白术两种主要土传病害的分离、鉴定及杀菌剂的室内活性筛选

立枯病和白绢病是白术生产种植中的两种主要土传病害,在苗期和生长期都有发生,危害严重。本研究从浙江省磐安县采集具有典型病症的白术植株,对病原进行了分离、纯化和致病性测定。综合形态学特征及rDNA-ITS序列分析表明,白术上的病害是由立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn引起的立枯病和由齐整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.引起的白绢病。室内毒力测定结果表明,10种供试杀菌剂对立枯病菌的毒力从大到小为:噻呋酰胺咯菌腈戊唑醇四氟醚唑吡唑醚菌酯丙硫菌唑嘧菌酯啶酰菌胺苯醚甲环唑咪鲜胺;对白绢病菌的室内毒力从大到小为:吡唑醚菌酯噻呋酰胺嘧菌酯戊唑醇咯菌腈苯醚甲环唑丙硫菌唑啶酰菌胺四氟醚唑咪鲜胺,其中噻呋酰胺对两种病菌都具有很高的活性,EC_(50)分别为0.06和0.03mg/L,可用于两种病害的防治。     

引起山西省小麦纹枯病的丝核菌融合群鉴定及其对不同杀菌剂的敏感性

为明确引起山西省小麦纹枯病的丝核菌Rhizoctonia种类及其对杀菌剂的敏感性,通过形态学特征观察、rDNA ITS序列分析及致病性测定鉴定分离自23个麦区小麦病样的195株纹枯病菌,并采用菌丝生长速率法测定菌株对氟酰胺、噻呋酰胺和己唑醇的敏感性。结果显示,所有菌株的菌落形态接近于丝核菌,呈双核,可与融合群（anastomosis group,AG）D组各亚群菌株菌丝发生融合反应,但在系统发育树中全部与AG-DI亚群菌株聚为一支,表明195株菌株均为禾谷丝核菌R. ce-realis AG-DI亚群,且经致病性试验验证这些菌株均为山西省小麦纹枯病的病原菌。氟酰胺、噻呋酰胺和己唑醇对菌株的EC₅₀范围分别为0.092~0.610、0.067~0.142和0.008~0.111 μg/mL,均值分别为0.331、0.074和0.052 μg/mL,且菌株对氟酰胺、噻呋酰胺和己唑醇的敏感性频率分布均呈连续的单峰曲线,因此可将以上均值作为山西省小麦纹枯病病原菌禾谷丝核菌AG-DI亚群对氟酰胺、噻呋酰胺和己唑醇的敏感基线。     

草莓丝核菌根腐病的病原菌鉴定

 由丝核菌引起的根腐病是草莓生产上的重要病害之一。本研究基于形态学、菌丝细胞核荧光染色、菌丝融合群测定、rDNA-ITS序列分析和柯赫氏法则验证,对北京地区引起草莓根腐病的丝核菌进行了鉴定。2014年从北京市昌平区温室草莓根腐病病样中分离纯化获得的3个代表菌株,经形态学和细胞核荧光染色,确定均为双核丝核菌(binucleate Rhizoctonia, BNR),且与双核丝核菌AG-A融合群菌株发生菌丝融合,菌株CP-Z的rDNA-ITS序列与GenBank中丝核菌属的有性型角担菌属(Ceratobasidium)AG-A融合群 4个菌株的相似性达100%。菌株CP-Z接种草莓根部,引起根系变黑、腐烂,植株死亡,从接种发病的根部可重新分离到双核丝核菌。双核丝核菌AG-A融合群引起草莓根腐病为国内首次报道。该病原菌菌丝生长适温为25℃~28℃。     

五种杀菌剂对烟草立枯病菌的生物活性

由立枯病丝核菌引起的烟草立枯病是我国烟草苗床上危害最严重的病害之一。本研究评价了5种杀菌剂 (嘧菌酯、啶酰菌胺、氟啶胺、丙环唑和嘧霉胺) 对立枯丝核菌菌丝生长、菌核形成和萌发的影响,以及其对烟草立枯病的防治效果。结果表明:立枯丝核菌菌丝对氟啶胺和嘧菌酯的敏感性高于丙环唑和啶酰菌胺,而对嘧霉胺的敏感性较低;嘧菌酯对菌核形成的抑制作用强于丙环唑、氟啶胺、啶酰菌胺和嘧霉胺;5种杀菌剂对立枯丝核菌菌核萌发均无抑制作用。在离体烟叶的保护活性方面,12.5和50 mg/L的嘧菌酯和啶酰菌胺对立枯病的保护作用优于氟啶胺、丙环唑和嘧霉胺;在治疗活性方面,50和200 mg/L的嘧菌酯的治疗作用优于其他4种杀菌剂。因此,供试的5种杀菌剂中嘧菌酯最适合用于烟草立枯病的防治。     

新化合物氟醚菌酰胺的抑菌活性及其对棉花立枯丝核菌的作用方式研究

采用菌丝生长速率法测定了新化合物氟醚菌酰胺(LH-2010A)对10种常见植物病原菌的毒力,同时研究了其对棉花立枯丝核菌无性繁殖过程、菌丝形态及细胞膜通透性的影响。结果表明:氟醚菌酰胺对10种病原菌均具有较强的抑菌活性,比结构相似的选择性杀菌剂氟吡菌胺具有更广的杀菌谱。氟醚菌酰胺对棉花立枯丝核菌和番茄灰霉病菌的抑菌活性最高,EC50值均小于1.00 μg/mL,对其他8种病原菌的EC50值则在1.10~4.63 μg/mL之间;而氟吡菌胺只对辣椒疫霉和马铃薯晚疫病菌具有较高的抑菌活性,EC50值分别为0.61和0.72 μg/mL。在100.0 μg/mL下,氟醚菌酰胺对棉花立枯丝核菌抑菌作用明显,能显著抑制其菌核产生和菌丝生长量,使菌丝分支增多、变短、变粗;以不同浓度的氟醚菌酰胺处理棉花立枯丝核菌时,其细胞膜的通透性随着药剂浓度的增加而显著增大,520 min时最高处理浓度下的相对渗率为77.01%。表明氟醚菌酰胺对多种植物病原菌具有较高的抑菌活性,并能明显抑制棉花立枯丝核菌的多项生理指标。     

噻呋酰胺对水稻立枯丝核菌群体的活性变化及其对稻田天敌群落的影响

分别从未使用过噻呋酰胺及使用噻呋酰胺3年以上的浙江省稻田采集分离立枯丝核菌Rhizoctonia solani，通过监测、分析病原菌群体对噻呋酰胺的敏感性变化，研究了立枯丝核菌对噻呋酰胺的抗药性风险；并以戊唑醇、井冈霉素等纹枯病防治常用药剂为对照，通过田间试验评价了噻呋酰胺油悬浮剂 (OD) 对稻田天敌群落的影响。结果表明:浙江省未接触过噻呋酰胺的立枯丝核菌群体 (n = 164) 的EC₅₀值分布在 0.008~0.135 mg/L 之间，且呈近似正态单峰曲线，平均EC₅₀值为 (0.073 ± 0.005) mg/L，可作为立枯丝核菌对噻呋酰胺的敏感性基线，用于后续田间抗药性监测。接触过噻呋酰胺3年以上的立枯丝核菌群体 (n = 130) 的EC₅₀值分布在 0.009~0.126 mg/L之间，平均EC₅₀值为 (0.069 ± 0.080) mg/L，未观察到明显的敏感性下降。对稻田天敌群落影响的田间试验表明，采用12%噻呋酰胺油OD处理 7 d 后，绍兴稻田的 Shannon多样性指数和丰富度指数均显著高于清水对照（CK），而其他时间和地点均与CK无显著性差异。研究表明，采用噻呋酰胺防治水稻纹枯病的田间抗药性风险低，对稻田天敌安全性高。     

禾谷丝核菌对戊唑醇的抗性及抗药性菌系生物学特性

在含戊唑醇PDA平板培养基上，对禾谷丝核菌进行逐代处理，以诱导其抗药性菌系；比较抗性和敏感菌系的生物学特性，测定抗性菌系对其它杀菌剂的交互抗性。结果表明，选育至35代，对戊唑醇抗性达33．4倍。抗戊唑醇菌系与敏感亲本菌系相比，其菌丝生长速率、菌丝干重、菌核产生速率、菌核数及干重均存在差异。抗性菌系较敏感菌系对冬小麦幼苗的致病力减弱，但小麦返青后抗性菌系引起的发病率和严重度均较敏感菌系增强。戊唑醇抗性菌系对三唑酮、丙环唑、井冈霉素、福美双、噁醚唑和咯菌腈6种药剂分别产生了31．2、22．8、16．9、15．8、15．5和1．6倍的交互抗性。     

戊唑醇对立枯丝核菌的抑制作用及在水稻上的应用

戊唑醇是一种高效、广谱、内吸性强的三唑类杀菌剂。研究表明,在离体条件下其对立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn菌丝生长具有很强的抑制作用,EC50值为0.509 μg/mL。无论在天然培养基(LBA)还是在半组合培养基(AEA)上,戊唑醇均会抑制菌核的产生,且菌核的产量随着药剂浓度的增加而降低;虽然其对菌核的萌发无影响,但对菌核萌发后菌丝的生长有强烈的抑制作用。温室试验结果表明,立枯丝核菌菌碟经戊唑醇处理后,其对分蘖期水稻植株的致病力随着药剂浓度的提高而下降;戊唑醇可很好地被水稻叶片和根系吸收,并输送到水稻的茎部;对水稻纹枯病具有保护和治疗作用,EC50值分别为58.03和62.53 μg/mL;对立枯丝核具有较长的持效期,800 μg/mL处理水稻7 d后再接种的防效为41.46%。田间药效试验表明,43%的戊唑醇悬浮剂在有效剂量116.10 g/hm2下两次喷药后15 d的防效达71.97%。该药剂在本试验剂量范围内对水稻安全。     

江苏省大、小麦纹枯病病原学的初步研究

 1984至1986年间,采集江苏各地大、小麦纹枯病标样,分离获得丝核菌属菌株分别为23个和50个。经比较鉴定其培养特性,菌丝形态、隔膜孔器以及细胞核数目,结合菌丝融合测试,50个小麦纹枯丝核菌菌株中除2个属于立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)AG₅群外,其余均为禾谷丝核菌(R.cetea-lis Vander Hoeven),其中CAG₁、CAG₃、CAG₆、AGC₁分别为44、1、1和2个菌株。在23个大麦纹枯丝核菌菌株中,除2个属于立枯丝核菌AG₅群外,其余均为禾谷丝核菌,其中CAG₁、CAG₂、AGE的菌株分别为18、1、1、另有一菌株不属所测融合群。
人工交互接种试验表明:来源于大麦和小麦的禾谷丝核菌CAG₁群菌株对于大、小麦均有极强的致病力;立枯丝核菌AG₅群菌株次之,也有一定致病力;其他融合群的菌株致病力较弱。因此,引致江苏省大小麦纹枯病的主要病原菌为禾谷丝核菌(R.cerealis)的CAG₁群。     

禾谷丝核菌对井冈霉素的抗性风险预测

采用菌丝生长速率法,测定了4个麦区的5个禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis菌株对井冈霉素的抗药性;在含井冈霉素的PDA平板培养基上对禾谷丝核菌进行继代培养,以诱导抗药性菌系;测定了抗性菌系对其他杀菌剂的交互抗性,并比较了抗性和敏感菌系对渗透压的敏感性及药剂处理后两种菌系培养液内还原糖和可溶性蛋白的含量差异。结果表明,田间禾谷丝核菌菌株对井冈霉素分别产生了7.26、7.75、10.46、14.92和23.31倍的抗性。室内继代培养36代,禾谷丝核菌对井冈霉素的抗性达49.24倍,形成了抗井冈霉素菌系。抗井冈霉素菌系对 口 恶 醚唑、福美双、三唑酮、丙环唑、戊唑醇和咯菌腈分别产生了48.58、21.78、17.62、10.95、2.55和1.78倍的交互抗性。抗性菌系在较低和较高渗透压下其生长抑制率均大于敏感菌系,用井冈霉素处理抗性和敏感菌系后,其体内的电解质都严重外渗,且抗性菌系在10 h 内的外渗量明显大于敏感菌系。     

Whole-Cell Fatty Acid Composition to Characterize and Differentiate Isolates of Rhizoctonia Species Associated with Turfgrass Diseases in Japan

Cellular fatty acids were analyzed to characterize and differentiate 34 isolates of Rhizoctonia species representing binucleate Rhizoctonia AG-D (I), AG-D (II), R. solani AG 2-2 IIIB, AG 2-2 LP, R. circinata var. circinata and var. oryzae associated with turfgrass diseases in Japan. Myristic, pentadecanoic, palmitic, palmitoleic, stearic, oleic, linoleic and linolenic acids were consistently present in varying quantities in all isolates. Heptadecanoic and 9-heptadecenoic acids were present in isolates of Rhizoctonia AG-D (I), AG-D (II), R. solani AG 2-2 IIIB and AG 2-2 LP but not in isolates of R. circinata var. circinata and var. oryzae. Palmitic, oleic and linoleic acids were the major fatty acids found, constituting 88.30-98.37% of the whole-cell fatty acid content. The remaining fatty acids were present in smaller amounts. Isolates within a single group were closely clustered, whereas isolates from different groups were clearly distinguishable based on average linkage cluster analysis of cellular fatty acids. Principal component analysis, based on all fatty acids detected, confirmed the distinct separation of isolates representing the six groups of Rhizoctonia species obtained from turfgrasses. These results suggested that fatty acid analysis is useful for the characterization and differentiation of isolates of Rhizoctonia species associated with turfgrass diseases. Received 21 May 2001/ Accepted in revised form 28 September 2001     

辽宁省无梗五加根腐病发生初报

通过对丹东地区的多次调查,发现此病害发生严重。无梗五加根腐病在4月初开始出现,5月份为发生盛期。本文对无梗五加根腐病进行了症状描述,并对采集的病样进行病原菌的分离、纯化。对分离得到的菌株按照柯赫氏法则进行致病性测定,结果表明,此病害是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solaniKühn)引起的。针对此病害的发生特点,提出了相应的防治措施。     

中国东北地区水稻纹枯病病原菌种类及融合群的分子鉴定

为明确中国东北地区水稻纹枯病病原菌种类及融合群的归属情况, 2015－2017年从黑龙江省、吉林省和辽宁省的17个水稻主产区采集水稻纹枯病标样, 分离获得水稻纹枯病菌214株, 运用水稻纹枯病菌的不同病原菌及融合群的特异性引物对214株水稻纹枯病菌进行病原菌种类和融合群鉴定, 并利用rDNA内转录间隔区(ITS)序列, 对供试水稻丝核菌的融合群归属进行了分析。结果表明:供试214株水稻纹枯病菌分属于茄丝核菌Rhizoctonia solani和水稻丝核菌Rhizoctonia oryzae-sativae, 菌株数分别为198株和16株, 占比分别为92.52%和7.48%。茄丝核菌菌株分属于2个融合群, 分别为AG1-IA和AG4, 菌株数分别为191株和7株, 占比分别为96.46%和3.54%。水稻丝核菌菌株均属于AG-Bb融合群, 菌株数为16株。不同年份水稻纹枯病的病原菌种类及融合群出现的频率和地域分布无明显变化, 而不同地域间水稻纹枯病病原菌的种类及融合群具有明显的分化特征, AG1-IA融合群在中国东北三省各个水稻产区均有分布且均为优势融合群, AG4融合群在辽宁省盘锦市出现频率最高, 水稻丝核菌AG-Bb融合群在吉林省吉林市、通化市和梅河口市出现频率最高。     

小麦纹枯病菌的分子检测

小麦茎基部可寄居多种真菌,并可导致发褐、坏死等症状,与小麦纹枯病相混淆.为准确诊断小麦纹枯病,根据江苏省小麦茎基部常见寄居菌禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、长蠕孢菌Helminthosporium spp.、交链孢菌Alternaria spp.、小麦全蚀病菌Gaeumannomyces graminis var.tritici和禾谷镰刀菌Fsarium graminearum rDNA的ITS区段序列差别,设计合成了2对特异性扩增引物(DNF77 DNR554,DNF81 DNR564)用于小麦纹枯病菌检测.2对引物均能从小麦纹枯病菌株扩增到特异性的分子片段,说明设计的特异性引物可以用来检测小麦纹枯病菌.采集田间具有小麦纹枯病症状、茎基部变褐及健康麦苗,进行病原菌分离,同时提取这些麦苗茎基部DNA,利用上述2对引物进行扩增.结果表明,仅从能分离到禾谷丝核菌的麦组织中扩增到约480bp的特异性条带.说明设计的特异性引物可以对田间小麦纹枯病进行早期、快速分子诊断.     

植物病原真菌对甲基立枯磷的抗药性及风险研究

通过对人工获得的抗甲基立枯磷菌株的抗药水平、在培养基上的生长速度、致病力、对其它杀菌剂的敏感性测定以及对菌核的观察和用药条件等方面分析, 在实验室内进行了植物病原真菌对甲基立枯磷的抗药性风险研究。结果显示, 不同的病原菌具有不同的抗药性。抗甲基立枯磷的水稻纹枯病菌菌株对甲基立枯磷的抗药性较强、抗药性风险大; 小麦纹枯病菌和油菜菌核病菌抗药菌株抗药性较弱、风险小。抗甲基立枯磷的水稻纹枯病菌对菌核净具有高水平正交互抗性; 抗甲基立枯磷的小麦纹枯病菌对菌核净和扑海因有中等程度正交互抗性; 这两种真菌的抗药菌株对五氯硝基苯的正交互抗性弱, 对烯唑醇和异稻瘟净没有交互抗性。甲基立枯磷与二甲酰亚氨类和芳烃类杀菌剂具有相似的抑菌作用。     

戊唑醇对小麦纹枯病菌的抑菌作用

戊唑醇对小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis具有极高的抑菌作用,EC50值仅为0.048 9 μg/mL。经戊唑醇处理后,小麦纹枯病菌除菌体形态发生显著变化外,致病力亦随处理浓度的提高而明显减弱。戊唑醇对小麦纹枯病菌的菌核萌发无抑制作用,但对菌体的线性生长有强烈的抑制活性。菌体经戊唑醇处理后,发生电解质渗漏。     

立枯丝核菌侵染玉米的研究

 用获自水稻及玉米的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Khn) AG-11A接种玉米发生典型纹枯症状,其致病力显著强于AG-4。玉米拔节期,上位叶鞘抗性较强,抽雄及抽丝期抗性减弱,下位叶鞘无论在拔节期或抽雄、抽丝期,均较上位叶鞘感病。接种玉米后8小时,形成侵染垫及附着胞,从这些结构上形成侵入钉侵入,AG-4侵染上位叶鞘时,常以菌丝直接穿透表皮或从气孔侵入。在去掉菌体的叶鞘表面,发现有周边光滑或稍破损的侵入孔。接种后12小时,在叶鞘细胞中发现菌丝,它们在穿过细胞壁进入邻近细胞时,明显变细。接种后16小时,新生出的菌丝从气孔成丛出现。     

毒素在稻纹枯病菌致病中的作用分析

用水稻胚根生长抑制法测定了10个稻纹枯病菌菌株在寄主体外产生毒素的能力,发现不同菌株的产毒能力各不相同,且产毒量差异极显著。用水稻离体叶接种法测定了这10个菌株的致病力,结果表明：不同菌株的致病力也各不相同,且差异极显著。相关分析发现,菌株的体外产毒能力与致病力高度正相关（R =0.915 2）。这些结果表明：稻纹枯病菌毒素的分泌可能在其致病过程中起重要作用。     

Efficacy of Hypovirulent Binucleate Rhizoctonia sp. to Control Banded Leaf and Sheath Blight in Corn

Water agar, artificially infested soil and leaf sheath inoculation methods were used to assess the suitable time of application, varietal host response and persistence of Rhv7, a hypovirulent, binucleate Rhizoctonia collected from soil in the Philippines, to effectively control virulent Rhizoctonia solani AG1-IA isolate RS35 on corn. With the water agar method, prior inoculation (2 to 3 days) with the biocontrol agent is essential to achieve maximum control of the pathogen. Disease protection was increased from 23 to 70% as the pre-incubation time of Rhv7 prior to the challenge inoculation with virulent isolate was lengthened from 0 to 3 days. Disease severity and incidence of banded leaf and sheath blight (BLSB) on the three corn hybrids were also suppressed in artificially infested soil. In leaf sheath inoculation, the suppressive ability of Rhv7 against BLSB on corn persisted during lesion expansion. This suppression was expressed as slower disease progress in plants with Rhv7 than in plants without Rhv7. Early and timely brace root formation that detached infected sheaths, also aided in reducing the number of diseased plants in Rhv7-treated plots at the final observation. Mycelial growth activity of RS35 was reduced when corn plants were pre-inoculated with Rhv7 before challenge even if there was no contact detected between Rhv7 and RS35, which suggests that Rhv7 protects corn against BLSB by induced resistance. The hypovirulent, binucleate Rhizoctonia Rhv7 strain effectively controlled R. solani AG1-IA isolate RS-35 in corn. Received 30 August 1990/ Accepted in revised form 25 October 1999     

水稻纹枯病菌毒素致病机理研究

 Crude toxin of Rhizoctonia solani(RS-toxin) caused obvious damage to the cell of rice.The permeability of cell membrane changed and phosphorous permeated exterior when the sheath and leaves were treated with RS-toxin.After 12 hours treated with RS-toxin,chloroplast membrane was damaged and lamella was relaxed and swollen,with some cavities in the chloroplast.Treated with RS-toxin for 36 hours,the chloroplast was disassembled,other organelles became unclear and disappeared such as mitochondria,and some parts of the cell wall thinned and loosed.Treated with 10 times diluted RS-toxin,the chlorophyll content in the rice plants was reduced over 85%.With higher RS-toxin concentration and longer treatment time,the lower the chlorophyll content became.