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针对我国狂犬病临床诊断的现实需求,本研究根据狂犬病病毒基因组核苷酸保守序列,设计巢式引物,对引物工作浓度和退火温度进行了优化,并对RT-PCR敏感性、特异性和重复性进行了检验.结果显示,巢式RT-PCR方法最低能够检测0.01 MILD50/30μL的脑组织病毒量,对阳性样品和非狂犬病感染样品的3次重复检测结果均与狂犬病诊断OIE推荐方法(荧光抗体染色法)的确定结果完全一致;在针对203份临床样品的检测中,FAT疑似样品通过MIT和巢式RT-PCR进一步确诊,巢式RT-PCR显示出较高的敏感性和特异性.以上表明,本研究建立的狂犬病病毒核酸巢式RT-PCR方法高度敏感和特异,可以用于FAT和MIT疑似样品的辅助检测,为试剂盒的研发与应用奠定基础. 相似文献
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近年来,酶免疫试验(EIA)已广泛用于诊断多种动物疾炳。用EIA作伪狂犬炳的血清学诊断具有高度灵敏性,但只有设备精良的实验室才能做。此外,EIA所用的聚苯乙烯板固定抗原的效果差,而且其有效吸附量差别明显。为此,我们用硝酸纤维素纸(NC)固定伪狂犬病病毒(PRV)抗原作斑点试验,亚设计一种眼观检测猪PRV抗体的EIA试验。此外,通过检测实验和自然感染猪血清评价了斑点EIA特性。并将本试验与血清中和试验(SN)和微量标准EIA作了相对灵敏性和特异性的比较。 相似文献
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狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)为细胞水平的病毒中和试验,检测的敏感性、特异性和重复性均较好,是世界动物卫生组织(OIE)推荐进行动物狂犬病中和抗体定量检测的标准方法而广泛应用。本单位严格依照《OIE陆生动物检测与免疫手册》狂犬病章节的2.1.13.2.a,建立了动物狂犬病荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法,内部稳定运行后,又依据相关要求,先后3次与长春兽医研究所OIE狂犬病参考实验室进行平行比对,符合率100%,重复性良好。并以此获得广东省质量技术监督局实验室资质认定证书(CMA),FAVN方法正式纳入本单位的CMA资质检测项目,可面向社会出具相应资质检测报告,为狂犬病综合防控,临床检测等提供帮助和服务。 相似文献
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非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。 相似文献
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动物狂犬病病毒巢式RT-PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以GenBank收录的多基因型狂犬病病毒(RV)N基因序列为参考,设计了简并的PCR引物,建立了能够有效扩增7种基因型RV基因组片段的巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法,命名为RVN371.该方法能够检测到4.6个TCID50的SRV9固定毒,对犬、猪、蝙蝠及牛的狂犬病阳性脑组织样品均表现出良好的特感性:扩增产物目的带位置正确,未见非特异性扩增条带.对比试验表明,RVN371对街毒脑组织样品检测的灵敏度较乳鼠脑内接种试验(MIT)高出100倍;在对3种鼠脑固定毒、12种犬脑街毒样品的检测中,与RV检测的金标方法--免疫荧光试验(FAT)完全符合.RVN371为动物狂犬病的实验室诊断和流行病学研究提供了有利的工具. 相似文献
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狂犬病快速诊断方法的建立和应用 总被引:4,自引:2,他引:2
根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物,建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中。扩增出443bp的核酸片段,检出核酸的敏感性约为3Pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合,但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速、简便和敏感的优点。 相似文献
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羊痘病毒 总被引:6,自引:0,他引:6
羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病.作者着重综述山羊痘和绵羊痘.羊痘病毒的基因组较大,山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组非常相似,但自然条件下一般不会发生交叉感染.临床症状主要以发热和全身性丘疹或结节为特征,结合其临床症状实验室用透射电子显微镜检测病毒粒子的典型形态即可做出快速诊断.病毒培养和分离虽有较高的特异性,但耗时长;因羊痘病毒和副痘病毒有相似的血清型,一些血清学的诊断方法如琼脂扩散试验(AGID)、间接免疫荧光试验、检测抗体的ELISA等,因会出现抗体交叉反应而无法区分这2种病毒的感染;又因羊痘感染后主要引起细胞介导免疫,动物接触病原后仅产生低水平的中和抗体,故而病毒中和试验敏感性也不高.近年来,用于ELISA检测抗原的方法已经建立,具有较高的特异性;Western印迹试验利用羊痘病毒的P32抗原与待检血清反应,具有较好的敏感性和特异性,但价格昂贵、操作难.PCR可用来检查活体或组织培养品中羊痘病毒基因组;在此基础上发展了多重PCR技术,不但敏感性和特异性更强,且大量节省了时间和精力.治疗羊痘病毒无特效药,做好疫苗接种等防制措施很关键;目前采用活疫苗和灭活疫苗来控制本病,所有被鉴定的羊痘病毒毒株都有一个相同的主要中和位点,可以交叉保护.灭活苗的免疫保护期短.以羊痘病毒基因组作为其他反刍动物病原基因的载体,生产新一代羊痘病毒基因工程疫苗,具很大潜力. 相似文献
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REN Wei-wei LIANGZhong ZHI Xiao-ying QI Guang-yu LIU Xiang-tao CAI Xue-peng JIANG Tao 《畜牧兽医学报》2012,43(2)
为了兽医基层工作人员能够快速诊断口蹄疫病原,与其他传染病做鉴别诊断,有必要建立一种快速、简便区分它们的胶体金免疫层析方法.本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金.将纯化的Asia 1/China/05流行毒株12S偶联抗原的兔抗体制备免疫胶体金,喷免疫胶体金于玻璃纤维制成金标垫.将纯化A/AF72流行株12S偶联抗原的兔抗体和适量O/China/99流行毒株12S偶联抗原的兔抗体混合固定于硝酸纤维素膜上作为检测带.将羊抗兔抗体固定在硝酸纤维素膜的不同区域作为质控带,并组装成口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条.利用其对阴性参考样品、各型阳性参考样品、已知背景的田间样品进行检测.灵敏度试验结果显示:建立的试纸条方法敏感性高、可检测到病毒最低含量为0.98×104 LD50;特异性试验显示:在检测与口蹄疫临床症状相似病原——猪水泡病病毒(SVDV)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)抗原时无交叉反应;重复性试验显示:不同批次间、同一批次内检测结果完全一致;符合性试验显示:检测国家口蹄疫参考实验室已确定口蹄疫病毒血清型的样品90份,阳性符合率、阴性符合率分别为96.70%、100%.本试验研发的口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条具有很好的灵敏度、特异性、重复性和符合性,适合国内流行的口蹄疫病原的鉴别诊断. 相似文献
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抗体在对抗多种感染源中扮演重要角色。中和作用是抗体最主要的功能,这些多功能蛋白的Fc及补体依赖活性是其在提供对抗多种病毒感染的保护能力中最关键的。体内抗病毒的保护作用很复杂,其中病毒中和作用(抗体使病毒失去感染力的能力,通常在体外进行)很重要,通常它仅仅占保护作用的一部分。荧光焦点抑制试验仍是检测狂犬病病毒中和抗体的金标准。除了中和试验,抗体的狂犬病病毒特异性抗原结合活性也可以通过酶联免疫吸附试验及其他备用方法进行测定。对于任何一种疾病,选择适当的试验测定抗体滴度,验证检测及如何进行判定是重要的考率因素。在替代保护分析试验和结果判断方法的选择中,必须仔细考虑检测狂犬病病毒抗体的单一实验室方法的固有局限性及所选方法的有效性。 相似文献
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狂犬病实验室诊断研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
狂犬病是世界上最可怕的人兽共患传染病,所有温血动物对狂犬病均易感,狂犬病已成为世界严重的公共卫生问题。暴露后疫苗接种可以达到有效的预防,狂犬病的预防和暴露后处理措施的有效实施均有赖于实验室的安全、准确、快速诊断。另外,免疫后及时对血清中和抗体效价进行监测,也是防控狂犬病的关键措施。文章从狂犬病实验室诊断的安全问题、实验室检测样本的选择、组织学检查、病毒抗原检测、生物学鉴定、核酸检测及血清抗体检测等方面对狂犬病实验室诊断方法及研究进展等进行综述和评价。 相似文献
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山羊痘血清学诊断技术研究 总被引:9,自引:1,他引:8
本实验研制了山羊痘的五种血清学检测方法并进行了比较分析,结果表明:琼脂凝胶扩散试验(AGP)适于基层兽医开展山羊痘病例的诊断,对流免疫电泳技术(CIE)能提高对抗原或抗体的分辨能力,荧光抗体技术(FAT)能对感染细胞进行山羊痘病毒定位检测,反向间接血凝试验(RPHA)主要用于临床痘疹痂皮和感染细胞中山羊痘抗原的定量测定,而正向间接血凝试验(IHA)不失为一种山羊痘抗体的最佳监测方法。 相似文献
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狂犬病生物学鉴定方法及核酸检验技术 总被引:1,自引:0,他引:1
狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的人和其他温血哺乳动物的一种急性、致死性疾病。根据被咬伤病史、临床症状和神经影像可诊断狂犬病,但仅局限于狂暴性狂犬病。而狂犬病分为狂暴性、瘫痪性和非典型性,因此该病确诊需要进行实验室诊断。现就狂犬病的生物学鉴定方法和核酸检测技术做一介绍。1生物学鉴定法1·1实验动物接种小鼠接种试验(M IT)最初用于狂犬病的确诊,早在1935年也用于狂犬病疫苗的保护测定。小鼠病毒中和试验广泛应用于检测接种过疫苗的人和动物的抗体检测。WHO狂犬病专业委员会建议人暴露后,当所有脑组… 相似文献
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湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的调查研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为了解湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的情况,我们于2005年9月从湘西狂犬病疫点采集38份扑杀的外观健康的犬脑组织,并于2006年1月在湘西农贸市场采集了168份外观健康的犬脑组织。RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测表明共有5份犬脑标本为阳性,并用乳鼠脑内接种的方法分离得到了5株狂犬病病毒毒株,分子流行病学分析表明这5株病毒均为野毒。在这5份阳性标本,疫点有4份,检出率为10.5%,市场1份,检出率为0.59%。我们的调查结果表明疫点的外观健康犬携带狂犬病病毒的检出率与国内的其它报道接近,而从市场采集的标本的检出率却要低很多。 相似文献