野生与养殖银鲳消化道菌群结构中产酶菌的对比分析

实验对野生和养殖银鲳胃、幽门盲囊、前肠、中肠、后肠菌群结构进行了定性对比分析,并对产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶的菌株进行了鉴定。结果发现,野生和养殖种群的消化道菌群结构存在较大差异,且同一种群消化道各部分之间菌群结构也存在较大差异。尽管养殖和野生银鲳均在幽门盲囊中具有最多的可培养细菌菌株,但野生银鲳消化道内主要菌群为嗜冷菌属(Psychrobacter)和Pseudochrobactrum,养殖银鲳消化道主要菌群为不动杆菌属(Acinetobacter)和假单孢菌属(Pseudomonas),两种群共有细菌仅一株,即Psychrobacter piscatorii strain VSD503,但其分别存在于野生与养殖种群银鲳消化道的不同部位。在产酶菌株筛选中发现,野生银鲳消化道内分离到16株产酶菌,其中44%可培养菌能产蛋白酶,56%能产淀粉酶,11%能产脂肪酶,56%能产纤维素酶,部分菌株可产2株以上的消化酶,其中产3种以上酶的菌株有5株,且产酶量丰富。相对于野生银鲳,养殖银鲳消化道内分离到22株产酶菌,主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,70%可培养菌可产蛋白酶,21%可产淀粉酶,仅Bacillus thuringiensis strain VITGS可产纤维素酶,无一株菌产脂肪酶,其中只有Bacillus thuringiensis strain VITGS产3种酶但产酶量相对较少。研究可为银鲳人工养殖中潜在益生菌的筛选提供理论依据。     

黄鳝肠道细菌及产酶菌株的研究

从健康的黄鳝肠道中分离出细菌32株.革兰氏染色结果表明,8株为革兰氏阳性菌,24株为革兰氏阴性菌.研究了其产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶的能力.结果表明,有53.13%的菌株能分泌蛋白酶,43.75%的菌株能分泌脂肪酶,34.38%的菌株能分泌淀粉酶,21.88%的菌株能分泌纤维素酶.其中产4种酶的有1株,产3种酶的有5株,产2种酶的有9株,产1种酶的有12株,不产酶的仅有5株.产酶菌株的比例高达84.38%.     

近江牡蛎养殖水体中细菌产酶能力的研究

为了解近江牡蛎养殖水体中细菌的产酶特性 ,筛选出有应用潜力的有益菌 ,本实验从近江牡蛎养殖水体中分离到 32株菌。革兰氏染色表明 ,10株为革兰氏阳性菌 ,2 2株革兰氏阴性菌。在此基础上研究了它们蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的产酶能力。结果表明 ,6 1.9% ( 17株 )的菌株能分泌蛋白酶 ,71.9% ( 2 3株 )菌株能分泌脂肪酶或淀粉酶 ,34.4 % ( 11株 )的菌株产纤维素酶。这些产酶菌株均以革兰氏阴性菌为主。在这 32株菌中 ,产四种酶的有 5株菌 ,产三种酶的有 9株菌 ,产两种酶的有 9株菌 ,产一种酶的有 9株菌 ,也就是说 ,所有的菌株都能产酶。由此表明近江牡蛎养殖水体中细菌在该环境物质循环中的重要地位。     

工厂化循环水养殖条件下云纹石斑鱼消化道产酶菌的分离鉴定

采用16S r DNA-PCR菌群分离鉴定的方法,对循环水养殖条件下云纹石斑鱼(Epinehelus moara)幼鱼的胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠的菌群结构进行了鉴定,用产酶菌筛选培养法对产消化酶的菌株进行了分离鉴定,并测试了各菌株消化酶的活力。研究发现,云纹石斑鱼幼鱼消化道内可培养的主要菌群为假单胞菌属(Pseudomonas)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和葡萄球菌属(Staphylococcus),其中产消化酶的菌株占可培养菌的55.6%。在产酶菌中,同一株菌产3种酶的有5株;产2种酶的有9株;中肠和后肠的菌株数最为丰富,胃次之,幽门盲囊和前肠菌群种类较少;产脂肪酶的菌株都集中在中肠。产消化酶的菌株主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,且产酶量丰富,产蛋白酶活力最高达(87.732±1.134)U/m L;淀粉酶活力为(77.176±0.599)~(73.458±0.574)U/m L;产纤维素酶的菌仅一株,且酶活力较低。分析得知,消化道的菌群结构直接影响了外源性消化酶的种类与活性。本研究为工厂化循环水养殖条件下产酶有益菌的筛选提供了理论依据。     

野生银鲳消化道内潜在产酶益生菌产酶条件的初步研究

采用酶学分析法研究了单因子(温度、p H、发酵时间)变化对野生银鲳(Pampus argenteus)消化道内同时分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶中两种以上的5株菌株产酶活力的影响,即通过测定酶活力的大小找到每株菌最适产酶条件范围。结果显示,在温度31~37℃、p H 7~8、发酵时间3 d的条件下,5株产酶菌的蛋白酶活力最大;在不同温度和p H条件下,5菌株分泌的淀粉酶活力各不相同,但都随发酵时间的延长而增大,3~5 d达最大值;4株分泌纤维素酶的菌株纤维素酶活力受环境影响总体变化不大,在温度31~37℃、酸性条件(p H 5)和发酵时间4 d的条件下为活力最大;2株分泌脂肪酶的菌株在28~31℃、中性(p H 7)、发酵时间1 d条件下其脂肪酶活力最大,最大可接近180 U·m L-1,但活力都随发酵时间而显著下降。结果表明,不同产酶菌所分泌的消化酶活力所需的最适条件有很大不同,了解和掌握银鲳肠道中菌群的产酶条件,对开发潜在产酶益生菌有着积极的作用。     

近江牡蛎肠道厌氧菌及其产酶能力的研究

为了解近江牡蛎肠道厌氧菌在食饵消化过程中的作用，为微生态饲用添加剂的开发研究打下基础，从近江牡蛎肠道中分离出8株厌氧菌，其中有5株为革兰氏阳性菌。并研究了它们蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶的产酶能力，结果表明仅有3株菌具有产酶能力：2株菌能分泌脂肪酶，1株菌能分泌蛋白酶。由此可见．厌氧菌在分泌消化酶、消化食饵中所起的作用不大。     

尼罗罗非鱼肠道中产酶菌株的研究

从尼罗罗非鱼肠道中分离出41株好氧菌和6株厌氧菌。好氧菌中31株为革兰氏阴性菌，10株革兰氏阳性菌；厌氧菌中，革兰氏阳性菌5株，革兰氏阴性菌1株。41株好氧菌中有31．7％的菌株能分泌蛋白酶(13株菌)；有39．0％的菌株能分泌脂肪酶(16株菌)；有17．1％的菌株能产淀粉酶(7株菌)，有36．6％的菌株能产纤维素酶(15株菌)。其中，产3种酶的有7株菌，产2种酶的有9株菌，产1种酶的有12株菌，不产酶的有13株菌。好氧菌在尼罗罗非鱼消化食饵过程所起的作用大；6株厌氧菌中仅有1株菌能产脂肪酶和纤维素酶，对尼罗罗非鱼消化食饵所起作用相对不大。优化罗非鱼肠道中微生物菌群的结构很有必要。     

大闸蟹肠道中产酶菌株及其胞外酶的研究

从健康成年大闸蟹肠道中分离出细菌36株。革兰氏染色结果表明，11株为革兰氏阳性菌，25株为革兰氏阴性菌。52．8％的菌株能分泌蛋白酶，44．4％的菌株能分泌脂肪酶，58．3％的菌株能分泌淀粉酶，41．7％的菌株能分泌纤维素酶。36株菌均能产酶，其中产4种酶的有1株，产3种酶的有9株，产2种酶的有14株。由于这些产酶菌株的作用，使得大闸蟹的肠道菌群能够维持平衡，提高饲料的消化利用率，促进大闸蟹生长。     

草鱼肠道芽孢杆菌的鉴定及产酶能力分析

从100 g左右的健康草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道中分离出3株疑似芽孢杆菌(Bacillus)菌株(G1、G2、G3),并通过对其进行生理生化特征、16S rDNA全序列和产酶能力的分析,筛选出1株高产酶能力的益生菌株。结果显示:G1、G2和G3菌株与枯草芽孢杆菌在16S rDNA序列相似性≥99%的水平上聚为同一分支,结合形态观察和生理生化特征,最终鉴定G1、G2和G3菌株均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);以水解圈直径/菌落直径比值评定了G1、G2和G3菌株的产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶的能力,其中G1菌株产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶能力(比值分别为2.9、2.2和3.3)均高于G2、G3菌株,具有作为益生菌的潜力。     

杂交鲍稚鲍"漫爬病"潜在病原菌胞外产物的分析及种类鉴定

从发病的杂交鲍(皱纹盘鲍×盘鲍)稚鲍中共分离27株菌株,并对其分泌胞外产物(包括酪蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素)的能力进行了分析。试验结果表明,具有分泌胞外蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素能力的菌株分别占总菌株数的81.5%(22/27)、74.1%(20/27)、18.5%(5/27)、0%(0/27)、11.1%(3/27)、29.6%(8/27)。其中,1#、14#菌株具有很强的产胞外蛋白酶能力,而明胶酶的最大分泌者为2#、7#、9#、17#菌株,淀粉酶的为11#、14#菌株,磷脂酶的为11#、15#菌株,溶血素的为菌株10#、21#。此外,10#、11#、15#菌株可同时分泌4种胞外产物,而12#、14#、18#、21#、23#、24#菌株可同时分泌3种胞外产物。综合考虑每一种胞外酶的潜在致病作用,以及菌株分泌多种胞外酶的能力,初步确认11株菌为潜在的致病菌:1#、2#、7#、9#、10#、11#、12#、14#、15#、17#、21#。用API条带法对它们进行了种类鉴定,11株菌中巴斯德氏菌和假单胞菌所占的比例分别为45.5%、27.3%。     

银鲫消化酶活性与pH值的关系

实验结果表明：在肝胰脏、前肠、中肠、后肠，胰蛋白酶的最适pH值分别是7．5、7．5、8．5、8．0；脂肪酶的最适pH值均为7．5。淀粉酶的最适pH值均为6．5；纤维素酶在肝胰脏的最适pH值是4．8，在前肠、中肠、后肠均有两个峰值，分别为3．6和4．8。说明胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶分别适宜在弱碱性、弱碱性、弱酸性和酸性条件下发挥酶的活力。     

卵形鲳鲶消化酶活性的研究I．成鱼和幼鱼消化酶活性在不同消化器官中的分布及其比较

比较研究了卯形鲳够（Trachinotus ovatus）成鱼和幼鱼阶段消化酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶）在不同消化器官中的活性。结果表明：1）成鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃〉前肠〉中肠〉幽门盲囊〉后肠〉肝；淀粉酶活性为前肠〉后肠〉幽门盲囊〉中肠〉肝〉胃；脂肪酶活性为前肠〉中肠〉后肠〉幽门盲囊〉肝〉胃。2）幼鱼蛋白酶在不同消化器官中的活性大小依次为胃〉肠〉幽门盲囊〉肝；淀粉酶活性为肠〉幽门盲囊〉肝〉胃；脂肪酶活性为肠〉幽门盲囊〉肝〉胃。3）成鱼不同消化器官中蛋白酶和淀粉酶的活性均小于幼鱼，成鱼胃和幽门盲囊的淀粉酶活性与幼鱼的差异显著；幼鱼胃脂肪酶活性大于成鱼，但其他器官的活性均小于成鱼。卵形鲳鳕幼鱼不同消化器官中的3种消化酶活性大小顺序与成鱼基本相似。     

不同发育时期月鳢消化酶活性的变化

对月鳢稚鱼、幼鱼和成鱼的主要消化酶活性及分布进行了研究，结果如下：①随着鱼体发育和生长，月鳢消化系统各器官组织的各种消化酶活性不断地增强，尤其是蛋白酶和脂肪酶活性的发育更为明显。②月鳢幼鱼蛋白酶活性以肠组织最大，肝胰脏次之，胃组织最小，且肠组织和肝胰脏中该酶活性显著高于胃组织；胰蛋白酶活性以肝胰脏最大，胃组织和肠组织均表现较小；淀粉酶活性和脂肪酶活性均以胃组织最大，且显著大于肠组织和肝胰脏。③月鳢成鱼蛋白酶活性以中肠粘膜组织和后肠粘膜组织最高，前肠粘膜和肝胰脏次之，胃粘膜最低；胰蛋白酶活性以中肠粘膜组织和前肠粘膜最高，胃粘膜组织次之，肝胰脏小于胃粘膜，后肠粘膜组织的胰蛋白酶活性最小；淀粉酶活性以后肠粘膜组织和中肠粘膜组织最大，肝胰脏次之，胃粘膜组织和前肠粘膜组织最小；脂肪酶活性以胃粘膜组织最大，其他器官组织该酶活性均表现较小。     

Culture-independent characterization of the autochthonous gut microbiota of grouper Epinephelus coioides following the administration of probiotic Enterococcus faecium

Probiotics have been applied extensively in aquaculture and demonstrated a range of benefits, but the mechanisms mediating such responses remain largely unknown. A clear illustration of the effect of probiotics on the autochthonous gut microbiota is the first step in understanding the underlying mechanisms. In this study, the autochthonous microbiota in the foregut, midgut and hindgut of juvenile grouper Epinephelus coioides following the dietary administration of probiotic Enterococcus faecium MM4 for 60?days were assessed using polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) with subsequent sequencing analysis. Generally similar DGGE patterns, with 15 common bands, were observed in the foregut, midgut and hindgut of fish fed the probiotic diet or the control diet, while more visible bands were present in fish fed the probiotic diet. The similarity dendrogram showed that the foregut samples formed an independent cluster distinctly different from the midgut and hindgut samples, but a high similarity (81.4%) was observed among the three gut sections. Significantly increased species richness and Shannon index were observed in the midgut and hindgut samples in the probiotic group compared with the control group, which suggested that probiotic E. faecium could elevate the autochthonous microbial diversity in the midgut and hindgut. Sequences analysis showed that probiotic E. faecium stimulated the growth of some unidentified bacteria and potentially beneficial bacteria, while exerted no apparent effect on potentially harmful Staphylococcus saprophyticus.     

Effects of rearing temperature and dietary short‐chain fructooligosaccharides supplementation on allochthonous gut microbiota,digestive enzymes activities and intestine health of turbot (Scophthalmus maximus L.) juveniles

The gut microbiomes of fish play important roles in host development, digestion and health. Evidence suggests that abiotic factors, such as diet and rearing temperature, could affect fish gut microbiota. In this study, the effect of dietary short‐chain fructooligosaccharides (scFOS) on turbot intestinal health, microbiota and digestive enzymes was investigated at two rearing temperatures: 15 and 20 °C. Four practical diets were supplemented with scFOS at 0, 5, 10 and 20 g kg^?1. scFOS did not affect fish performance. PCR‐DGGE did not show differences in bacterial profiles between dietary treatments; however, the number of operational taxonomic units, richness and diversity were higher at 20 °C. Enzyme activities in the foregut were not affected by rearing temperature, while in the hindgut, enzyme activities were higher at 15 °C. Total alkaline protease, α‐amylase and lipase activities in the foregut were higher in fish fed 20 g kg^?1 scFOS. Prebiotic supplementation had no effect on hindgut α‐amylase activity, while lipase activity of fish reared at 20 °C was higher in fish fed diet with 5 g kg^?1 scFOS. No differences were observed in intestinal morphology. This was the first study to simultaneously evaluate the effect of dietary prebiotic level and rearing temperature on fish intestinal microbiota and health.     

α-酮戊二酸对松浦镜鲤肠道形态与功能的影响

本试验旨在研究不同蛋白源饲料中添加α-酮戊二酸(AKG)对松浦镜鲤肠道形态与功能的影响。在水温23℃下,将初始体质量为(217.93±0.78)g的松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu 400尾,随机分成4组,每组5个重复,每个重复20尾鱼,饲养在控温循环水系统中,投喂4种在不同蛋白源的等氮等脂饲料中添加不同剂量的α-酮戊二酸(AKG)的饲料10周,即饲料1(44%豆粕+0%AKG)、饲料2(44%豆粕+1.5%AKG)、饲料3(30%豆粕+10%鱼粉+0%AKG)、饲料4(30%豆粕+10%鱼粉+1.5%AKG),饲料中蛋白质和脂肪水平分别为28%和5.1%。结果表明:不同蛋白源饲料中添加AKG能显著提高松浦镜鲤后肠皱襞高度、前肠肌层厚度和前肠Na+,K+-ATP酶活性(P0.05);蛋白源和AKG对肠道形态指标和Na+,K+-ATP酶活性无显著交互作用(P0.05);饲料中蛋白源添加AKG能显著提高松浦镜鲤前肠和中肠蛋白酶、脂肪酶活性(P0.05),蛋白源和AKG对后肠蛋白酶活性具有显著交互作用(P0.05)。综上所述,饲料中添加1.5%AKG可以促进松浦镜鲤肠道发育,增强肠道消化酶活性。     

军曹鱼消化系统的形态及组织学研究

利用活体解剖和光镜技术对军曹鱼Rachycentron canadum消化系统进行形态及组织学研究。结果显示，军曹鱼消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠几部分组成。口咽腔大，粘膜上皮为复层鳞状上皮，内含少量杯状细胞。食道很短，但上皮包括复层鳞状上皮区和单层柱状上皮区。胃膨大，呈Y形，在贵门和幽门部可观测到杯状细胞，胃体粘膜层下有大量的胃腺细胞。幽门盲囊发达，肠短但分3部分，前肠、中肠和后肠，肠道系数为0．43，肠道由前向后杯状细胞和粘膜皱褶不断减少。消化腺包括肝脏和胰腺，肝小叶分界不明显，肝细胞内脂肪含量丰富，胰腺属于散在性的，其外分泌部有许多腺泡组成，胰岛分散于外分泌部间。     

温度对施氏鲟幼鱼摄食、生长和肠道消化酶活性的影响

研究不同养殖温度(15℃、18℃、21℃、24℃、27℃)对施氏鲟(Acipenser schrenckii)幼鱼摄食、生长和肠道消化酶活性的影响。结果表明,在15～24℃范围内,幼鱼的特定生长率(SGR)和相对增重率(RWG)随温度的升高而显著增加(P<0.05),均在24℃时达到最高值;随着温度升高,其饵料系数(FC)先降低后升高(P<0.05),且在24℃时达到最小值;此外,摄食率(FR)随着温度的升高而显著升高(P<0.05),其不同温度组的生长速度由高到低依次为24℃、21℃、27℃、18℃、15℃组。温度对幼鱼前肠蛋白酶活性影响显著,24℃组和27℃组前肠的蛋白酶活性显著低于15℃组(P<0.05),而温度对中肠和后肠蛋白酶活性则无显著性影响(P>0.05);温度对幼鱼肠道脂肪酶活性无显著性影响(P>0.05),各温度组前肠脂肪酶活性均高于中肠和后肠;温度对幼鱼肠道淀粉酶活性无显著性影响(P>0.05)。综合以上结果认为,施氏鲟幼鱼快速生长的适宜温度范围为21～24℃,在此温度范围内施氏鲟幼鱼可获得最大生长率和存活率。     

不同生长阶段宝石鲈消化酶活性的初步研究

测定了出膜后30 d、70 d、120 d至成鱼4种规格,体重分别为(2.29±0.49)g、(23.16±4.23)g、(88.06±6.73)g、(270.26±9.17)g的宝石鲈(Scorturm barcoo)胃、肝胰脏、前肠、中肠、后肠的淀粉酶、胃蛋白酶和脂肪酶的活性。结果表明,随着宝石鲈的生长,淀粉酶在各生长阶段活力均很小,肝胰脏、前肠和后肠中的淀粉酶活力表现出逐渐增大的趋势;胃中的胃蛋白酶活性表现为逐渐增高,至规格3后胃蛋白酶活性趋于稳定;肠道是脂肪消化的主要场所,其中前肠脂肪酶变化趋势表现为先上升后下降,在前肠脂肪酶下降后中肠脂肪酶升高,起到了继续消化脂肪的作用。     

兰州鲇对4种饲料原料的离体消化率和酶解能力

采用离体消化法,测定了离体状态下兰州鲇(Silurus lanzhouensis)(278.6±26.7)g的胃、肠道及肝胰脏对鱼粉、豆粕、菜粕和棉粕等4种饲料原料的消化率和酶解速度。结果显示:离体状态下兰州鲇消化道各部位的消化能力和酶解能力依次为前肠、中肠、肝胰脏、后肠和胃。离体状态下,胃、肠道及肝胰脏对鱼粉的干物质和粗蛋白的消化率最高,其次为豆粕、菜粕和棉粕(P<0.05);对鱼粉的酶解速度最高,其次为豆粕、菜粕和棉粕。结果表明,兰州鲇前肠和中肠消化能力较强,饲料的消化主要集中在这两个部位;在离体状态下,鱼粉的蛋白易于被各部位酶解产生氨基酸,比其他3种饲料更易被兰州鲇吸收。