应用于畜产领域,就能够大量繁殖具有优良遗传性能的家畜,提高家畜的品种改良效率;     

北京利用克隆技术复制出优秀种公猪

日前,记者从北京市农业局获悉,利用高效的体细胞克隆技术,北京市成功复制出5头健康的克隆种公猪,其中包括4头大白猪、1头杜洛克。这5头克隆种公猪的健康存活,标志着克隆     

使用猪三联苗的防疫效果观察及对猪瘟免疫期抗体效价测定

猪三联苗免疫51—60日龄断奶前仔猪对猪瘟免疫期试验,是用人工接种猪瘟强毒致病的猪与试验猪、对照猪一起同圈感染,其结果免疫51日龄仔猪经7.5个月100%保护;免疫60日龄仔猪经6个月75%保护;另一组免疫60日龄仔猪经9个月,感染观察22天均健活,用猪瘟毒1毫升肌注后,对照猪于15天死亡,免疫猪100%保护。免疫猪与对照猪在攻毒前采取血清,用中和反应测定猪瘟免疫抗体及其效价的结果,共测14头中有5头猪血清中无中和抗体,家兔体温呈现热反应(其中对照猪3头均死亡,另2头免疫猪死亡一头,感染发病耐过1头),另9头免疫猪血清有中和抗体,试验兔无体温反应,攻猪瘟毒后均健活。被检血清中和效价一般在4—32倍之间。免疫7.5个月组的猪中和效价个别达到128倍,免疫9个月组的猪也有达到64倍的。田间试验免疫15,225头,其中发生反应17头,占11/千,死亡3头,占2/万,留养观察6236头,发病率9.64%,死亡率1.59%,没有猪瘟、猪丹毒病的发生。     

利用手工克隆技术培育体细胞克隆莱芜猪

为探讨手工克隆技术在克隆中国地方猪种的可行性,本研究组利用手工克隆技术平台,以中国地方猪品种莱芜猪的耳皮肤细胞作为核移植的供体细胞,以体外成熟的猪卵母细胞为受体细胞,进行体细胞克隆猪培养,成功培育了25头克隆莱芜猪。表明手工克隆技术可应用于莱芜猪体细胞克隆,为莱芜猪的保种及育种提供了新的途径。     

我国首例“转基因”克隆猪在哈降生

曾采用成体体细胞克隆技术,培育出我国首例成体体细胞克隆东北民猪的东北农业大学刘忠华教授,带领的课题组研究人员,又成功培育出绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪。22日晚,3头“转基因”猪在哈尔滨市三元畜产实业有限公司种猪场     

免疫应激对不同品种仔猪免疫应答能力的影响

通过对莱芜猪、鲁莱猪及大约克夏断奶仔猪注射大肠杆菌脂多糖(LPS),以探讨免疫应激对免疫功能的影响。试验分别选用12头体重为(13.6±0.5)kg的莱芜猪、鲁莱猪和大约克夏猪,2×3因子设计,即免疫应激处理(注射LPS或生理盐水)和品种类型(莱芜猪、鲁莱猪和大约克夏猪)。于试验第1天,每品种中的6头猪注射200μg/kg体重的LPS,6头注射生理盐水作对照,并进行猪瘟疫苗接种。注射LPS后第2、7和14天,采血测定淋巴细胞转化率;测定注射LPS前1 d和注射LPS后第7、14天的猪瘟抗体水平。结果LPS刺激第2天的猪,淋巴细胞转化率显著高于生理盐水组(P0.01),莱芜猪的淋巴细胞转化率(P0.05)显著高于大约克;免疫应激对不同品种仔猪的猪瘟抗体水平的变化无差显著性影响(P0.05)。表明LPS能够有效刺激不同品种猪的细胞免疫机能;在免疫应激作用下,不同品种仔猪免疫应答能力有差异。     

行业动态

韩国科学家用骨髓干细胞克隆猪获成功韩国一个研究小组近日宣布利用骨髓干细胞成功克隆出猪,较之动物克隆研究中大多采用的体细胞克隆,新成果采用的方法可使猎的克隆成功率大巾聂提升。在解剖学和生理学方面,猪和人都有很多相似之处,是科学家进行医学研     

世界首例基因敲除猪模型诞生

中国科学院广州生物医药与健康研究院近日发布消息称,研究人员通过将锌指核酸酶技术应用于猪体细胞的基因敲除,并结合克隆技术,成功获得了2头PPARY基因敲除猪。该研究在世界上首次建立了内源性基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管病并发症的研究有重要应用价值。     

世界首例基因敲除猪模型诞生

中国科学院广州生物医药与健康研究院近日发布消息称,研究人员通过将锌指核酸酶技术应用于猪体细胞的基因敲除,并结合克隆技术,成功获得了2头PPARY基因敲除猪。该研究在世界上首次建立了内源性基因敲除猪模型,对糖尿病和心血管病并发症的研究有重要应用价值。     

体细胞克隆太湖猪出生

以中国太湖猪胎儿成纤维细胞为核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体,以杜洛克猪为代孕母猪,进行了太湖猪体细胞克隆技术的研究,成功地获得了首例体细胞克隆太湖猪仔猪.经微卫星DNA多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系.本研究将为体细胞克隆技术在我国太湖猪育种、建立人类疾病模型等研究方面提供可行的技术方法.     

成年版纳微型猪近交系克隆猪的制备

本研究以版纳微型猪近交系成年母猪为材料,采用冷胰酶消化法获得成年猪成纤维细胞后,进行细胞的生物学特征检测,研究其作为供体细胞对体细胞核移植效果的影响。结果表明,版纳微型猪近交系成年猪的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,细胞冻存前和复苏后存活率分别为97.2%和92.6%(P>0.05),生长曲线呈"S"形,细胞群体倍增时间为36h,体外培养14代后仍能保持正常核型。以其作为核移植供体细胞,核移植重构胚卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数分别为61.9%、13.0%和37枚,移植了重构胚的3头代孕母猪均妊娠,并且有1头母猪产下1头正常的克隆猪。综上所述,利用版纳微型猪近交系成年猪能建立稳定的成纤维细胞系,该细胞系作为核移植供体细胞可获得版纳微型猪近交系克隆猪。     

抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用

用PRRSV感染SPF猪，血清检测结果显示，机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1)，而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同，应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头，7d后经鼻腔感染PRRSV，定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；2头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；3头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著，可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体，保护机体免受PRRSV的感染。     

东北民猪被成功克隆

东北农业大学、哈尔滨科技局及合作企业合作研究的采用成体体细胞作为核供体克隆猪技术取得成功。采用此技术克隆出来的3头东北民猪，自出生以来发育正常，长势良好。     

猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)最小免疫剂量测定

为了确定猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(PRV JS-2012-△g I/g E株)的最小免疫剂量,本研究将25头14日龄仔猪(猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型病原抗体均为阴性)随机分成5组,每组5头。第1~4组分别接种猪伪狂犬病灭活疫苗(PRV JS-2012-△g I/g E株)0.5、1、2、3 m L/头,免疫28 d后各组参照第1次免疫的剂量分别加强免疫1次,第5组实验猪不做处理作为阴性对照。免疫后,每周采集各组猪血清检测抗体水平。待第2次免疫28 d后,5组实验猪均滴鼻接种PRV JS-2012株第5代强毒2 m L,含病毒105.0TCID50/头。结果表明:第1次免疫后14 d,第2~4组猪PRV g B抗体全部转为阳性,而第1组猪在第1次免疫后21 d全部转阳。攻毒后,第1组有1头猪发病,表现精神沉郁、厌食和轻微神经症状,其余4头猪有一过性的发热,无任何其他异常临床表现,保护率为80%;第2~4组,实验猪只有一过性的发热,无任何其他异常临床表现,保护率为100%;第5组猪在攻毒后48 h,体温迅速上升到41℃以上,并表现为明显的精神沉郁、厌食和神经症状,发病率为100%,死亡率为40%。由此确定猪伪狂犬病灭活疫苗(JS-2012-△g I/g E株)最小免疫剂量为1 m L/头。     

体细胞克隆猪胚胎的研究进展

猪的体细胞克隆研究进展相对较慢,其主要原因是猪的生殖细胞、胚胎体外显微操作难度较大;妊娠维持有别于其他家畜,需具备一定量的胚胎数.所以直至2000年才有所突破,获得体细胞克隆后代[1,2].近几年来在这些方面都进行了大量深入的研究,几个研究小组都得到了体细胞克隆猪.然而猪体细胞核移植的效率非常低.用占移植卵母细胞的比例来衡量,只有1%～2%.本文就猪体细胞克隆的关键技术加以论述.     

不同猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗在猪体内的动态学及临床免疫效果比较

为了比较国内不同猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)弱毒疫苗的安全性和有效性,本研究将17头PRRSV抗原和抗体双阴性的28日龄仔猪随机分为4组,TJM-F92株弱毒疫苗组,JXA1-R株弱毒疫苗组,经典株弱毒疫苗(VR2332来源)组和注射生理盐水对照组。免疫后7,14,21,28d分别采血,ELISA抗体检测试剂盒检测PRRSV抗体,结果从免疫后14d起PRRSV抗体开始转阳,但各试验组的抗体水平无明显差异。对免疫后14d所采血样进行病毒分离,TJM-F92株免疫组未分离到PRRSV疫苗毒,JXA1-R株免疫组2头猪分离到PRRSV疫苗毒,经典株免疫组只1头猪分离到PRRSV疫苗毒。免疫后28d,所有猪接种PRRSV强毒株TJ株进行攻毒试验,观察各组猪的体温、临床症状;攻毒后21d,所有猪安乐死,剖检观察肺部病理变化。结果显示,TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未出现临床发病猪,经典株免疫组2头猪出现临床发病,对照组全部临床发病,死亡1头。经典株免疫组临床发病猪出现典型PRRSV感染肺部病理变化,而TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未发现典型PRRSV感染肺部病理变化。本研究证实TJM-F92株和JXA1-R株对高致病性PRRSV的免疫效果优于经典株弱毒疫苗,TJM-F92疫苗株与JXA1-R疫苗株相比,疫苗毒在体内带毒时间更短,安全性更高。     

运输应激对二花脸仔猪细胞免疫机能的影响

运输引起的应激可增加仔猪对疾病的易感性,这与免疫功能的改变有关,本研究探讨2 h运输对二花脸仔猪细胞免疫机能的影响。将21头20 kg左右二花脸仔猪分成运输组和对照组,运输组7头,对照组14头,运输组仔猪在公路上运输2 h,运输结束后,所有仔猪用巴比妥钠麻醉后宰杀,取血液和脾脏。用放射性免疫法测定血清IL-1β和IL-2含量;用MTT法测定应激猪血清对正常猪外周血T淋巴细胞增殖的影响;用RT-PCR方法测定脾脏中IL-1β和IL-2 mRNA表达。结果：（1）运输猪血清中IL-1β和IL-2含量均升高,但与对照组相比无统计学差异（P＞0.05）;（2）1∶4和1∶8稀释的运输猪血清,能显著提高正常猪外周血T淋巴细胞增殖活性（P〈0.05）;（3）与对照猪相比, 运输猪脾脏中IL-2 mRNA表达量显著增高（P〈0.05）,IL-1β mRNA表达变化不明显。本研究表明：2 h运输可改变仔猪的免疫状态,使机体代偿性地调动应急机制来应对不良环境。