条斑星鲽和圆斑星鲽线粒体12S rRNA与16S rRNA基因序列及其系统分析

采用PCR产物直接测序法分别测定了条斑星鲽和圆斑星鲽线粒体基因组序列,并对12SrRNA和16S rRNA基因核苷酸全序列进行分析,条斑星鲽和圆斑星鲽线粒体12S rRNA的核苷酸序列长度分别为948 bp和949 bp,16S rRNA均为1716 bp。试验结果表明,由12S rRNA和16S rRNA基因所构建的两个系统树的结构基本一致,21种鱼主要分为3个大的分支:鲤形目、鲶形目聚为1支,鲑形目独立聚为1支,鲈形目和鲽形目聚为1大支。鲆鲽类与鲈形目的鲹科、鲷科鱼类聚类在一支,且与鲹科的日本竹荚鱼、大西洋竹荚鱼构成姊妹群,支持鲆、鲽类是从鲈形目分化出来的观点,而同属于鲽形目的鳎科鱼类塞内加尔鳎在12S rRNA树中成为一个独立的分支,在16S rRNA树中聚到鲈形目和鲽形目的分支中,并且与鲈形目关系更近些,鳎类是1个特殊类群,其分类地位有待进一步探讨。线粒体基因组序列已提交到GenBank中,序列号为:DQ403797和EF025506。     

圆斑星鲽线粒体基因组全序列结构及其进化

利用圆斑星鲽(Verasper variegatus Temminck et Schlegel)和相关鱼类的部分线粒体基因序列,设计出6对扩增引物,通过PCR扩增产物直接测序和引物行走(Primer walking)法测定圆斑星鲽线粒体基因组全序列,并对其进行结构与进化分析。圆斑星鲽线粒体基因组序列长17273 bp,其基因序列及构成都与其他硬骨鱼基本相同,包括37个基因(2个rRNA基因、22个tRNA基因和13个蛋白质编码基因)和2个非编码区(控制区和WANCY区)。在22个tRNA基因中,tRNAGln、tRNAAla、tRNAAsn、tRNACys、tRNATyr、tRNASer(第2个)、tRNAGlu和tRNAPro的编码基因位于L链上,其余则位于H链上。在13个蛋白质编码基因中,除了COⅠ基因的起始密码子为GTG外,其余均以ATG为起始密码子。蛋白质编码基因包括具有完整TAA终止密码子的ND1,COⅠ,ATP8,ND4L,ND5,而其他蛋白编码基因则具有不完全终止密码子。在L链上,ND6是仅有的一个蛋白质编码基因。圆斑星蝶的控制区包含1个终止相关序列区(ETAS)、6个中央保守序列区(CSB-A、B、C、D、E、F)和3个保守序列区(CSB-1、2、3)以及长串联重复区(Tandemly repeat sequence)。用NJ法和MP法对5个目22种鱼mtDNA的13个蛋白质编码基因的氨基酸序列进行系统分析,结果显示,圆斑星蝶与石鲽关系最近,鲽形目的鲆、鲽类与鲈形目的科(Carangidae)、鲷科(Sparidae)鱼类亲缘关系较近,而同属于鲽形目的塞内加尔鳎(Solea senegalensis)没有和任何目聚在一起,成为一个独立的分支。圆斑星蝶的基因组全序列序列已提交到GenBank,登录号为DQ403797,控制区单元型序列的GenBank登录号为DQ834444~7。     

养殖新品种——圆斑星鲽的苗种生产

圆斑星鲽（Verasper variegatus）属鲽形目、鲽科、星鲽属，和同属的条斑星鲽（Verasper maseri）极为相似，但圆斑星鲽的背鳍、臀鳍和尾鳍有圆形黑色斑点，而条斑星鲽是暗色的垂直带状斑，两者较容易区别。     

漠斑牙鲆在南方水泥池人工养殖技术

漠斑牙鲆（Paralichthys Lethostigma）隶属于硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲽形目（Pleuronetiformes）、鲽亚目（Plenronectoides）、鲆科（Bothidea）、牙鲆亚科（Paralichthyidae）、牙鲆属（Paralichthys），原分布美国东南部沿海的底栖鱼类，是美洲大约25种鲆鲽类中个体最大的一种，又称美国漠斑牙鲆，俗称南方鲆，     

鲆鲽类产业技术需求调查与建议

一、被调查单位总体概况 在回收的128份问卷中,辽宁29份,河北18份,天律7份,山东57份,江苏6份,福建11份.被调查单位数量分布与鲆鲽类主产区产量分布基本吻合,可反映出产业技术需求总体状况.从养殖单位性质看,被调查的128家养殖生产者中,16家为养殖企业,112家为个体养殖户.从养殖品种及其分布看,被调查养殖单位所养殖的鲆鲽类品种有大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎、星突江鲽、条斑星鲽、圆斑星鲽、漠斑牙鲆以及欧鳎.其中101户养殖了大菱鲆,32户养殖了牙鲆,31户养殖了半滑舌鳎,2户养殖了星突江鲽,6户养殖了条斑星鲽,5户养殖了圆斑星鲽,2户养殖了漠斑牙鲆,1户养殖了欧鳎.     

中国沿海鲆鲽鱼类进化关系研究

为研究中国沿海鲆鲽鱼类的进化关系,利用生物信息学方法,分析了53种中国沿海鲆鲽鱼类以及3种国外沿海鲆鲽鱼的COⅠ基因,采用邻接法(neighbour-joining)和最大似然法(maximum likelihood)构建了系统发生树,并结合形态学特征进行分析。结果与传统的形态学分类基本一致,但也有不同之处:舌鳎科的东方无线鳎(Symphurus orientalis)和多线无线鳎(S.strictus),它们同鳎科聚为一个大的分支;冠鲽科的三斑沙鲽(Samariscus triocellatus)同舌鳎科聚为一支;牙鲆(Paralichthys olivaceus)并没有与牙鲆科的其它鱼类聚为一支,而是同鲽科关系更为密切。     

鲆鲽类疾病概况

鲆鲽类增养殖国外从19世纪末开始研究，主要是欧美一些国家对欧洲鲽进行孵化放流丁作。我国从1959年开始对牙鲆的人工繁育工作。目前全世界养殖的鲆鲽类有牙鲆、大菱鲆、欧洲鲽、庸鲽、星鲽、石鲽、半滑舌鳎（欧鳎）等，养殖规模和产量已经达到一定水平。目前我国的养殖品种幸要是牙鲆和大菱鲆为主，石鲽、黄盖鲽等也有养殖。     

野生圆斑星鲽的驯养试验

野生的圆斑星鲽必须经过驯养后才能做为人工养殖亲鱼使用。野生亲鱼开口摄食是驯养成功的关键因素之一,活虾和冰鲜虾是野生圆斑星鲽很好的开口饵料。营造好的驯养环境,与人工繁殖的鲆鲽类混养和及时药物处理可缩短驯养时间和提高成活率。试验共驯养野生的圆斑星鲽27尾,最终成活20尾,成活率为74.1%。     

天津地区圆斑星鲽工厂化养殖技术

<正>圆斑星鲽(Verasper variegatus)属鲽形目、鲽科,星鲽属,俗称花斑宝、花豹子、花边爪,分布于黄、渤海。圆斑星鲽属冷温性大型底栖鱼类,身体呈椭圆形,体形优美,色彩斑斓美丽,是我国北方传统的名贵鱼种,民谚"春花秋鳎"的"花"即花斑宝(圆斑星鲽)。圆斑星鲽个体较大,生长速度快,肉质细嫩鲜美,富含多种维生素和微量元素,此外圆斑星鲽适应性强、抗     

8种鲆鲽鱼种间遗传距离与杂交亲和性的相关性分析

2005-2008年,先后进行了褐牙鲆♀×夏牙鲆♂、褐牙鲆♀×石鲽♂、褐牙鲆♀×条斑星鲽♂、褐牙鲆♀×大菱鲆♂、大菱鲆♀×条斑星鲽♂的正反交试验,并收集了文献报道的研究资料,包括条斑星鲽×圆斑星鲽、石鲽×星斑川鲽、夏牙鲆×漠斑牙鲆及褐牙鲆×圆斑星鲽的正反交试验结果,对所涉及的8种鲆鲽鱼远缘杂交亲和性进行分析。根据Russell对杂交亲和性的定义,正反交均可行,杂交适合度为1;正反交单向可行,杂交适合度为0.5,正反交均不可行,杂交适合度为0。同时,根据这8种鲆鲽鱼的16S rDNA和COⅠ基因部分序列的差异,估算其种间遗传距离。对8种鲆鲽鱼的种间遗传距离和杂交适合度作相关性分析,二者呈线性负相关(R2=0.81,P<0.01),即杂交的亲和性随种间遗传距离增大而降低。研究表明,鲆鲽鱼的杂交亲和性与其遗传分化程度具有相关性,可以通过种间遗传距离对鲆鲽鱼远缘杂交的亲和性进行预测。     

Distribution of marine birnavirus in cultured marine fish species from Kagawa Prefecture, Japan

To determine the distribution of marine birnavirus (MABV) in cultured populations of different marine fish species, 1291 pooled tissue samples from 2672 fish belonging to 22 species and one hybrid were collected from Kagawa Prefecture, Japan, during 1999-2001. Using cell-culture MABV was isolated from three species: yellowtail, Seriola quinqueradiata Temminck & Schlegel (positive number/sample number, 10/419), amberjack, S. dumerili (Risso) (4/72), and Japanese flounder, Paralichthys olivaceus (Temminck & Schlegel) (41/481). Using PCR on MABV-negative samples, the MABV genome was detected in the same three species [yellowtail (9/409), amberjack (4/68) and Japanese flounder (93/440)] and two additional species, spotted halibut, Verasper variegatus (Temminck & Schlegel) (5/11), and goldstriped amberjack, S. lalandi Valenciennes (1/5). These MABV-positive species can be taxonomically divided into two groups: the genus Seriola and flatfish. In Japanese flounder, MABV was detected during all seasons, and the infection rate was correlated with water temperature. Aquaculture sites with MABV-positive fish were evenly distributed over the surveyed area, suggesting that MABV is widely distributed at aquaculture sites in Kagawa Prefecture. The nucleotide sequence at the variable region, the VP2/NS junction, revealed that the 39th base mutation occurs host-specifically for flatfish. Flatfish are suspected to be the main reservoir of MABV and might be responsible for establishing the infection cycle in aquaculture environments.     

牙鲆和半滑舌鳎5S rDNA基因的染色体定位及鲽形目5种鱼类的分子系统学分析

利用荧光原位杂交(FISH)技术将5S rDNA基因定位在牙鲆和半滑舌鳎染色体上,结果表明,5S rDNA基因在雌、雄性半滑舌鳎的一对同源染色体上分别存在2个杂交信号位点;在二、三倍体牙鲆的同源染色体上分别存在2个和3个杂交信号位点,杂交信号明显且特异。本研究首次将5S rDNA基因定位在半滑舌鳎和三倍体牙鲆的染色体上,为牙鲆及半滑舌鳎倍性鉴定、染色体鉴别提供了有效方法。此外,根据牙鲆5S rDNA基因编码区序列设计引物,扩增出大菱鲆和半滑舌鳎5S rDNA基因编码区序列,与鲽、塞内加尔鳎、大口黑鲈、七鳃鳗的5SrDNA基因序列进行同源性比较后发现,5种鲽形目鱼类5S rDNA基因序列同源性高达98.3%,系统发生分析结果显示5种鲽形目鱼类聚为一支;各序列中GC含量均显著高于AT含量。     

雌核发育与正常二倍体条斑星鲽胚胎发育比较研究

在用牙鲆精子诱导条斑星鲽雌核发育的同时,对条斑星鲽单倍体、雌核发育胚胎发育过程进行了观察,并与普通胚胎发育作了比较.观察结果表明,(1)单倍体胚胎,卵裂开始至64细胞期,发育速度较普通胚胎发育发育速度明显缓慢,至多细胞期发育速度相同,历时14 h;到达高囊胚期比普通二倍体慢1.5 h,到达低囊胚期发育速度相同,历时31 h;到达原肠末期、神经胚期、晶体形成期历时相同,其他发育时期一直处于缓慢状态;孵化仔鱼具有明显的单倍体综合症.(2)雌核发育与普通胚胎的发育的特征相比无明显区别,在卵裂期发育速度明显迟缓,但在囊胚期以后,所用时间基本相同;孵化时间比普通胚胎长约1 h.(3)与普通胚胎相比,雌核发育胚胎、单倍体胚胎孵化率较低,仔鱼畸形率高.     

3种鲆鲽鱼精子和卵子表面形态结构的比较研究

使用扫描电镜对牙鲆、大菱鲆和条斑星鲽的精子和卵子表面形态结构进行比较研究。观察结果表明,3种精子形态结构在核前凹陷位置、精子头部形状、中段线粒体数及鞭毛长度4个方面存在明显差异;3种卵子表面形态结构中,牙鲆和大菱鲆比较相似,而条斑星鲽成熟卵子壳膜具有4点特异性:外表面粗糙、有点状和斑块状突起、网纹较深;壳膜上微小孔孔径差距大;卵膜厚度最厚为(3.87±0.24)μm,约为牙鲆和大菱鲆卵膜厚度的2倍;受精孔的管道螺旋层为4~6层,约为前两者的1/2。条斑星鲽与牙鲆和大菱鲆的精卵表面形态结构差异明显。     

暗纹东方鲀线粒体DNA控制区结构和系统发育分析

以暗纹东方(Takifugu fasciatus)肝脏线粒体DNA为模板,参照GenBank中红鳍东方(Takifugu rubripes)线粒体DNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增,获得了暗纹东方线粒体DNA控制区基因(818 bp)及5′端上游的tR-NAPro基因(71 bp)的全序列。控制区碱基组成为T32.2%,C 19.1%,A35.6%,G13.2%。对照其他已报道的鱼类控制区结构,对暗纹东方控制区的结构进行了分析,识别了其终止序列区、中央保守区和保守序列区,找到了终止相关的序列TAS以及保守序列(CSB1,CSB2,CSB3)。CSB1、CSB2序列相对保守,TAS与其回文基序可形成稳定的茎环结构,成为H-链复制延伸时的终止识别位点。同时运用DNA分析软件对暗纹东方与GenBank中其他10多种鱼类的mtDNA控制区序列进行比对,并选取东方属的7种鱼类mtDNA控制区序列构建分子系统树。结果显示控制区基因较适于科鱼类中同属不同种的系统发育分析。     

二长棘犁齿鲷线粒体DNA控制区结构和进化

测定了二长棘犁齿鲷（Evynnis cardinalis）线粒体控制区全序列,并结合从GenBank中下载的9种鲷科鱼类的相应序列,采用ClustalX对控制区结构进行了分析,识别了相应的保守序列,包括终止相关序列ETAS、中央保守区的CSB-F、CSB-E、CSB-E、CSB-C、CSB-B和CSB-A序列,以及保守序列区的CSBl、CSB2和CSB3序列。以副鲈（Paralabrax clathratus）和条斑星鲽（Verasper moseri）为外群,用最大简约法（MP）和邻接法（NJ）构建了系统发育树。结果显示鲷科鱼类构成一个单系类群,二长棘犁齿鲷应该归入赤鲷属,建议有必要对犁齿鲷属和赤鲷属的分类地位重新评估。     

异源精子诱导条斑星鲽雌核发育

用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子，采用紫外线（UV）对精子进行照射使其遗传物质失活，然后与卵子进行授精，可以刺激条斑星鲽鱼卵进行雌核发育，在受精后一定时间采用冷休克处理“受精”卵，抑制第二极体排出成功获得了条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。实验表明，花鲈精子只有经过紫外线照射遗传失活后，才能诱导产生条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。经过大量实验筛选出诱导条斑星鲽雌核发育的最佳条件为花鲈冷冻精子采用80 MJ/cm² 的紫外线照射，然后与条斑星鲽卵子进行授精，在受精后7~9 min，将受精卵放在-1.0~1.5 ℃海水中进行冷休克处理，持续时间为60~90 min，在此条件下，获得的雌核发育二倍体的相对诱导率达40.68%±7.24%。由于不失活精子与条斑星鲽卵形成的杂交胚只能存活到原肠期，而染色体未被成功加倍的胚胎会由于单倍体的致死效应在孵化前后死亡，所以存活的仔鱼全部为条斑星鲽雌核发育二倍体。采用微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析，证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体。首次报道了采用异源冷冻精子诱导条斑星鲽鱼卵进行雌核发育的技术方法，为条斑星鲽性别控制和遗传改良提供了技术手段。     

Pseudoalbinism and ambicoloration in hatchery-reared pleuronectids as malformations of asymmetrical formation

Morphological abnormalities in eye location and/or body coloration are commonly observed in hatchery-reared juveniles of many pleuronectid species, and have become one of the most serious problems in juvenile production for stock enhancement. In this study, these morphological abnormalities of six pleuronectid species—barfin flounder Verasper moseri, slime flounder Microstomus achne, stone flounder Platichthys bicoloratus, starry flounder Pl. stellatus, cresthead flounder Pseudopleuronectes schrenki, and marbled sole Ps. yokohamae—were successfully classified into four morphological types [normal, two types of pseudoalbinism (normal-eye position or top-eye position), and ambicoloration], following the same classification scheme proposed for other two pleuronectids. Based on our results, the characteristics of each morphological type are quite similar among species. It is confirmed that the normal type has the same ocular side and blind side characteristics as those of wild fish, not only in eye position and body coloration, but also in scales or dentition. The pseudoalbino types have the blind side characteristics of wild fish on both sides, with top-eye type in all characteristics, and normal-eye type in all other characteristics other than eye position. The ambicoloration type has all the ocular side characteristics of wild fish on both sides. Therefore, the pseudoalbinism and ambicoloration of hatchery-reared juveniles of pleuronectid species can be considered malformations of asymmetrical formation. Since this process normally occurs during metamorphosis, the term “metamorphosis-related malformation” is proposed for the abnormal formation of juveniles in pleuronectid species.     

条斑星鲽染色体带型研究

开展了条斑星鲽染色体C-带、Ag-NORs带及G-带的研究。结果发现,条斑星鲽染色体显示较为复杂的C-带,有4对染色体整体呈阳性深染,分别为3、13、20、22号染色体;3对具居间C-带,分别为1、4、8号染色体;9号染色体整体显示阴性,其余有大小不一的着丝粒C-带。计算其异染色质含量为54.91%。银染分裂相中Ag-NORs出现的数目以两个的频率最高,达87.5%,与此相一致,在间期核中通过银染表现出两个核仁的间期核数目的频率也最高,故确定条斑星鲽染色体具有1对Ag-NORs,位于亚中部着丝点染色体的短臂上,为端部Ag-NOR。Ag-NORs的数目为1~3个,以出现两个Ag-NOR的频率最高,达87.5%,与此相同的是,在间期核中,通过银染表现出两个核仁的间期核数目的频率也最高。G-带研究显示,条斑星鲽有37条深染带,22条浅染带。