一株海洋产电菌产碱性蛋白酶的初步研究

从浙江省舟山海域潮间带中得到一株产电细菌M2,经过16SrRNA分子鉴定及生理生化试验,初步鉴定该菌为Shewanella属细菌,并命名为Shewanellasp.M2。菌株M2在脱脂奶平板上能产生明显且较大的水解透明圈,通过Folin-酚法进行酶活测定,初始蛋白酶酶活为110U/mL,对其进行紫外诱变处理,最终得到酶活为205U/mL的突变株,酶活提高了86.4%,传代试验结果显示该菌株具有较好的遗传稳定性能。     

紫外诱变选育高活性蛋白酶枯草芽孢杆菌及其降解饲料能力评价

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖池塘底泥中分离的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BC2为出发菌株,利用紫外诱变的方法培育蛋白酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株,并评价其降解饲料的能力。结果表明:(1)经6次紫外诱变,突变菌株B38的透明圈直径(H)与菌落直径(C)之比(H/C值)达到6.42,提高了2.13倍;(2)福林酚法测得B38的蛋白酶活性为86.82 U/m L,是出发菌株BC2的3.14倍,但紫外诱变对B38纤维素酶活性影响不显著;(3)连续传代培养10代后发现B38产蛋白酶和纤维素酶能力保持稳定,证明诱变菌株具有较好的遗传稳定性;(4)利用凯氏定氮法评价B38降解饲料蛋白的能力,发现与BC2相比,B38降解饲料中可溶性蛋白的能力提高了2.57倍,而降解不溶性蛋白的能力变化不大。本研究诱变选育的枯草芽孢杆菌B38为开发优良的水产微生态制剂产品提供了重要的前提和基础。     

太湖秀丽白虾不同生长阶段主要消化酶活性研究

研究了太湖秀丽白虾（Exopalaemon modestus）不同生长阶段的消化酶活性。结果表明,太湖秀丽白虾的生长可分为3个阶段,体质量小于0．1g时,蛋白酶活性维持在较高水平;体质量介于0．1～0．3g之间时,蛋白酶活性呈现不同程度的下降;体质量大于0．4g以后,蛋白酶活性进一步降低;其中脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶活性均很低。成虾肝胰腺、胃和肠3种不同消化器官的消化酶活性差异显著,蛋白酶活性依次为胃〉肝胰腺〉肠,淀粉酶活性则为胃〉肠、肝胰腺。     

一株产低温碱性蛋白酶嗜冷海洋细菌YS-9412-130的分离和培养条件研究

自海水贝类中取样，经分离培养基和酪蛋白培养基复合培养，用检测蛋白酶产生水解圈和Folin-酚碱性蛋白酶活性测定相结合的方法从1000多份样品中初步筛到了产碱性蛋白酶活力高、性能优良的菌株YS－9412－130。对其初步研究结果表明，该菌只能利用有机氮源生长；在接近自然海水盐度、温度20℃、pH在7.0-9.0条件下，菌体生长和产酶较好。     

褐藻胶裂解酶产生菌的发酵优化研究

以筛选的羊栖菜腐败菌系不动杆菌属X8菌株为研究对象,对其产褐藻胶裂解酶的发酵培养条件进行优化研究.结果表明,该菌株最适液体培养基组成为(m/V):0.6%褐藻酸钠,0.7%蛋白胨,0.2% KH_2PO_4,0.2 % NaCl,初始pH 7.0.该菌株于25 ℃,150 r/min 振荡培养16 h后,褐藻胶裂解酶酶活可达157.32 U/ml,较优化前提高了1.59倍.Mg~(2+)、Ca~(2+)和Fe~(2+)对菌株产酶有一定的抑制作用.     

怀头鲇幼鱼摄食前后消化酶活性的变化

试验研究了摄食时间对怀头鲇幼鱼胃、肠道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性的影响。结果表明:摄食后怀头鲇幼鱼胃蛋白酶活性下降,之后开始快速上升至摄食后3 h酶活性达到最高峰,与摄食前相比差异显著(P<0.05);而肠蛋白酶活性一直保持上升趋势,摄食后3 h酶活性达到峰值。摄食前后淀粉酶活性变化趋势明显不同,即胃中淀粉酶活性在摄食后1 h出现明显的降低(P<0.05),但该酶活性很快又迅速上升,到摄食后3 h达到最高峰;肠淀粉酶在摄食后表现为先降低后增加的趋势,摄食后5 h达到最高峰;同时发现,摄食前后胃中脂肪酶活性变化较为剧烈,摄食后3 h达到最高峰,而肠道中脂肪酶活性的变化较为缓慢,说明摄食对胃中脂肪酶活性影响较大。     

一株高产琼胶酶菌株MA-B22的分子鉴定与产酶条件优化

琼胶酶在多糖降解应用中的作用日益重要，而从海洋微生物中筛选琼胶酶高产菌株成为一个重要途径。本研究从养殖的杂色鲍体内分离到一株高产琼胶酶的菌株MA-B22。该菌为革兰氏阴性菌，经16S rRNA序列鉴定表明，与Tamlana agarivorans sp. nov.具有99%同源性，因此初步定为Tamlana sp.。在2216E培养基中该菌株在培养时间60 h，温度25 ℃，起始pH为6.0条件下产酶活性最高。基于上述培养条件，通过单因素和正交实验确定了培养基的最佳基本组成：氮源为牛肉膏（其最适浓度为6.0 ‰），碳源为琼脂（其最适浓度为2.5 ‰），配制培养基的人工海水的最适盐度为25。经培养条件优化后，该菌胞外琼胶酶活力可达1021.79 U/mL，较优化前提高8.82倍。实验首次对Tamlana sp.属的琼胶酶活性进行确定并优化其产酶条件，为构建琼胶酶高产工程菌株提供了基础,并可能为今后鲍养殖提供潜在的益生菌。     

南极微生物产低温蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及部分酶活特性

从南极获得的260株低温细菌中筛选到107株具有蛋白酶活性菌株，其中5株菌所产蛋白酶的活性高于45U／mL。对其进行16S rRNA基因序列的同源性和系统发育分析，结果表明，菌株NJ276、NJ5—9、NJ16—70、NJ345属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)，NJ341属于科尔韦尔氏属(Colwellia)。对其中NJ276、NJ341、NJ16—70、NJ345这4株产蛋白酶南极嗜冷菌的生长及分泌蛋白酶的部分酶活特性进行研究，结果表明：(1)4株菌最适生长、产酶温度均为10℃左右；培养2～5d，嗜冷菌生长、产酶量一直处于较高的状态。(2)4株南极嗜冷菌分泌的蛋白酶的酶活反应最适pH值为9。(3)菌株NJ276、NJ5—9分泌的蛋白酶最适酶活温度为50℃；菌株NJ341、NJ345分泌的蛋白酶最适酶活温度为40℃；在0℃时蛋白酶活性是最高活性的30％左右，蛋白酶热稳定性较差，因此菌株NJ341、NJ345分泌的蛋白酶属于低温蛋白酶。     

工厂化循环水养殖条件下云纹石斑鱼消化道产酶菌的分离鉴定

采用16S r DNA-PCR菌群分离鉴定的方法,对循环水养殖条件下云纹石斑鱼(Epinehelus moara)幼鱼的胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠的菌群结构进行了鉴定,用产酶菌筛选培养法对产消化酶的菌株进行了分离鉴定,并测试了各菌株消化酶的活力。研究发现,云纹石斑鱼幼鱼消化道内可培养的主要菌群为假单胞菌属(Pseudomonas)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和葡萄球菌属(Staphylococcus),其中产消化酶的菌株占可培养菌的55.6%。在产酶菌中,同一株菌产3种酶的有5株;产2种酶的有9株;中肠和后肠的菌株数最为丰富,胃次之,幽门盲囊和前肠菌群种类较少;产脂肪酶的菌株都集中在中肠。产消化酶的菌株主要以产蛋白酶和淀粉酶为主,且产酶量丰富,产蛋白酶活力最高达(87.732±1.134)U/m L;淀粉酶活力为(77.176±0.599)~(73.458±0.574)U/m L;产纤维素酶的菌仅一株,且酶活力较低。分析得知,消化道的菌群结构直接影响了外源性消化酶的种类与活性。本研究为工厂化循环水养殖条件下产酶有益菌的筛选提供了理论依据。     

2株海水鱼源潜在益生菌的分离、鉴定及特性分析

为筛选用于微生态制剂研发的海水鱼源益生菌，本研究对海捕野生许氏平鲉(Sebastes schlegelii)和大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)的消化道内壁黏膜样品进行细菌分离纯化，获得80株可培养细菌。使用选择性培养基对菌株的产酶能力进行测定，选取海水鱼常见病原菌为指示菌测定分离菌株产物的抑菌活性，筛选出2株潜在益生菌TS2和TH8，并进行菌株的生理生化检测、16S rDNA序列分析、生长特性及其对宿主安全性的研究。结果显示，TS2产蛋白酶(protease)、淀粉酶(amylase)和脂肪酶(lipase)，其无菌培养产物可显著抑制鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harvey)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)的生长。TH8产蛋白酶和脂肪酶，其无菌培养产物可显著抑制鳗弧菌、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌、假交替单胞菌、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)的生长。基于细菌生理生化检测和16S rDNA序列比对，鉴定TS2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，TH8为河流漫游球菌(Vagococcus fluvialis)。TS2在温度为15~40 ℃、NaCl浓度为0~0.08 g/L、pH为5~9时生长较快，6 h进入对数期，26 h后进入稳定期；TH8在温度为20~40 ℃、NaCl浓度为0~0.08 g/L、pH为5~12时生长较快，2 h进入对数期，14 h后进入稳定期。菌株对同源宿主的安全性检测发现，TS2和TH8在108 CFU/mL浓度条件下对同源宿主是相对安全的。筛选的枯草芽孢杆菌TS2、河流漫游球菌TH8产酶能力强，其产物能抑制多种病原菌的生长，具有广温、广盐、耐酸碱、生长速度快等优点，可作为候选菌株开发为微生态制剂，研究结果为其在海水鱼养殖业中的应用提供数据支撑。