剑麻抗斑马纹病鉴定技术研究

为了促进形成一套剑麻抗斑马纹病的鉴定技术,本研究对剑麻斑马纹病最适宜接种条件进行了探讨,并利用活体叶片接种和离体叶片接种两种方式,以抗性不同的8个剑麻种质为试验材料,在人工气候箱和恒温室中进行剑麻抗斑马纹病接种试验,并与大田抗病性进行比较.结果表明:针刺法接种,25～30℃保湿培养是该病最适宜的发病条件;两种接种方法都能比较准确地鉴定剑麻种质对斑马纹病的抗病性,而活体叶片接种较离体叶片接种鉴定抗病性更加准确.     

豌豆离体叶片鉴定白粉病抗性方法

1997～2001年对豌豆离体叶片鉴定白粉病抗性方法进行了研究。结果表明,将豌豆苗期离体叶片在垫有两层湿滤纸的培养皿内培养,并人工接种白粉病菌,能鉴定出豌豆品种抗白粉病的差异。鉴定结果与田间成株期的抗病性表现基本一致。温度、光照强度、叶龄、病菌接种量等因素影响离体叶片白粉病发生速度或保绿时间。离体鉴定较适宜在温度18～20℃、光照强度3600lx以上、每天12h光照与12h黑暗交替的条件下进行。最适叶龄为二叶一心期或三叶一心期的初展叶。较适宜的接种量为每1cm~2叶面积接种5.5×10~3个分生孢子。     

一种新的90 kD胞外蛋白激发子诱导烟草系统获得抗性研究

 就棉疫病菌(Phytophthora boehmeriae Saw.)培养滤液中提纯获得的90 kD胞外蛋白激发子诱发烟草系统获得抗性进行了研究。以10 nmol/L激发子溶液注射处理Samsun NN烟草叶片24 h后,在处理叶片及其上、下各2片叶片接种TMV,结果是处理叶及其上、下各2片叶片上的枯斑数显著少于对照,诱抗防效达40.9%~53.1%;接种TMV7d后处理叶片的枯斑平均直径为1.23mm,显著小于对照叶片上的枯斑直径2.97mm,但是处理叶片的上、下叶片上的枯斑平均直径与对照没有显著差别。以10 nmol/L激发子溶液注射处理Samsun NN烟草叶片分别立即接种或于1、2、4、7、15 d接种TMV,结果证明该激发子诱导烟草对TMV的抗性以处理后第1d至第4 d接种为较好,防效达30.2%~5 0.4%;处理后立即接种和第7d接种TMV诱抗防效仅4%左右,处理叶片上的枯斑数与对照没有显著差别,表明较强的诱导抗性可持续时间<7d。用不同浓度激发子处理烟叶,所测定的0.5~100 nmol/L各浓度均可显著地诱发烟草对TMV产生获得抗性,诱导抗性效果为34.9%~5 8.2%,诱导抗性效果随浓度的降低呈下降趋势。以10 nmol/L激发子溶液注射处理W38烟草叶片,2 d后分别注射接种烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)菌液或喷雾接种烟草赤星病菌(Alternaria alternata)分生孢子,结果是,注射接种烟草野火病菌5d后处理叶片及其上、下叶片上的野火病病斑均显著小于对照;处理叶片上的赤星病病斑数及病斑面积明显小于对照,表明该激发子可诱导烟草对野火病和赤星病产生抗性。上述结果表明,90kD蛋白激发子诱导烟草产生的获得抗性是一种典型的系统获得抗性,该系统获得抗性对病原菌具广谱抗性。     

温度对烟草黑胫病菌致病力及代谢表型的影响

为揭示温度对烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae致病力及代谢表型的影响,采用菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定不同温度下烟草黑胫病菌的生长速率和致病力,同时采用Biolog代谢表型技术测定其在20、27、30和35℃下的渗透压和pH代谢表型。结果表明,烟草黑胫病菌在21~35℃范围内生长良好且具致病力,30℃时生长速率最快,为17.72 mm/d,30℃和35℃时致病力较强,叶片接种烟草黑胫病菌后24 h内便出现病斑,随温度升高病害的潜伏期缩短。温度影响烟草黑胫病菌的渗透压和pH适应性;27℃和30℃时烟草黑胫病菌的渗透压适应范围最广,其次为21℃,35℃时烟草黑胫病菌渗透压适应范围最窄;在20、27和30℃时,烟草黑胫病菌在pH 5.0~10.0范围内可正常代谢,在35℃时pH代谢范围为5.5~10.0。     

稻叶离体接种鉴定品种抗病性

我们试用稻叶离体接种法鉴定品种的抗瘟能力。此法可以随时随地采集各种不同品种的叶片测定其抗性,可重复多次进行,并可用来筛选防治稻瘟病的新农药和鉴别病菌的生理小种。     

立枯丝核菌对香蕉的致病特性测定

在离体香蕉叶上做人工接种测定表明：立枯丝核菌对香蕉的一生均有致病力,但最容易侵染幼苗期。该病菌侵染香蕉苗以２５－３０℃为适宜深度高于３５℃时不能侵染致病。它在黑暗环境下比在自然散射光下更容易侵染香蕉苗。ＰＤＡ接种体的菌丝在香蕉叶片上的生长距离,密度及所致的病斑最大,发病１ｄ病斑接种体次之,发病５ｄ病斑接种体最小。     

83份新疆野苹果种质资源对梨火疫病菌的抗病性评价

2022年4—5月,以国家果树种质新疆野苹果资源圃83份新疆野苹果种质资源为试材,采用室内离体叶片和离体枝条接种方法鉴定评价83份新疆野苹果对梨火疫病的抗性。结果表明,梨火疫病菌对83份不同类型新疆野苹果均有致病力。离体叶片和离体枝条接种结果存在一定差异,离体叶片接种的抗性资源多于离体枝条接种。抗病的新疆野苹果种质资源来自新源分布区较多。筛选出高抗新疆野苹果种质资源1份,抗病种质资源4份,感病资源7份,高感资源13份。5份新疆野苹果种质资源可作为抗病砧木选育的基础材料。     

水稻品种与水稻细菌性条斑病菌的互作机制

水稻叶片接种3d后，水稻细菌性条斑病菌开始在叶片上大量增殖；接种10d后，病菌数量开始保持相对的稳定，但感病品种上的菌量比抗病品种上的菌量在10倍左右，病斑在接种后第3d开始出现，接种10d以后，病斑在感病品种上能继续快速发展，而在抗病品种上开始受到抑制，通过对抗病和感病品种叶片上的气孔观测发现，感病品种的气孔密度和气孔长度一般都较抗病品种大，相关分析表明，气孔长度理发师品种抗性相关。接种后对PAL酶的活性测定结果表明，PAL酶的活性与品种抗性呈负相关关系。     

东北地区水稻种质资源抗纹枯病研究初报

为明确东北地区水稻种质资源对纹枯病的抗性, 收集了本地区水稻种质资源152份, 在苗期和分蘖期进行离体叶片接种; 在分蘖末期对79份种质进行了牙签嵌入法接种鉴定?结果表明, 供试的152份稻种资源中, 苗期离体叶片接种表现抗病的种质有2份, 中抗种质有42份?分蘖期离体叶片接种表现抗病的种质2份, 中抗种质8份; 进行牙签嵌入法接种鉴定的79份种质中, 表现中抗的种质16份?在苗期?分蘖期离体叶片接种?牙签嵌入法接种鉴定中均表现为中抗以上的种质仅有‘沈农9819’?分蘖期离体叶片接种和牙签嵌入接种法所获结果符合率最高, 为77.22%?     

柑橘溃疡病菌免疫荧光和生物学检测技术研究

本研究通过对7个不同柑橘品种的离体叶片接种及致病性观察筛选出了柑橘溃疡病菌敏感寄主材料，并建立了柑橘溃疡病菌的生物学检测方法；还初次尝试建立了一种简便易行的柑橘溃疡病菌免疫荧光快速鉴定方法。柑橘离体叶片接种实验结果表明：福本、红肉脐橙、纽荷尔和枳壳对柑橘溃疡病菌表现出一定的感病性，而粗柠檬和邓肯葡萄柚未表现出明显感病迹象，反而出现了坏死性应激反应。免疫荧光试验结果显示：浓度为10^3cfu／mL的菌液在30℃下用BSA封闭2h，30℃下抗体结合1h，荧光抗体浓度为4μg,／mL，室温放置40min后镜检，就可以在荧光显微镜下清晰地看到绿色的柑橘溃疡病菌体，而用该方法检测不到水稻白叶枯病菌。用免疫荧光抗体检测柑橘溃疡病菌操作简便，仅需一台荧光显微镜，整个检测过程仅需要4h。     

烟草品种抗青枯病鉴定中相关因素分析

用烟草青枯病t1菌株对G3、红花大金元等品种分别作不同接种方法、不同菌量、不同年份和不同生育期接种试验以及与黄瓜花叶病（CMV）交叉接种试验，结果表明，参试品种在烟株旺长初期，用切根灌菌液接种与病区自然鉴定之间对青枯病抗性呈极显著正相关（r=0.9855)，接种体浓度以10^8scfu/ml为宜，不同抗感品种在不同年份重复鉴定中表现出不同程度的抗性波动，用相对抗病指数评价品种抗性，可减少误差。参试18个品种不同生育期与t1菌株的互作反应，分为苗感成株期抗病型和全期感病型两类。烟株生长初期交叉接种黄瓜花叶病毒（CMV）与青枯病菌明显减轻青枯病病情，但干扰了抗病性鉴定，查清了上述影响因素后，可以组装一套规范化的烟草品种抗青枯病筛选鉴定模式。     

拮抗细菌B8对烟草黑胫病菌的抑制作用及其菌株鉴定

从烟草根际土壤中分离到对烟草黑胫病菌及其它植物病原菌具有抑制作用的菌株B8,平板对峙培养抑菌带内菌丝畸形、原生质凝集或外渗。其发酵原液和发酵液的无菌滤液均能抑制烟草黑胫病菌和蜡状芽孢杆菌;离体叶片接种法测定其发酵液对烟草黑胫病的防效,结果表明预防作用达100%。室内盆栽试验表明B8菌株发酵液对烟草黑胫病的预防作用可达78.1%,优于治疗作用。该菌菌体杆状,芽孢侧生、椭圆形,经形态学、生理生化性状和16S rDNA序列测定,将其鉴定为侧孢短芽孢杆菌。     

荔枝炭疽病室内抗病评价体系的建立

由炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的荔枝炭疽病是产业中最严重的病害之一，其周年发生，可以侵染叶片、花穗和果实。为评估荔枝资源的炭疽病抗病性、筛选抗性种质，本研究利用离体叶片，分析了接种方法、叶片叶龄、接种位置、发病时间和病斑测量方法对抗病性评价的影响。结果表明，选用叶片完全舒展、达到最大叶面积、刚完成转色的叶片，在叶片背面针刺接种炭疽菌菌饼(直径5 mm),接种后72 h观察发病情况，并测量病斑面积，能够较好的评估荔枝的抗病性。利用此方法分析了55份荔枝资源接种炭疽菌后的叶片病斑面积，利用欧式平方距离法将病情指数分为6级，根据发病情况将抗性等级归类为免疫、高抗、中抗、中感和高感。本研究建立了利用荔枝离体叶片评价抗炭疽病的技术方法，明确了评价标准，为荔枝抗病品种的选育、培育和抗病基因的筛选提供了技术支持。     

小麦白粉病菌31号小种迅速上升

小麦白粉病菌３１号小种迅速上升我们自１９８３年开始鉴定小麦白粉病菌的生理小种。１９９０年采用全国统一的９个鉴别寄主品种，以幼苗离体叶片接种鉴定法，系统监测了河南省小麦白粉病菌群体的生理小种组成及其变化。结果表明，当前白粉病菌群体中３１号小种的频率在迅...     

烟草立枯病病菌人工诱发病害效果比较初探

采用人工接种方法,将烟草立枯病病菌菌株TRs-5接种于烟草云烟87的不同部位,观察其发病效果。研究了菌株接种体在不同接种温度和培养时间对发病效果的影响,并比较了其与稻纹枯病病菌菌株RRs08-22-2接种于水稻品种中优679的致病效果。结果表明,菌株TRs-5既能侵染烟草幼苗近地表的茎基部,导致其发病,也能侵染烟草成株苗叶面形成坏死病斑。在温度28℃环境下接种比在20℃的导致发病更严重。用培养2 d的菌丝体接种比培养4 d的导致更大的病斑。在寄主烟草上,菌株TRs-5比菌株RRs08-22-2的致病力强,但在寄主水稻上,菌株TRs-5比菌株RRs08-22-2的致病力弱。初步发现这2个病菌与2个寄主之间存在致病专化现象。     

烟草黑胫病菌致病性分化和烟草品种的抗病性差异

用游动孢子浸根接种法对我国主产烟区的117个烟草黑胫病菌(Phyto-phythora parasitica var.nicotianae)致病性测定结果表明，黑胫病菌茵株问致病性存在明显差异，病情指数范围4．66—84．30，强、中和弱致病性菌株各占11．1l％、58．97％和29．91％。对国内主要的59个烟草品种经室内和大田的抗病性鉴定表明，目前尚没有抗黑胫病菌的免疫品种，但不同烟草品种抗性差异明显，其中Coker371G、NC82、K346和单育三号等品种有较强的抗病性，且室内鉴定与大田鉴定结果基本一致。     

不同葡萄品种对霜霉病的抗性

葡萄霜霉病是葡萄生产上重要的病害之一,通过对辽宁省不同葡萄品种进行室内离体叶片接种和田间自然发病情况调查,以期为葡萄抗性品种的选育和葡萄霜霉病的防治提供科学依据。结果表明,在供试品种中,没有对霜霉病完全免疫的品种,室内离体叶片接种和田间调查结果基本一致,不同品种间霜霉病的抗性存在差异。供试的65个品种中,室内离体叶片接种评价高抗品种3个,抗病品种23个,感病品种24个,高感品种15个;田间自然发病调查评价高抗品种1个,抗病品种19个,感病品种35个,高感品种10个。欧美杂交品种(系)相对欧亚杂交品种(系)较抗病。     

离体水稻叶片划伤接种鉴定稻瘟菌的致病型

抗瘟品种的培育和抗瘟基因布局需要快速、准确、大规模地定性水稻抗源及其后代的抗瘟基因型和稻瘟菌致病型。为此, 本研究建立了水稻离体叶片划伤接种方法。该方法依据主效抗瘟基因抵抗稻瘟菌在寄主体内扩展的特点, 通过针刺在水稻叶片上造成伤口, 避免了寄主侵入抗性的干扰, 从而有利于抗扩展性的定性鉴定。作者利用活体喷雾接种、叶片无划伤接种和本研究建立的离体叶片划伤接种等3种接种方法, 在秧苗4~6叶龄期, 对菌株12-DG-68在24个水稻抗瘟单基因系上的致病反应进行了测定, 结果显示：叶片划伤接种的检测结果稳定、一致; 而叶片无划伤接种和活体喷雾接种的检测结果假抗性比例分别为12.5%和4.2%, 不同叶龄期的叶片间反应型不一致率达7%。此外, 离体叶片划伤接种还可利用菌丝块接种, 以鉴定分生孢子产量低的菌株的致病型。因此, 水稻叶片划伤接种是一种准确、稳定和方便的稻瘟菌接种方法, 可用于大规模定性测定水稻抗源及其后代的抗瘟基因型和稻瘟菌的致病型。     

软枣猕猴桃种质资源溃疡病抗性鉴定方法的建立与评价

以51份软枣猕猴桃Actinidia arguta种质资源为材料,以中华猕猴桃Actinidia chinensis Planch‘红阳’、美味猕猴桃Actinidia chinensis var.deliciosa‘徐香’为对照,利用丁香假单胞菌猕猴桃致病变种Pseudomonas syringae pv.actinidiae PSAM228对软枣猕猴桃离体枝条和叶片进行人工接种和溃疡病抗性评价。结果表明,不同年份半木质化离体枝条接种后的感病结果基本一致并达极显著相关水平,相关系数为0.9359,半木质化离体枝条接种可作为软枣猕猴桃溃疡病抗性鉴定的方法;根据病情指数将软枣猕猴桃种质资源按感病程度分为高抗、中抗、感病、中感和高感5个级别,其中高抗资源33份,中抗资源18份,没有感病、中感和高感级次的种质资源。     

超量表达益母草种子抗菌蛋白提高番茄的抗病性

为了验证来自益母草Leonums japonicusHoutt种子的抗菌蛋白基因LjAMP1和LjAMP2对植物病害的广谱抗性,用根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法,将其分别转入台湾圣女番茄品种。结果显示,利用黄萎病菌毒素浸泡番茄离体枝条,处理24h,空载转基因对照和非转基因再生植株枝条全部萎蔫,而LjAMP1和LjAMP2转基因番茄T0代枝条未出现萎蔫的株系比率分别为11.11%和6.25%;用离体叶片接种菌块,分别对T0代抗或耐黄萎病菌毒素的T1代株系接种早疫病菌,接种10天,空载转基因对照和非转基因再生植株的病情指数达到100,而LjAMP1和LjAMP2转基因番茄病情指数最低的株系分别为17.5和10.0,表明转基因番茄能同时提高对黄萎病菌毒素和早疫病的抗性;进而用叶盘法检测转基因植株对番茄青枯病菌的抑制作用,结果显示对真菌病害抗性强的转基因植株叶片对青枯病菌的抑菌圈更大。转基因番茄抗病鉴定结果表明,来自益母草种子的LjAMP1和LjAMP2基因对植物病害具有广谱抗性。