鸡传染性支气管炎嗜肾性W93株活疫苗研究：Ⅰ.鸡传染性支气管炎嗜？…

本研究的病毒分离物,是来源于天津地区某鸡场暴发的２８日龄病鸡。此毒株对ＳＰＦ雏鸡几乎１００％感染发病,死亡率达３０￣９０％。此毒有很强的亲肾组织性,引起肾病变肿大、苍白、斑驳状,肾小管和输尿管有尿酸盐沉积。对ＳＰＦ鸡感染率９８￣１００％,可致鸡胚侏儒化、卷曲等特征性病变。在１０日龄ＳＰＦ鸡胚连传１０代后,其毒价可达１０＾６．５ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ。鸡胚毒不凝集鸡红细胞,可干扰ＮＤＶ血凝素的生成,     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

鸡传染性喉气管炎,传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系B …

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检所见病变;用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚,收获胚液并测定其毒价,从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。     

鸡传染性喉气管炎、传染性支气管炎和新城疫病毒对10个家系BWEL-SPF鸡或鸡胚的感染试验

用传染性喉气管炎（ＩＬＴ）强毒株感染１０个家系１５０日龄ＢＷＥＬＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检所见病变;用传染性支气管炎（ＩＢ）强毒株和新城疫（ＮＤ）疫苗株分别接种这１０个家系的鸡胚,收获胚液并测定其毒价。从而评估这三种呼吸道病毒在每个家系鸡或鸡胚上的敏感性。     

京—1株鸡马立克氏病强毒对BWEL—SPF鸡群的感染试验

用京－１株鸡马立克氏病（ＭＤ）强毒感染１￣１０个家系１日龄的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检病变及病理切片,以此评估该ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群每个家系鸡对京－１株ＭＤ强毒的敏感性。结果,１,５,８,９号家系的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡对京－１株ＭＤ强毒最敏感;３,４,５,６,１０号家庭系次之,２、７号家系敏感性相对较差。     

鸡副嗜血杆菌(HPG-A221、C668)对10个家系BWEL-SPF鸡胚的感染试验

用鸡副嗜血杆菌国际标准株（HPGA-221、C668）分别接种1-10个家系的BWEL-SPF鸡6日龄鸡胚,观察攻毒后16-30小时鸡胚死亡的情况。结果,第5、7、8家系死亡率为100％;1、4、6家系死亡率为90％;2、3、9、10家系死亡率为80％-85％,10个家系HPG平均死亡率为90.5％。对照组（HWL-SPF鸡胚）平均死亡率为90％。从而评估BWEL-SPF鸡群每个家系对鸡副嗜血杆菌（HPG-A221、C668）的敏感性。     

鸡支原体,鸡传染性鼻炎双价二联油乳剂灭活疫苗的研究

应用鸡败血支原体国际标准株（ＭＧＲ）和鸡副嗜血杆菌（ＨＰＧ）国际标准株Ａ型（ＨＰＧ２２１）和Ｃ型（ＨＰＧ６６８）制备了抗鸡支原体病（ＡＭ）和鸡传染性鼻炎（ＩＣ）的双价二联油乳剂灭活疫苗。通过多批次ＳＰＦ鸡免疫试验,进行了疫苗安全性、抗体产生时间及抗体动态变化规律、攻毒保护率、免疫期及现地鸡群的中间试验。结果表明,疫苗接种后１０～１５天可相继产生ＭＧ和ＨＰＧ血清抗体;接种６个月内,强毒攻击的免疫保护率为９１％～１００％;各项试验的指标不低于各自的单苗,具有很好的推广应用价值。     

腺胃型鸡传染性支气管炎病毒Hu98株的分离鉴定

１９９８年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到ＩＢＶ－Ｈ９８毒株。将该病毒株接种ＳＰＦ鸡胚并传至５代（Ｆ５）,结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征,ＥＩＤ５０为１０＾－６．４０／０．２ｍＬ。ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５感染ＳＰＦ鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为８０￣１２０ｎｍ、有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。用ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５毒株人工感染１日龄ＳＰＦ鸡能引起与自然病例相似的病理组织     

新城疫V4株弱毒变种的选育

应用有限稀释法通过ＳＰＦ鸡胚传代，从新城疫Ｖ２弱毒中克隆出一个变各，即２０代以后的继代毒，命名为新城疫Ｖ４克隆２０弱毒株，（ＮＤ－Ｖ４Ｃ２０）。毒以１０＾－１－１０＾１３×０．１ｍｌ接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚尿囊腔１５０小时内，鸡胚极少死亡。每个滴度５个胚有尿液均可凝集鸡红血球。第１０代和第２０代的每个滴度５个胚有的混合尿液以１０＾－６×０．５ｍｌ一次饮水免疫鸡，即能引起ＨＩ抗体反应，也能抵抗新城疫强     

鸡传染性鼻炎不同茵株的交叉保护性研究

在分离的６株传染性鼻炎茵株中择优选取其中４株，分别制成油乳剂灭活苗，免疫７周龄ＳＰＦ鸡，免疫３周后分别用分离茵株攻毒。结果ＨＰＧ－ＨＺ株对各茵株的保护效果最好，平均保护率达７６％以上，而用标准株ＨＰＧ－００８３株制成的疫苗，对各分离株的平均保护率只有６０％。     

鸡传染性喉气管炎免疫扩散试验研究

鸡传染性喉气管炎免疫扩散试验的最佳条件是：用ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）或鸡胚肾细胞（ＣＥＫ）制备抗原，用８％ＮａＣｌ的ＰＢＳ（ｐＨ７．２）配制１％的琼脂糖，孔径、孔距均为３ｍｍ。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从１９９７年在辽宁省大连市某鸡场发生的一种以腺胃肿大为特征的鸡的传染病病例中收集腺胃组织（Ｄ９７１）接种ＳＰＦ鸡胚,传至１３代,具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,ＥＩＤ５０为１０－６．４８／０．２ｍｌ。Ｄ９７１毒株感染ＳＰＦ鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为８０～１２０ｎｍ,有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。Ｄ９７１毒株经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝集鸡红细胞,并能特异的被Ｄ９７１多抗所抑制。用反转录聚合酶链反应获得了Ｄ９７１毒株免原（Ｓ１）基因ｃＤＮＡ,经１％琼脂糖凝胶电泳可见１．７ｋｂ的特征性条带。用Ｄ９７１毒株接种ＳＰＦ鸡,能引起与自然病例相似的病理变化,并分离到病毒。用Ｄ９７１毒株可直接感染ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞。结果证实从腺胃病变型ＩＢ鸡群中分离的Ｄ９７１毒株是冠状病毒科ＩＢＶ成员。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒BK株的分离与鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚传代培养、ＳＰＦ鸡胚气管环组织培养和鸡胚肾原代细胞培养,从一起有明显呼吸症状且又表现严重肾病变的鸡传染性支气管炎病例中分离到一株肾型传支病毒ＢＫ株。电镜观察表明,病毒粒子呈球状,直径９０～１００ｎｍ,纤突长１５ｎｍ,为典型冠状病毒。在ＳＰＦ鸡胚上盲传至５代,在ＴＯＣ上测其ＣＤ５０为１０－６．２。动物回归试验结果,试验鸡出现典型“花斑肾”,表明ＢＫ株具有较强嗜肾脏致病性。     

用PPA—ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ，用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼凝扩散试验（１０．６７％），经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点，此外，对４种封闭液的封板结果表明，１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ，０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ，０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。     

间接法Dot—ELISA检测鸡减蛋综合症抗体的建立及应用研究

应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验，血凝试验，气管环培养感染试验，单克隆抗体ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＢ病毒，在用其中９份接种８－９周龄ＳＰＦ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起高死亡率（６０－８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制试验，结果均为阳性。     

鸡法氏囊国外弱毒病毒的分离与鉴定（初报）

我们对国外引入的ＩＢＤ弱毒疫苗进行了分离，复制和测定，该病毒可接种ＳＰＦ鸡胚增殖，致难胚死亡，并产生ＩＢＤ病变；在ＳＰＦ鸡胚ＣＦＦ上繁殖，产生ＣＰＥ变化，并可被行异性ＩＢＤ抗血清中和；琼脂扩散与ＩＢＤ（＋）血清有明显的沉淀线，因此说明所分离的毒株是ＩＢＤ病毒，并测得其毒价为１０＾－６ＴＣＩＤ５０。     

用PPA-ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。     

鸡败血霉形体SC克隆致弱株免疫原性试验

在透明塑料隔离器中进行了鸡败血霉形体人工发病试验，结果３０日龄ＳＰＦ来航鸡在ＮＤＶ、ＩＢＶ弱毒诱导和７０／１００００００（质量分数）氨环境刺激的联合作用下，致病率可达１００％（７／７）。经鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣＦ１５６代培养物点眼、滴鼻免疫后１０，２０，３０ｄ的ＳＰＦ来航鸡再以ＭＧ强毒攻毒，结果，保护率分别达８０．０％（４／５），７５．０％（３／４）和８７．５％（７／８）。近期免疫效果证明，鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣ有良好的免疫原性。     

从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV

从暴发类似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液，接种鸡胚卵黄囊，部分鸡胚３～５ｄ死亡，部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物，接种鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），盲传３代后，发现以合胞体为特征的细胞病变（ＣＰＥ）。感染细胞做超薄切片电镜观察，可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，可见规律排列的１０条带，呈３－３－１－３排列。与禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）参考毒株Ｓ１１３３株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ＡＲＶ呈阳性反应，与传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）呈阴性反应。证明分离病毒为ＡＲＶ