DNA疫苗及其在水产养殖中的应用研究进展

DNA疫苗是近年来发展起来的用于防治动物疾病的新型药物,被称作第三代疫苗。DNA疫苗可导致体液免疫和细胞介导免疫两种免疫类型。其基本的成分是质粒DNA,由5个部分构成：1）细菌的复制起点;2）抗性选择基因;3）编码抗原蛋白或多肽的基因;4）转录调控因子;5）mRNA的转录终止信号。本文介绍了DNA疫苗的作用原理、免疫方式以及DNA疫苗在水产养殖业中的应用研究进展。     

牙鲆淋巴囊肿病核酸疫苗的免疫效果评价

<正>核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入动物体内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。动物实验证明,在合适的条件下,DNA接种后既能产生细胞免疫又能引起体液免疫,核酸疫苗可诱导机体产生全面的免疫应答,     

弗氏柠檬酸杆菌感染诱导斑马鱼皮肤免疫相关基因的差异表达

从草鱼肠道中分离到1株细菌,通过形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析等鉴定为弗氏柠檬酸杆菌,动物试验结果表明,该菌对斑马鱼有致病性;从感染诱导的斑马鱼皮肤组织中提取总RNA,经Biotin荧光标记与拥有15 617个cDNA片段的斑马鱼基因芯片(affymetrix)杂交筛选分析,获得斑马鱼皮肤免疫相关差异表达基因88个,其中有74个上调表达基因和14个下调表达基因;进一步根据基因功能聚类(GO)分析,初步将88个差异表达基因分为8个生物学功能,其中主要参与补体激活、急性期反应、应激防御反应、细胞凋亡、抗原加工提呈、细胞迁移粘附、凝血因子和血小板激活等免疫应答过程;同时进行信号通路(pathway)分析,结果表明MAPK(hsp70、daxx、nfkbiab)、JAK/STAT(ifn1)和TGF-β(thbs1)等信号通路参与斑马鱼皮肤抗弗氏柠檬酸杆菌感染免疫应答。采用基因芯片方法筛选与鱼类皮肤免疫相关的功能基因,为将来以斑马鱼为模型研究鱼类皮肤局部免疫应答的分子机制提供科学依据。     

细胞因子作为分子佐剂在基因免疫中的作用

细胞因子是体内免疫细胞或非免疫细胞产生的一组具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子,在体内能激活和调节免疫活性细胞,对免疫应答的产生和调节具有重要作用,目前应用细胞因子作为免疫佐剂在基因治疗中的研究已有许多报道,本文将IL-2、IL-12和GM-CSF作为分子佐剂在基因免疫中的作用作一综述。     

鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。     

溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护研究

为研究溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护作用,实验构建了重组真核表达质粒pcDNA-flaC并将该质粒肌肉注射红笛鲷,采用PCR、RT-PCR、ELISA和攻毒试验等方法检测了该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达和对红笛鲷的免疫保护.PCR结果显示,免疫接种7和28 d,注射点周围肌肉、鳃、肾脏、肝脏和脾脏都存在质粒分布;RT-PCR结果显示,免疫接种后第7天、14天和28天,红笛鲷不同组织内均有目的基因表达.ELISA结果表明,鱼血清内产生了抗FlaC蛋白的抗体,表明DNA疫苗免疫后鱼体表达了目的蛋白,并诱导产生了相应抗体.攻毒实验表明,免疫后的红笛鲷能较好地抵抗致病性溶藻弧菌的感染.结果表明,质粒pcDNA-flaC可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的疫苗候选物.     

鱼类DNA疫苗的研究进展

ＤＮＡ疫苗也称核酸疫苗、基因疫苗 ,是将含有编码保护性抗原蛋白的基因序列和表达所必需调控元件的质粒ＤＮＡ直接导入动物组织 ,使抗原蛋白经过内源性表达并递呈给免疫系统 ,诱发机体产生特异性体液免疫和细胞免疫应答 ,形成对相应病原的免疫保护作用 ,用于免疫的质粒ＤＮＡ称为ＤＮＡ疫苗。它不同于传统的弱毒疫苗、灭活疫苗及亚单位苗 ,是带有特异性抗原基因的真核表达质粒 ,是继病原体疫苗、亚单位疫苗之后的第 3代疫苗[1] 。ＤＮＡ疫苗在人体和哺乳动物研究中已取得一定进展 ,部分疫苗已进入临床试验阶段[2 ] 。而鱼类ＤＮＡ疫苗的研…     

鸡MHC-BF区基因在抗病中的研究进展

鸡MHC-BF基因是鸡主要组织相容性复合体(MHC)的一个亚区,它所编码的细胞表面糖蛋白抗原,在机体的免疫应答和基因调控等方面具有极其重要的作用。特别是MHC-BF亚区基因的多态性,对鸡的马立克氏病、鸡球虫病、禽白血病、劳氏肉瘤病等病的抗病性有重大影响,对鸡MHC-BF区基因的多样性及在抗病中研究现状进行了综述。     

渔用疫苗的分类概况

无论人体或者动物体,免疫的目的是通过接种免疫源性物质诱导免疫应答产生抗体或免疫活性细胞来保护动物,并且产生免疫记忆。当外界有菌毒感染时,由于机体内存在一定的免疫力或诱导快速的记忆应答,而对特异性病原产生极大的抵抗能力,从而避免疾病暴发引起的损失。     

罗非鱼免疫前后白细胞cDNA差减文库的构建及其表达序列标签初步分析

为筛选得到罗非鱼白细胞免疫相关基因，促进鱼类免疫防治进展，本研究应用抑制性差减杂交（SSH）技术成功构建了罗非鱼链球菌疫苗免疫前后正、反两个白细胞eDNA差减文库，富集了免疫过程中表达谱发生变化的白细胞基因。随机挑选阳性克隆PCR检测。显示插入片段在300～750bp。正反文库各随机挑选300个阳性克隆（共600个克隆）进行测序及EST初步分析。正库筛选得到18个免疫期间袁达丰度上调基因，其中2个与罗非鱼已知基因具有相似性，6个与其他鱼类已知基因相似，其他6个与其他物种已知基因具有相似性，4个为未知新基因。负库筛选得到22个免疫期间表达丰度下调的基因，其中4个与罗非鱼已知基因具有相似性，5个与其他鱼类已知基因相似，6个与其他物种已知基因具有相似性，7个为未知新基因。随着序列的进一步分析及利用RACE等技术得到罗非鱼抗菌或免疫相关全基因，深入开展鱼类功能基因研究奠定良好的基础。     

DNA疫苗及其在水产养殖业中的应用

DNA疫苗是一种新型疫苗,它能够诱发体液和细胞介导的免疫应答。本文对DNA疫苗的结构组成、免疫机制、安全性及在水产养殖中的应用进行了综述,并提出了今后在DNA疫苗推广应用方面需要注意的问题和亟待改进的方面。     

我国水产动物免疫研究的现状与发展（下）

2水产动物免疫研究中存在的主要问题及其对策 水产动物免疫学和兽医免疫学同医学免疫学一样是免疫学的分枝学科，其基本研究内容是一致的，但各有侧重，前两者侧重于免疫诊断和免疫防治，后者侧重于临床免疫学。目前医学免疫学和兽医免疫学的发展十分迅速，对水产动物免疫学发展有重要的借鉴和促进作用，但水产动物是包括鱼、虾、蟹、贝类、两栖类和爬行类等进化程度互不相同的一系列动物，其免疫系统的进化水平和免疫应答机制有较大差别，在研究内容和方法上既具有共性也有自身特点。如果仅采用免疫学的一般实验方法来研究水产动物免疫学…     

佐剂对DNA疫苗的影响

DNA疫苗是近年来发展较为迅速的一类生物制剂,它能诱导动物机体产生持久的体液免疫和细胞免疫,其在抗病毒、细菌和寄生虫的感染方面起到了重要作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效果并不理想。为了攻克DNA疫苗免疫效力低下的难题,一些学者已经研制了多种佐剂制品,以提高DNA疫苗对动物疾病免疫保护的能力。该文针对使用佐剂提高DNA疫苗免疫效力的最新概况做一综述。     

DNA疫苗在动物疾病预防中的研究进展

DNA疫苗的出现是疫苗研究史上重大事件,被誉为疫苗研究的第三次革命。DNA疫苗既能激发机体的细胞免疫,也能诱导特异性的体液免疫,在预防和治疗细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病等方面具有广阔的应用前景。利用DNA疫苗预防动物疾病是DNA疫苗发展的一个重要方面,并且在一些重大动物疾病预防研究上取得许多突破。可以肯定,随着人们对DNA疫苗免疫机制深入理解以及提高其诱导特异性免疫应答水平经验的积累,DNA疫苗定会在预防动物各种疾病方面发挥巨大作用。     

鸡群免疫接种常见的错误

设计科学合理的免疫程序，提高免疫应答，避免“免疫空白期和免疫麻痹”是预防感染的关键。在设计免疫程序时应注意以下几点：     

鲤疱疹病毒3型ORF148 DNA疫苗对建鲤鱼苗的免疫保护

鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3)又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus, KHV),是一种高传染性、致死性病毒。为开发新型CyHV-3 DNA疫苗,前期研究中将CyHV-3 ORF148基因插入pEGFP-N1构建重组质粒,在此基础上,本研究通过转染试验、间接免疫荧光试验证实pORF148-EGFP融合蛋白可以在CCB-J细胞系和建鲤体内表达;将重组质粒作为DNA疫苗,肌肉注射免疫建鲤鱼苗,ELISA检测表明免疫pEGFP-ORF148重组质粒可以显著提高建鲤血清特异性抗体水平; RT-qPCR检测显示,免疫pEGFP-ORF148重组质粒后,建鲤脾脏和头肾中的免疫相关基因如IFN-a1、Mx-1、CXCa、CXCR1、TNF-α、IL-1β及IgM基因表达量均显著提高。攻毒实验显示, CyHV-3攻毒21 d后, PBS组、pEGFP-N1组和pEGFP-ORF148组的建鲤存活率分别为30%、35%和85%,免疫pEGFP-ORF148可以显著提高建鲤的存活率(P0.01)。本研究旨在为CyHV-3 DNA疫苗的应用提供理论依据。     

红笛鲷头肾消减cDNA文库的构建与分析

应用抑制性消减杂交技术(SSH)构建红笛鲷(Lutjanus sanguineus)头肾消减cDNA文库,筛选红笛鲷免疫相关基因的EST.以哈氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活疫苗体内诱导红笛鲷为实验组,以注射无菌生理盐水的红笛鲷为驱动组,通过SSH技术构建红笛鲷头肾消减.DNA文库.利用PCR技术和斑点杂交对文库进行筛选,从2 424个含插人片段的阳性克隆中筛选了680个克隆在上海生工进行了序列测定.使用BLASTx和BLASTn工具对获得的ESTs与GenBank数据库进行同源性比较并根据相似性序列的名称通过GO法对ESTs进行注释.结果获得了30个与红笛鲷免免疫防御相关基因的EST,如组织相容性抗原复合物基因(MHC I和MHCII),免疫球蛋白基因(IgH和IgL)、热休克蛋白基因(HSP10,HSP70和HSP90)等.本研究构建了哈氏弧菌灭活疫苗免疫后与正常组织差异表达的消减cDNA文库,并获得一批与红笛鲷免疫防御相关的ESTs,旨在为探讨红笛鲷分子免疫防御机制、筛选参与免疫防御调控相关的功能基因,揭示红笛鲷免疫抗病机制、提高机体抗病力、实现遗传改良奠定基础.